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HPLC测定不同叶型五指毛桃中补骨脂素的含量



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的存在。此外,钻叶龙胆挥发油中含量较高的 15-
冠醚-5 是能够络合碱金属和碱土金属离子以及一
些中性分子的中性配体,广泛应用于核能工业、电子
电化学工业、感光材料工业及其他生产领域[8];肉
豆蔻酸还可以作为生产表面活性剂的原料,也可用
于消泡剂、增香剂以及配制各种食用香料;叶绿醇可
作为合成维生素 K1 以及维生素 E 的中间体
[9]。因
此挥发油成分也应该是钻叶龙胆的活性成分之一,
应受到重视以更好地控制该药材质量。
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[责任编辑 顾雪竹]
[收稿日期] 20120905(014)
[基金项目] 广西教育厅科研基金项目(200911MS195) ;玉林师范学院高层次人才科研启动基金(G20120017)
[通讯作者] * 王晓平,教授,从事药理学研究,E-mail:sywxp@ 163. com
HPLC测定不同叶型五指毛桃中补骨脂素的含量
王晓平1* ,黄翔1,陆奇丰2,岑业文1
( 1. 玉林师范学院,广西 玉林 537000; 2. 西南大学农学与生物科技学院,重庆 400715)
[摘要] 目的:建立不同叶型五指毛桃中补骨脂素含量的高效液相色谱测定方法。方法:采用 Extend-C18色谱柱(4. 6
mm × 250 mm,5 μm) ;流动相 乙腈-水 35∶ 65;流速 1. 0 mL·min -1;柱温 35 ℃,检测波长 245 nm。结果:补骨脂素对照品在
1. 04 ~ 104 mg·L -1范围内呈良好曲线关系,线性回归方程 Y = 72. 150 6X + 133. 483 0,r = 0. 999 1,平均加样回收率为 93. 6%,
RSD 1. 975%。结论:不同叶型的五指毛桃中补骨脂素的含量有差异,该方法操作简便、准确性高、重复性好,可用于五指毛桃
药材的质量评价。
[关键词] 五指毛桃;补骨脂素;HPLC;不同叶型
[中图分类号] R284. 1 [文献标识码] A [文章编号] 1005-9903(2013)05-0093-03
Determination of Psoralen of Radix Fici
in Different Leave Type by HPLC
WANG Xiao-ping1* ,HUANG Xiang1,LU Qi-feng2,CEN Ye-wen1
(1. Yulin Normal University,Yulin 537000,China;
2. College of Agronomy and Biotechnology,Southwest University,Chongqing 400715,China)
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第 19 卷第 5 期
2013 年 3 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 19,No. 5
Mar.,2013
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2013.05.051
[Abstract] Objective:To establish the method by HPLC for determination of psoralen in different leave
type of Radix Fici. Method:HPLC was conducted with a Extend-C18 (4. 6 mm ×250 mm,5 μm)column,the
mobile phase was acetonitrile-water (35∶ 65)with the flow rate of 1. 0 mL·min -1 . The column temperature was
35 ℃ and the detection wavelength was set at 245 nm. Result:Psoralens linearity was good in a range of 1. 04-104
mg·L -1,The linear regression standard curve was Y = 72. 150 6X + 133. 483 0 (r = 0. 999 1)and the average
recovery was 96. 3% with RSD 1. 975% . Conclusion:Psoralen is different in quantity of different leave type of
Radix Fici. This method is simply and accurate,and has good repeatability. It could be used to quality evaluation
method for Radix Fici.
[Key words] Radix Fici;psoralen;HPLC;different leave type
五指毛桃 Radix Fici 为桑科植物粗叶榕 Ficus
hirta Vahl.的干燥根,又名南芪、五爪龙、五指牛奶、
土北芪[1],主要分布于广东、广西等省区。其味辛、
甘,性平,具有健脾利湿、益肺止咳、舒筋通络的功
效,用于治疗脾虚浮肿、食少无力、肝炎、风湿痹痛、
肺痨咳嗽等症[2]。五指毛桃主要含补骨脂素、β-谷
甾醇、β-胡萝卜苷、十六酸、十八酸、芹菜素、木犀草
素等化合物[3-4],补骨脂素为其主要有效活性成
分[5-6]。现代研究表明补骨脂素具有抗菌、抗病毒、
抗凝血、抑制肿瘤、免疫调节等作用[7-8]。为进一步
丰富五指毛桃研究资料,本研究采用 HPLC 对不同
叶型五指毛桃补骨脂素的含量进行了测定。
1 材料
1. 1 试药 补骨脂素对照品(批号 110739-200613,
中国药品生物制品检定所) ,乙腈(色谱纯,美国
Fisher公司) ,超纯水,其他试剂均为分析纯。五指
毛桃样品采自广西玉林各县市,经玉林师范学院王
晓平教授鉴定为桑科植物粗叶榕 Ficus hirta Vahl.
