全 文 ：第 24卷第 2期　　　　　　　　　　　　　　　　　中南民族大学学报 (自然科学版 )　　　　　　　　　　　　　　　　　 Vol. 24 No. 2
2005年 6月　　　　　　　　　　 Journal of Sou th-Cen tral Universi ty fo r Nationali ties( Nat. Sci. Edi tion )　　　　　　　　　　 Jun. 2005
⒇
鄂西藤茶中总黄酮的提取及含量测定
成凤桂　欧知义
(中南民族大学 化学与材料科学学院 分析化学国家民委重点实验室 ,武汉 430074)
摘　要　分别以甲醇、乙醇和水作提取剂 ,在回流加热条件下提取藤茶中的总黄酮 ,并以自制并经纯化的二氢杨梅素为对照
品 ,采用 UV法 ,在波长 291nm处测定藤茶中总黄酮的含量.结果表明:测定线性范围为 0～ 12. 2mg /L, r= 0. 999 6; 3种
提取剂的提取得率相近 ,均在 35% ～ 39% 讨论了在不同温度、不同时间、不同体积比的条件下 ,以水作提取剂 ,对总黄酮提
取得率的影响 .本测定法快速、简便、稳定、准确、可靠 ,可作为该药材的质量检测控制方法 .此法未见报道 .
关键词　藤茶 ;总黄酮 ;提取 ;测定
中图分类号　 O657. 3　文献标识码　 A　文章编号　 1672-4321( 2005) 02-0019-04
Extraction and Determination of Total Flavonoid
in A. Megalophylla Diels of Exi
Cheng Fenggui　Ou Zhiyi
Abstract　 In this paper , the get ting ratio o f to tal flav ono id in the A . megalophylla Diels with me thano l, ethano l
and w ater as ex tracting so lv ents by hea ting flow -back w as studied. The to tal flav onoid w as determined by UV
spect ropho tomet ry a t the waveleng th o f 291nm with dih ydromyricentin a s contrast. The experimental results indi-
ca ted tha t the linear range w as from 0～ 12. 2mg /L, r= 0. 999 6 and that total g etting ra tio of the flav onoid with
triple ex t racting so lv ents was similar ( 35% ～ 39% ) . The influence o f to tal g etting ratio of the flav onoid with wa ter
as ex tr acting solv ent at dif ferent ex t racting tem perature , time, and vo lume o f ex t racting so lv ent w as discussed,
This me thod is rapid, simple, stable and accurate, reliable. This method can be used to detect the content o f tota l
flav onoid and cont rol the quality of A .megalophylla Diels.
Keywords　 A .Megalophylla Diels; to ta l flavonoid; ex t raction; determina tion
Cheng Fenggui　 Pro f, Key Labo rato ry o f Analysis Chemistry o f the State Ethnic Affairs Commission o f PRC,
Colleg e o f Chemistry and Ma teria l Science, SCU FN , Wuhan 430074, China
　　藤茶为葡萄科显齿蛇葡萄属植物 Ampelopsis
g rossedenta ta ( Hand. -M azz. ) W. T. W ang的嫩茎
叶 ,经传统加工揉制、干燥而成 .主要分布于广东、广
西、云南、贵州、湖南、湖北、江西、福建等省区 [1 ] .湖北
省鄂西来凤县山乡百姓将其用于防治感冒、降血压、
发热、中暑、头晕、肠胃不适等症 ,相传已有数百年应
用历史 .经研究 ,藤茶中主要成分为黄酮类的二氢杨
梅素 ( DIH)和杨梅素 ( MYR) [ 2] .文献报道 , 藤茶中
的黄酮能明显拮抗肾上腺素 ( N A)和高 K+所致的兔
主动脉条收缩反应 ,且毒性低 [3 ] , 并有祛痰止咳、降
血压和保肝及抗菌、抗癌、止咳、祛痰、利尿等作
用 [ 4, 5] .由于其药用价值高 ,对其总黄酮的提取及含量
测定研究具有十分重要的意义 .目前已报道的该药材
中黄酮醇类化合物含量测定方法有 HPLC法 [6 ]、薄
层扫描法 [7 ]、分光光度法 [8 ]等 .为充分开发利用此药
材 ,控制其质量 ,本文分别以甲醇、乙醇和水作提取
剂 ,并研究了以水作提取剂时不同温度、不同时间、不
同体积比的条件下提取藤茶中总黄酮 ,以自制并经纯
化的二氢杨梅素为对照品 ,采用 UV 法 ,在波长
291nm处对藤茶茎及叶中的总黄酮进行了含量测
定 .该法未见报道 .
