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藤茶提取物抗慢性肝纤维化作用



全 文 :[收稿日期] 20100709(008)
[基金项目] 广西科技厅攻关课题(0322024-5B)
[第一作者] 欧贤红,博士生,讲师,研究方向:抗肿瘤中草药研究,Tel:13217804787,E-mail:blueeye8081@ 163. com
[通讯作者] * 郑作文,硕士,教授,主要从事抗肿瘤中草药研究,Tel:13877173116,E-mail:oxh1980@ 163. com
藤茶提取物抗慢性肝纤维化作用
欧贤红1,吕林艳2,郑作文2*
(1. 桂林医学院,广西 桂林 541004;2. 广西中医学院,南宁 530001)
[摘要] 目的:观察藤茶提取物(TF)抗慢性肝纤维化的作用及机制。方法:将 Wistar 大鼠随机分为 TF 高(200 mg·
kg -1)、中(100 mg·kg -1)、低(50 mg·kg -1)剂量组,秋水仙碱(colchicine,Colc,0. 1 mg·kg -1)组,模型组和正常组,ig给药。给药
同时各组皮下注射(sc)四氯化碳(CCl4)造模,每周 2 次。于 10 周后,检测大鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT),天冬氨酸转氨酶
(AST),碱性磷酸酶(AKP),白蛋白(ALB),球蛋白(GLB),肝组织羟脯氨酸(Hyp),丙二醛(MDA),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-
Px)及苏木精-伊红(HE)染色后的肝组织病理变化。结果:与模型组比较,TF高、中、低剂量组均能明显降低肝纤维化大鼠血清
中 ALT,AST,AKP,GLB的含量(P < 0. 01)及肝组织中 MDA和 Hyp的含量(P < 0. 05),明显提高血清 ALB水平(P < 0. 01)及肝
组织 GSH-Px活性(P < 0. 01);肝脏组织学检查表明,TF可明显改善肝组织病理损伤程度,其作用呈剂量依赖性。结论:TF 对
实验性慢性肝损伤具有保护肝细胞,减少肝损伤,抗肝纤维化作用。
[关键词] 藤茶;肝纤维化;四氯化碳
[中图分类号] R285. 5 [文献标识码] A [文章编号] 1005-9903(2011)03-0132-03
Anti-hepatiofibrosis Effects of Tengcha Extract
from Ampelopsis grossedentata
OU Xian-hong1,LV Lin-yan2,ZHENG Zuo-wen2*
(1. Guilin Medical University,Guilin 541004,China;
2. Guangxi Traditional Chinese Medical University,Nanning 530001,China)
[Abstract] Objective:To investigate the effects of Tengcha extract(TF)on hepatofibrosis induced by
chronic hepatic injury. Method:Wistar rats were randomized into six groups:TF treatment (200,100 and 50 mg
·kg -1)groups,colchicines treatment(Colc,0. 1 mg·kg -1)group,model group and normal control group. Rats
were injected carbon tetrachloride (CCl4) subcutaneously two times a week to induce hepatofibrosis as well as ig
administration of TF or colchicines. After 10 weeks,the levels of alanine aminotransferase(ALT),aspartate
aminotransferase(AST),alkaline phosphatase (AKP),albumin (ALB),globulin (GLB) in serum and
hydroxyproline(Hyp),malondialdehyde(MDA),glutathione peroxidase(GSH-Px)in liver tissue were determined,
and liver histological changes were investigated by hematoxylin-eosin(HE)staining. Result:Compared with model
group,TF significantly reduced the levels of ALT,AST,AKP and GLB in serum(P < 0. 01),and decreased Hyp,
MDA level in liver tissue (P < 0. 05)while ALB,A /G,GSH-Px were elevated significantly(P < 0. 01).
Pathological examination revealed that TF had therapeutical effect on experimental hepatofibrosis. Conclusion:TF
has better effects on protecting hepatocyte,relieving liver injury and against hepatofibrosis.