的干燥根。上述样品经烘干粉碎后过 40 目筛备用。
1. 2 仪器 高效色谱仪(安捷伦,HP1200) ,二极管
阵列检测器,Extend-C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm,
5 μm,安捷伦) ,FA2104N 型电子分析天平(上海精
密科学仪器有限公司) ,KQ5200 型超声波清洗器
(昆山市超声仪器有限公司)。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Extend-C18色谱柱(4. 6 mm × 250
mm,5 μm) ,流动相乙腈-水 35 ∶ 65,流速 1. 0 mL·
min -1,柱温 35 ℃,检测波长 245 nm。在上述色谱
条件下,补骨脂素的保留时间约在 10 min,对照品和
五指毛桃样品 HPLC图谱见图 1。
2. 2 补骨脂素对照品标准曲线制作 精密称量补
骨脂素 10. 4 mg置于 10 mL量瓶中,甲醇溶解,定容
至 10 mL,精密量取该溶液分别制成 1. 04,5. 2,
10. 4,20. 8,41. 6,83. 2,104 mg·L -1的系列对照品溶
A.对照品;B.样品;1.补骨脂素
图 1 五指毛桃样品 HPLC
液。精密吸取该系列对照品溶液各 10 μL,注入液
相色谱仪,测定峰面积。以峰面积积分值为纵坐标,
补骨脂素对照品量为横坐标进行线性回归,求得回
归方程为 Y = 72. 150 6X + 133. 483 0(r = 0. 999 1) ,
线性范围 1. 04 ~ 104 μg。
2. 3 五指毛桃供试样品制备 精密测定五指毛桃
样品粉末 1 g,置于 50 mL的三角瓶中,精密量取 10
mL甲醇,称质量,置于超声波清洗器中超声提取 30
min,冷却至室温,用甲醇补足损失质量,0. 22 μm微
孔膜滤过,取续滤液[8]。
2. 4 精密度考察 精密吸取 41. 6 mg·L -1的对照
品溶液 10 μL,注入液相色谱仪,测定峰面积,重复
测定 5 次,求得平均峰面积为 3 219. 262 5,RSD
0. 60%,表明该仪器精密度良好。
2. 5 稳定性考察 精密吸取同一批次供试样品溶
液 10 μL,分别于 0,2,4,8,12,24 h 进样测定,补骨
脂素平均峰面值 RSD 0. 65%,表明供试品溶液在 24
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第 19 卷第 5 期
2013 年 3 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 19,No. 5
Mar.,2013
h内稳定。
2. 6 重复性考察 取 5 份同一批次的五指毛桃
1 g,按 2. 3 项的供试样品制备方法制备,分别测定
补骨脂素的含量,求得 RSD 1. 91%,表明此方法的
重复性良好。
2. 7 加样回收率试验 精密加入 1 mL含有补骨脂
素 208 mg·L -1的对照品溶液,挥发至干后,精密称
取 6 份同一批次已知补骨脂素含量的五指毛桃
0. 5 g,按 2. 3 项的供试样品制备方法制备,进样测
定,得平均回收率为 93. 46%,RSD 1. 975%,表明该
试验回收良好。结果见表 1。
表 1 补骨脂素加样回收率试验测定
样品质量
/ g
样品含量
/μg
加入量
/μg
测得量
/μg
回收率
/%
平均值
/%
0. 539 2 252. 11 208 428. 57 93. 10
0. 513 0 239. 86 208 432. 60 96. 60
0. 520 3 243. 27 208 424. 22 94. 01
93. 46
0. 513 8 240. 23 208 404. 64 90. 28
0. 541 8 253. 32 208 435. 52 94. 41
0. 598 3 279. 74 208 444. 51 91. 14
2. 8 样品含量测定 取五指毛桃样品粉末 1 g 分
别精密称取后,按 2. 3 项下制备供试品溶液,以 2. 1
项的色谱条件进样测定,测得各样品中补骨脂素的
含量,结果见表 2。
表 2 五指毛桃样品中补骨脂素含量测定 μg·g - 1
样品 补骨脂素 样品 补骨脂素
不裂叶型茎 0 不裂叶型根 157. 49
三裂叶型茎 0 三裂叶型根 467. 56
五裂叶型茎 0 五裂叶型根 634. 22
3 讨论
五指毛桃因疗效独特而在岭南地区广泛应用,
民间多以五指毛桃根入药。其主要成分补骨脂素作
为评价五指毛桃质量的重要依据已成共识[9]。本
研究结果表明,野生不同叶型五指毛桃药材中补骨
脂素含量差异较大,其中以五叶裂型五指毛桃中补
骨脂素最高,含量为 0. 634 22 mg·g -1。三叶裂型五
指毛桃含量次之,含量最低为不裂叶型五指毛桃,证
明叶裂数越多,补骨脂素含量越高,这与刘春玲等人
结果一致[10]。五指毛桃茎中不含补骨脂素,这与民
间以五指毛桃根入药的习俗提供了科学依据,同时
也为药材市场采收五指毛桃提供参考。目前,药材
市场上出售的五指毛桃来源地和采收季节的不同都
会影响补骨脂素的含量[11],有一些商家还将五指毛
桃根与茎混合出售,大大降低五指毛桃的药用效果,
故应对五指毛桃建立质量控制体系,以监管药材市
场五指毛桃的质量。本实验采用 HPLC 可快速测定
五指毛桃中补骨脂素含量,为五指毛桃药材的质量
检测提供实验依据。
五指毛桃作为食药同源的野生植物,具有一定
的营养功效,应对其进行更深入的研究,以更充分的
了解五指毛桃的药用及营养价值,为进一步开发五
指毛桃提供实验依据。
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[责任编辑 邹晓翠]
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