1　实验部分
1. 1　材料、仪器及试剂
藤茶 (湖北来凤县富硒藤茶厂提供 ) , Lambda 35
型紫外 -可见分光光度计 ( PE公司 ) , FA 2004N电子
⒇ 收稿日期　 2005-02-23
作者简介　成凤桂 ( 1946-) ,女 ,教授 ,研究方向: 有机及生物分析化学 , E-mail: cfg ozy@ yahoo. com. cn
天平 (上海天平仪器厂 ) ,甲醇 ( AR) ,无水乙醇
( AR) , 95%乙醇 ( AR) ,石油醚 ( AR) ,二氢杨梅素
(自制 ) ,三氯化铝 ( AR) ,硅胶 GF254 ,羧甲基纤维素
钠 ( CMC, AR)
1. 2　实验方法
1. 2. 1　总黄酮的提取
( 1)甲醇、乙醇提取 . 取经过粉碎的干燥藤茶 5g
放入烧杯中 ,用 100m L的石油醚水浴加热回流 2h,
滤出石油醚 .在脱脂后的残渣中加入 100mL甲醇 (或
乙醇 ) ,水浴加热回流提取一定时间后过滤 ,滤液小心
于恒温水浴中蒸除甲醇 ,浓缩并定容至 50mL,精密
吸取此溶液 1mL,用甲醇 (或乙醇 )稀释并定容至
10mL,作为待测溶液 .
( 2)水提取 . 分别取经过粉碎的干燥藤茶各 5g ,
加入指定体积的水 ,在指定的水浴温度中加热回流提
取不同的时间 ,趁热抽滤 ,洗涤 ,滤液立即用水定容至
1 000mL,备用 .
( 3)用沸水浸泡 . 分别称取 5g藤茶放入烧杯
中 ,倒入一定体积的沸水 ,让其在室温 ( 21℃ )下分别
放置 15、 30和 45min,抽滤后立即用水定容至 1
000mL,备用 .
1. 2. 2　紫外分光光度法测定总黄酮的含量
( 1)对照品溶液的制备 . 由饱和的 Ca( O H) 2溶
液提取藤茶得黄色粉末粗品 ,经乙醇 -水 3次重结晶
得到对照品 . 精密称取此对照品 50. 9mg,加入 95%
乙醇溶解 ,定容至 50mL,制成 1. 018g /L的溶液作为
标准溶液 .
( 2) 样品溶液的测定 .精密吸取适量的待测溶
液 ,用水稀释至 100mL,摇匀 ,然后在 291nm处测定
其吸光度 .
( 3) AlCl3显色法 . 测定总黄酮 .同文献 [9 ] .
1. 2. 3　薄层法分离 3种提取剂待测液中的组分
将硅胶和 CMC溶液按 1∶ 3比例混合调匀 ,研
磨 ,铺板 ,室温下自然干燥后 ,把硅胶板置于 105℃的
烘箱中活化 0. 5h,取出 ,置于干燥器中冷却 ,备用 .用
甲苯、乙酸乙脂和甲酸 ( 10∶ 8∶ 5)作混合展开剂 ,用
对照品溶液、甲醇、乙醇和水提取液点样 ,并用吹风机
吹干 ,经层析后取出 ,吹干后在紫外灯 ( 254nm )下观
察并用硫酸-香兰素显色 .