[Key words] Tengcha;hepatofibrosis;carbon tetrachloride(CCl4)
·231·
第 17 卷第 3 期
2011 年 2 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 17,No. 3
Feb.,2011
瑶族藤茶系葡萄科蛇葡萄属植物显齿蛇葡萄
Ampelosis grossedentata (Hand. -Mazz.)W. T. Wang 的
嫩茎叶经传统加工揉制、干燥而成。广泛分布于广
西各地以及云南、广东、湖南等地[1]。其性凉味甘、
淡,具有清热解毒、消肿止痛、祛风湿、强筋骨等功
效,主治皮肤癣癞、黄疸型肝炎、感冒风热、咽喉肿
痛、急性结膜炎、痈疔等[2]。从藤茶中提取的主要活
性成分(TF),前期研究表明其有明显的保肝降酶作
用。本文报告 TF 抗慢性肝损伤肝纤维化作用及机
理的研究结果。
1 材料
1. 1 动物 180 ~ 230 g清洁级健康 Wistar 大鼠,雌
雄各半,由广西区药品检验所提供,生产许可证号
SCXK(桂)2003-0001。
1. 2 药品与试剂 TF由广西中医学院中药化学教
研室提供,含量为 89%。秋水仙碱片:昆明制药集
团股份有限公司生产,批号 20040266。CCl4:天津
市博迪化工有限公司生产,批号 20040710。本实验
所用试剂及试剂盒均购自南京建成生物工程研究
所,批号分别为丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨
酶(AST)试剂盒,批号 050823;肝组织羟脯氨酸
(Hyp)试剂盒,批号 20051103;丙二醛(MDA)试剂
盒,批号 20051015:谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)
试剂盒,批号 050823,考马斯亮蓝、碱性磷酸酶
(AKP)、白蛋白(ALB)试剂盒,批号 20051021。
1. 3 仪 器 紫 外-可 见 分 光 光 度 计 (型 号
Agilent8453);高速低温离心机(德国 Biofuge stratos);
半自动生化分析仪(德国,型号 Chem300);JY92-2D
超声波细胞粉碎机(宁波新芝科器研究所)。
2 方法[3]
2. 1 肝纤维化模型的建立 每只大鼠首次于背部
sc 纯 CCl4 5 mL·kg
-1,以后 sc 40% CCl4 花生油溶液
3 mL·kg -1,每周 2 次,共 10 周。
2. 2 动物分组及给药 将动物随机分为 6 组,空白
组 10 只,模型组 26 只,其余各组各 20 只。分别为
A ~ C TF 3 个剂量组(剂量分别为 200,100,50 mg·
kg -1)、D 秋水仙碱组(0. 1 mg·kg -1)、E 模型组、F
正常组。除 F 组外,其余各组按 2. 1 中方法造模。
在造模同时,A ~ D组 ig给药,E,F组 ig 同等体积蒸
馏水,1 次 /d,连续 10 周。实验期间所有大鼠标准
饮食。
2. 3 标本的采集 大鼠实验前禁食 24 h,用锥子固
定于蛙板上,经股动脉取血,处死后于平卧状态下剖
腹,去肝脏筋膜,将肝脏置于冰生理盐水中充分洗涤
后,一部分固定于 10%甲醛溶液中,一部分做肝组
织匀浆。
2. 4 检测方法
2. 4. 1 血清指标 均参照试剂盒说明书方法检测。
2. 4. 2 肝组织中 Hyp,MDA,GSH-Px 的检测 均参
照试剂盒说明书方法检测。
2. 4. 3 光镜检查 取肝组织石蜡包埋,Sam 连续切
片,常规 HE染色,光镜观察括肝小叶结构、纤维增
生情况、间隔是否形成、汇管区是否扩大、肝细胞排
列,肝细胞变性坏死、间质炎性细胞浸润和肝细胞的
再生情况。
2. 5 数据处理 计量资料以 珋x ± s 表示,方差齐性
检验采用 F检验,两组间差异用 t检验(方差不齐时
采用 t检验校正公式)。P < 0. 05 有统计学意义。
3 结果
3. 1 对肝功能相关指标的影响 从表 1 ~ 2 可知,
与模型组比较,TF 各剂量组 ALT,AST,AKP,MDA
均显著降低,GSH-Px活性明显升高。
表1 藤茶提取物对大鼠血清中ALT,AST,AKP的影响(珋x ± s)U·L -1
组别
剂量
/mg·kg -1
n ALT AST AKP
正常 - 10 57. 85 ± 3. 452) 95. 88 ± 10. 962) 16. 96 ± 3. 162)
模型 - 11 699. 41 ± 128. 76 888. 43 ± 192. 03 47. 96 ± 10. 86
秋水仙碱 0. 1 11 381. 39 ± 130. 892)508. 74 ± 197. 082) 19. 09 ± 9. 562)
藤茶提取物 200 10 418. 69 ± 194. 582)502. 09 ± 91. 062) 20. 87 ± 9. 682)
100 10 367. 99 ± 125. 432)580. 94 ± 379. 772) 25. 24 ± 8. 782)
50 13 403. 64 ± 127. 222)522. 72 ± 280. 052) 21. 76 ± 3. 262)
注:与模型组比较1)P <0. 05,2)P <0. 01(表 2 ~ 3 同)。
表 2 藤茶提取物对大鼠肝组织中 MDA,GSH-Px 的影响(珋x ± s)