2　结果与讨论
2. 1　直接 UV法与 AlCl3显色测定法的比较
实验发现 ,应用文献报道的 AlCl3显色法测定藤
茶中总黄酮的含量 ,加入 AlCl3后溶液吸光度不很稳
定 ,须要控制时间在 40～ 50min内测定 .这样测定较
多样品时很难控制好时间 ,给测定带来一定误差 ,而
且用 AlCl3显色法仍然要在紫外区 375nm处测定 .
为考察能否不用 AlCl3显色而直接在 UV区测定总
黄酮的含量 ,将藤茶中的主要成份 DIH为样品溶液 ,
在紫外区直接扫描并将其与 AlCl3显色后的扫描图
对照 ,并分别制作了 2种测定方法的吸光度与时间的
曲线 ,结果见图 1和图 2.
a-DIH, b-DIH+ AlCl3
图 1　 DIH溶液及其与 AlCl3显色的 UV图
Fig1　 UV spect rum of DIH solu tion and
　 i t s color reaction wi th AlCl3
B: DIH+ AlCl3 , C: DIH
图 2　 DI H溶液和 DIH与 AlCl3显色溶液的时间曲线
Fig 2　 Time curve of DI H solut ion and it s
　 color reaction w i th AlCl3
图 1为二氢杨梅树皮素对照品溶液 (曲线 a )和
该溶液用 AlCl3显色后 (曲线 b)的 UV-可见光谱的
扫描图 .从图 1可看出 ,用 AlCl3显色后的吸收曲线
于 375nm处与未显色时 ΔA相差最大 ,但其吸光度
A很小 ,若从 AlCl3与黄酮反应而显色考虑 ,应用此
波长处测定似乎确当些 (可去除基质的干扰 ) ,但是在
实验中发现 AlCl3显色法稳定性较差 ,且吸光度小 ,
灵敏度低 ,必须严格控制显色后的测定时间 45min左
20　　　　　　　　　　　　　　　　　　中南民族大学学报 (自然科学版 ) 第 24卷
右 (如图 2中 B所示 ) ,这给批量测定带来很大的困
难 ;而二氢杨梅树皮素本身在 291nm处有一强吸收
峰 ,并经实验考察此处的吸光度很稳定 (如图 2中 C所
示 ) ,而显色后 291nm吸收峰红移但吸光度几乎没有
改变 ,因为此处仍为 UV区 , A又没有增大 ,所以没有
必要显色 .可直接于 291nm处测定 ,因藤茶中黄酮的
主要成分为二氢杨梅树皮素 (其含量占总黄酮的 70%
以上 ) ,因此处 A值大 ,可显著提高测定的灵敏度 .
能否不经显色直接于 291nm处测定 ,关键是提取
液中其它非黄酮类组分有无干扰 .为此 ,考察了常用的
3种溶剂 (水、甲醇、乙醇 )的提取液在 291nm处的吸
光度 , 3种溶剂提取液的 UV图可看出 ,吸收峰的走向
完全一致 ,且在 291nm处均有最大吸收 .其次 ,将同一
浓度的溶液 ,同时比较了用 AlCl3显色法与直接 UV
法测定其总黄酮含量 ,结果如表 1所示 .
表 1　 2种测定方法的结果比较
Tab 1　 Com paris on w ith resul ts of tw o methods
提取剂 (1m L) 直接测定法含量 /μg AlCl3显色法含量 /μg
水 15. 63 15. 40
甲醇 6. 36 6. 23
乙醇 5. 61 5. 47
2. 2　标准曲线
二氢杨梅树皮素对照品浓度在 2. 036～
12. 216 mg /L范围内 ,回归方程为 A= 0. 003 71+
0. 047 22C ,相关系数 R= 0. 999 3,表明线性关系
良好 .
2. 3　影响藤茶中总黄酮提取得率的因素
2. 3. 1　不同提取剂的影响
在 291nm的波长处 ,分别测定甲醇、乙醇和水 3
种不同提取剂提取 3h所获得的总黄酮得率 .结果如
表 2所示 .