组别
剂量
/mg·kg -1
n
MDA
/μmol·g - 1
GSH-Px
/U·mg -1
正常 - 10 9. 80 ± 6. 312) 223. 82 ± 62. 222)
模型 - 11 38. 04 ± 11. 98 37. 48 ± 3. 41
秋水仙碱 0. 1 11 17. 46 ± 8. 672) 62. 27 ± 12. 632)
藤茶提取物 200 10 24. 75 ± 10. 661) 86. 25 ± 23. 822)
100 10 27. 23 ± 10. 071) 96. 21 ± 18. 282)
50 13 29. 37 ± 6. 091) 82. 36 ± 11. 372)
3. 2 对肝纤维化相关指标的影响 从表 3 可看出,
与模型组相比,TF 各剂量组的 ALB 显著升高,GLB
和 Hyp显著降低。
·331·
欧贤红,等:藤茶提取物抗慢性肝纤维化作用
表 3 藤茶提取物对大鼠 ALB,GLB,A/G,Hyp的影响(珋x ± s)
组别
剂量
/mg·kg -1
n
ALB
/g·L -1
GLB
/g·L -1
A /G
Hyp
/mg·g - 1
正常 - 10 44. 25 ± 7. 362) 43. 74 ± 12. 142) 1. 11 ± 0. 422) 14. 85 ± 3. 102)
模型 - 11 26. 53 ± 4. 32 60. 21 ± 6. 47 0. 44 ± 0. 086 21. 47 ± 4. 87
秋水仙碱 0. 1 11 38. 32 ± 5. 502) 39. 88 ± 5. 662) 0. 99 ± 0. 272) 15. 24 ± 4. 51
藤茶提取物 200 10 54. 35 ± 11. 842) 19. 33 ± 13. 442) 1. 57 ± 5. 012) 17. 00 ± 4. 381)
100 10 48. 13 ± 5. 092) 28. 90 ± 7. 902) 1. 82 ± 0. 782) 18. 15 ± 5. 051)
50 13 38. 66 ± 5. 852) 34. 81 ± 8. 532) 1. 20 ± 0. 442) 17. 47 ± 4. 071)
3. 3 肝组织病理学变化 正常组肝细胞结构正常,
未见有脂肪变性、肿胀、纤维组织增生等明显的病理
组织学改变。模型组大部分肝组织间质有不同程度
的纤维组织增生,有大量脂肪细胞堆积,肝细胞水
肿,炎症细胞浸润,伴肝细胞碎片状坏死。与模型
对照组比较,TF 高剂量组肝细胞肿胀程度明显减
轻,未见纤维化增生;TF中剂量组纤维化增生明显
减轻。
图 1 大鼠肝组织变化情况(HE染色,×20)
A. 藤茶提取物 200 mg·kg -1组;B. 藤茶提取物 100 mg·kg -1
组;C. 藤茶提取物 50 mg·kg -1组;D.秋水仙碱 0. 1 mg·kg -1组;
E.模型组;F.正常组
4 讨论
肝纤维化是肝脏受到慢性损伤时的一种修复反
应,同时也是多种慢性肝病发展至肝硬化的必经阶
段。本研究显示 TF 可显著抑制血清 ALT,AST,扭
转 CCl4 引起的 A /G倒置,使 ALB回升,GLB合成减
少。抑制肝 Hyp水平的升高,胶原纤维主要由胶原
蛋白所构成,Hyp为胶原蛋白所特有的氨基酸成分,
其在肝中的含量可反映胶原代谢的变化情况,与肝
纤维化程度平行[4]。病理观察提示 TF 可以明显减
轻肝细胞脂肪变性及炎性细胞浸润,抑制胶原纤维
的增生,说明 TF确能抑制肝脏胶原纤维的合成与沉
积,具有抗肝纤维化的作用。
脂质过氧化是 CCl4 造成肝损伤的主要机制。
近年研究显示,脂质过氧化是肝纤维化形成机制的
一个重要学说,肝纤维化时,肝脏脂质过氧化程度与
肝纤维化程度相一致。脂质过氧化正成为治疗肝纤
维化方面一个新的靶点[5]。本研究结果显示,TF 能
明显降低肝纤维化大鼠血清中异常升高的 MDA 含
量并使 GSH-Px 含量提高,提示 TF 抑制肝纤维化可
能与抗氧化有关,其作用机制及在临床上是否有抗
肝纤维化的疗效有待进一步深入研究。
[参考文献]
[1] 广西中医药研究所.广西药用植物名录[M].南宁:广
西人民出版社,1986:300.
[2] 全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编.下册[M].
北京:人民卫生出版社,1976:789.
[3] 齐洪军,胡曼菁,王长松,等.“祛瘀化痰汤”抗大鼠肝
纤维化的作用及其机制[J]. 江苏中医药,2003,24
(7):55.
[4] 刘永刚,陈厚昌,蒋毅萍.姜黄素抗肝纤维化的实验研
究[J].时珍国医国药,2002,13(5):273.
[5] Dan Li,Friedman S L. Liver fibrogenesis and the role of
hepatic stellate cells:New insights and prospects for
therapy[J]. J Gastroenterol Hepatol,1999,14(3):618.
[责任编辑 聂淑琴]
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第 17 卷第 3 期
2011 年 2 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 17,No. 3
Feb.,2011