表 2　不同提取剂的黄酮提取得率
Tab 2　 Gett ing ratio of total f lav one wi th di ff eren t ex tracting ag eents
提取剂 1次提取得率 /% 3次总提取得率 /%
甲醇 29. 40 34. 72
乙醇 23. 15 36. 96
水 33. 81 39. 36
　　由表 2可以看出 , 甲醇、乙醇和水 3种不同的
提取剂所提取的总黄酮得率以水提取为最高 ,且水
是无毒、无味、价廉的良好溶剂 ,因而水泡藤茶确实
可将大量黄酮浸泡出来 .文献报道广西瑶族藤茶的
总黄酮的含量高达 40% [8 ] ,从上述结果来看 ,湖北
来凤县富硒藤茶总黄酮的含量也较高 .
2. 3. 2　水提取的影响因素
( 1) 温度的影响 . 在 291nm的波长处 ,分别测定
在 60、 80和 100℃的回流温度下 ,用 200mL的蒸馏水
提取 5g藤茶 3h,每份分别提取 3次 .测定结果如表 3
所示 .由表 3可看出温度越高总提取率越高 ( 100℃时
最高 ) ,每种温度下均是第 1次提取率最高 ,但随着温
度升高 ,第 2次和第 3次的提取率反而降低 ,这可能是
由于随着温度升高第 1次提取率升高较多 ,残渣中所
含二氢杨梅树皮素随之下降较多所至 .
表 3　回流温度的影响
Tab 3　 Effect of temperatu re by h eating f low -back
温度 1次得率 /℃ 2次得率 /% 3次得率 /% 总得率 /%
60 11. 85 7. 86 7. 91 27. 62
80 23. 42 5. 01 1. 17 29. 60
100 33. 81 4. 79 0. 75 39. 36
　　 ( 2)时间的影响 .分别测定 100℃时 200mL水
提取 1、 2、 3h的 5g样品中的黄酮含量 ,结果如表 4
所示 .表 4可知 ,在 100℃的条件下 ,总提取得率除
1h低一些 , 2h与 3h相差不大 ,第 1次提取得率随
着提取时间的增加 ,有所上升 ,到 2h以后变化不大 ,
从第 2次提取也能看出此变化 ,由于 1h第 1次提取
得率相对较低 ,所以第 2和第 3次得率相对较高 .提
取 2h比提取 3h的第 2次得率要高 ,这是因为提取
3h的第 1次得率较高 ,残渣中所剩余的黄酮类物质
较少所至 .第 3次的得率都较小 ,且三者差别不大 ,
说明经 2次提取已经提取得较为完全 .
表 4　提取时间的影响
Tab 4　 Ef fect of ext raction time
时间 /h 1次得率 /% 2次得率 /% 3次得率 /% 总得率 /%
1 27. 79 5. 70 0. 98 34. 47
2 31. 43 5. 99 0. 92 38. 34
3 33. 81 4. 79 0. 75 39. 36
　　 ( 3) 水的体积的影响 . 分别测定在 100℃的温度
下 ,用 100、 150和 200mL的水提取 3h的溶液 .结果
见表 5.如表 5所示 ,在提取时间足够长 ,温度较高的
条件下 ,不同的提取剂体积得到的总提取得率逐渐缓
慢上升 .随着提取剂体积的增加 ,第 1次提取率逐渐增
加较快 ,但第 2次和第 3次得率呈下降趋势 ,就是因为
水体积大的第 1次提取黄酮较完全所致.
表 5　水的体积的影响
Tab 5　 Effect of th e v olume of water
体积 /m L 1次得率 /% 2次得率 /% 3次得率 /% 总得率 /%
100 25. 56 6. 92 1. 45 33. 93
150 31. 46 5. 10 0. 99 37. 55
200 33. 81 4. 79 0. 75 39. 36
　　综上所述 ,温度的影响较大 ,其他如提取剂体积
和时间也有影响 ,为了得到最大的提取得率和最小
的成本 ,我们选择 100℃ , 200m L(即藤茶质量与水
体积之比为 1∶ 40) ,提取 3h为较佳提取条件 .
( 4)沸水浸泡待测液的测定 . 不回流加热 ,直
21第 2期　　　　　　　　　　　　　　成凤桂 ,等: 鄂西藤茶中总黄酮的提取及含量测定　　　　　　　　　　　　　　　　
接用煮沸的 200mL水浸泡 5g藤茶若干份 ,在室温
( 21℃ )下分别放置 15、 30和 45min后测定 ,结果如
表 6所示 .
由表 6可见 ,当用沸水浸泡时 ,黄酮类物质的浸
出得率较高 ,虽然比加热回流提取的为低 ,但其实际
浸出量也是比较大的了 .从时间的影响来看 ,浸泡的
时间长 ,应该浸出得率增大 ,但是实际上时间越长 ,
浸出得率反而变低 ,这是因为总黄酮在水中的溶解
度随着温度的下降而降低 ,随着浸泡时间的增加 ,在
室温下溶液温度逐渐下降 ,总黄酮由于温度的降低
有部分已经析出来 ,过滤时已和残渣一起被过滤掉 ,
所以留在溶液中的就减少了 .因此沸水浸泡 15min
饮用最佳 .作为保键茶饮料人们应趁热饮 ,才能充分
发挥藤茶的用途 .
表 6　沸水浸泡时间的影响
Tab 6　 Ef fect of time by infusion in boiling w ater
浸泡时间 /min 15 30 45
浸出得率 /% 27. 90 26. 65 22. 37
2. 4　藤茶的茎和叶中的黄酮含量
分别测定藤茶茎、叶 (均是 5g )的乙醇提取液 .
结果是茎的黄酮得率为 12. 67% ,而叶的黄酮得率
为 36. 96% ,所以在相同条件下 ,藤茶中不同部位的
总黄酮的含量是不同的 .叶的黄酮含量约是茎的 3
倍 ,为制定和监控藤茶的质量提供了又一依据 .
2. 5　薄层色谱法分离各提取液的成分
应用薄层色谱法分离甲醇、乙醇和水提取液的结
果见图 3(水提取液的浓度较稀 ) .由图 3可以看出 ,甲
醇、乙醇和水的提取液的主要成分都是二氢杨梅素 ;同
时也还存在少许其它成分 ,甲醇和乙醇提取的溶液中
含有少量的非极性物质 ,而水提取的溶液中含有少量
的极性物质 ,这些组分的结构有待于进一步的研究 .
A-对照品提取液　　 B-甲醇提取液
C-乙醇提取液　　　 D-水提取液
( 1) dih yd romyricetin　 ( 2) m yricetin
图 3　不同提取液的薄层图
Fig 3　 TLC spect rum of dif f erent ext ract
3　结束语
( 1)以自制并经纯化的二氢杨梅素为标准品 ,
采用紫外分光光度法 ,在波长为 291nm处测定藤茶
中总黄酮的含量 ,无论是甲醇、乙醇还是水提取液 ,
准确度与 AlCl3显色法基本一致 .本法不仅稳定 ,灵
敏度高 ,方法简便 ,而且节约测定时间和试剂 ,为测
定藤茶中总黄酮含量提供了良好的方法 .
( 2)用甲醇、乙醇和水作提取剂 ,总黄酮的提取
得率相近 ,均在 35～ 39%左右 .但甲醇毒性大 ,而水
不但无毒 ,不会造成环境污染 ,且成本低 ,提取率高 ,
浓缩后即可析出提取物 .
( 3)影响藤茶中总黄酮提取率的因素有: 提取
的温度、时间、提取剂的体积以及茎和叶所占的比重
等 .温度越高 ,时间越长 ,提取剂的体积越大 ,叶所占
的比重越大 ,提取总黄酮的得率就越高 .
( 4)不保温时 ,随着沸水浸泡时间的增加水中
溶解的黄酮总得率逐渐降低 .经过实验表明 ,沸水浸
泡 15min时 ,总黄酮的得率可达 27. 9% ,在此时饮
用藤茶是最佳的 .
参　考　文　献
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