全 文 ：收稿日期:2012 － 01 － 10
作者简介:刘宇文(1979 －) ，男，江西抚州人，主管中药师，硕士，研
究方向:中药质量控制研究。
参考文献
［1］ 唐慎微．重修政和经史证类备用本草［M］． 张存惠增． 北京:
人民卫生出版社，1957:164．
［2］ 江苏新医学院． 中药大辞典:附编［M］． 上海:上海科学技术
出版社，1979:762．
［3］ 国家中医药管理局《中华本草》编委会． 中华本草:1 册［M］．
上海:上海科学技术出版社，1999:252．
［4］ 国家中医药管理局《中华本草》编委会． 中华本草:3 册［M］．
上海:上海科学技术出版社，1999:498．
［5］ 全国中草药汇编编写组． 全国中草药汇编:上册［M］． 北京:
人民卫生出版社，1975:563．
［6］ 吴艳蓉． 不同产地细辛中马兜铃酸的痕量检测［J］． 中药研
究与信息，2005，7(1) :9．
［7］ 李泽民． 警惕含马兜铃酸中药引起肾脏损害［J］． 药品评价，
2005，2(2) :142．
［8］ 李广勋．中药药理毒理与临床［M］．天津:天津科技翻译出版
社，1992:532．
［9］ 曲淑岩． 细辛对中枢神经系统的抑制作用［J］． 中医杂志，
1982(6) :72．
［10］ 曲淑岩．细辛油的抗炎作用［J］．药学学报，1982(1) :12．
［11］ Belova LF AIibekov SD，Baginskaia AI Sokolov SIa ，Pokrovs-
kaia GV Asarone and its bioIogical properties［J］． Famkol Tok-
sikol，1985，48 (6) :17 － 20．
［12］ 周金黄．中药药理学［M］．上海:上海科技出版社，1986:31．
［13］ 杜仓良，程方，高录汶，等．毒剧中药古今用［M］．北京:中国
医药科技出版社，1991:2．
［14］ 翁维良．临床中药不良反应［J］．中药新药与临床药理，1996
(2) :4．
［15］ 翁维良． 中药临床药理学［M］． 北京:人民卫生出版社，
2002:205．
［16］ 蔡少表，王璇，朱妹．中药细辛的本草考证［J］． 北京医科大
学学报，1997(3) :233．
［17］ 周长征，杨春澍，柳树林． 中药细辛的质量检测［J］． 基层中
药杂志，1998(3) :22．
［18］ 王智华，洪筱坤．从细辛根未与全草煎剂所含挥发油及黄樟
醚的测定分析论细辛用量与剂型的关系［J］．上海中医药杂
志，1987(9) :2．
［19］ 刘贵仁． 细辛内服必煎煮［J］．陕西中医，1991，8(12) :375．
［20］ 黄剑林． 细辛入药宜用粉未［J］． 陕西中医，1990(1) :39．
［21］ 朱振华． 细辛入药之我见［J］． 陕西中医，1994(7) :326．
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中 华 中 医 药 学 刊
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HPLC － ELSD法测定三叶青中的 β －谷甾醇的含量
刘宇文，殷红妹，邹耀华
(杭州市药品检验所中药室，浙江 杭州 310017)
摘 要:目的:建立测定三叶青药材中 β －谷甾醇含量的方法。方法:采用高效液相色谱 －蒸发光散射检测
法，色谱柱为 Inersil ODS － 3 C18 柱(250mm ×4． 6mm，5μm) ，流动相为甲醇，流速为 0． 7mL·min －1，柱温为 30℃，
漂移管温度为 40℃，载气压力 3． 5 bar。结果:β －谷甾醇 0． 264μg ～ 2． 64μg与峰面积的自然对数呈良好的线性关
系(r = 0． 9999) ，平均回收率为 96． 3%。结论:该方法简便、准确、重复性好，可以作为控制三叶青药材质量的方
法参考。
关键词:三叶青;β －谷甾醇;高效液相色谱 －蒸发光散射检测法
中图分类号:R284． 1 文献标识码:A 文章编号:1673 － 7717(2012)06 － 1387 － 03
Determination of β － sitosterol in Radix Tetrastigmatis by HPLC － ELSD
LIU Yu-wen，YIN Hong-mei，ZOU Yao-hua
(Hangzhou Institute for Drug Control，Hangzhou 310017，Zhejiang，China)
Abstract:Objective:To establish the method to determine the content of β － sitosterol in Radix Tetrastigmatis．
Methods:Samples were determined by HPLC － ELSD． Inersil ODS － 3 C18 column was used with a mobile phase of pure
methanol with the flow rate of 0． 7mL·min －1 and the column temperature of 30℃ ． The temperature in drift tube of was
40℃ and the pressure was 3． 5 bar． Results:The method displayed a good linearity within the concentration ranges of
0． 264 ～ 2． 64μg (r = 0． 9999)． The average recovery was 96． 3% ． Conclusion:This method is simple，accurate，repli-
cate and suitable for the determination of β － sitosterol in Radix Tetrastigmatis．
Key words:Radix Tetrastigmatis;β － sitosterol;HPLC － ELSD
三叶青(Radix Tetrastigmatis)为浙江省民间的常用药，
来源于葡萄科植物三叶崖爬藤(Tetrastigma hemsleyanum
Diels et Gilg)的干燥块根，其味微苦，平，具有清热解毒、活
血止痛、祛风化痰、消肿等功效［1］。药理研究表明，三叶青
具有解热、镇痛、抗炎、抗病毒、保肝、增强免疫、抗肿瘤等作
用［1］。三叶青中的化学成分主要有黄酮、甾类化合物、氨
基酸等，目前三叶青的质量控制仅见有黄酮类成分的含量
测定方法报道，质量标准尚不够完善［2］。药理实验表明，β
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DOI：10.13193/j.archtcm.2012.06.205.liuyw.055
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－谷甾醇具有明显的降胆固醇、止咳、抗癌、抗炎等药理作
用［3］。本研究首次应用高效液相色谱 －蒸发光散射检测
法测定三叶青中 β －谷甾醇的含量测定，旨在为制定三叶
青药材的质量标准研究，合理开发利用三叶青药材资源提
供理论依据。
1 仪器、试剂
1． 1 仪器 Agilent 1100 高效液相色谱仪(美国 Agilent公
司) ，Altech400 型蒸发光散射检测器。十万分之一分析天
平(Mettler Toledo XS105)。KQ － 600DV 台式数控超声波
清洗器 (昆山市超声仪器有限公司)。
1． 2 试剂 β －谷甾醇对照品(中国药品生物制品检定
所，批号:110851 － 200403) ，色谱纯甲醇(德国 MERCK) ，
三叶青药材，经本所殷红妹副主任中药师鉴定为葡萄科植
物三叶崖爬藤(Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg)的干
燥块根。其他试剂均为分析纯。
2 方 法
2． 1 色谱条件 色谱柱:日本岛津公司的 Inersil ODS － 3
柱(250 mm ×4． 6 mm，5μm) ;流动相:甲醇;流速:0． 7 mL /
min;柱温:30℃;ELSD 漂移管温度:40℃;载气压力为3． 5
bar。
2． 2 对照品溶液制备 精密称取 β －谷甾醇对照品13． 20
mg，置 100mL容量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，
即得。
2． 3 供试品溶液制备 取三叶青粉末(过三号筛)约 2g，
精密称定，置具塞锥形瓶中，加入氯仿 50 mL，浸泡 1h，超声
处理 30min，滤过，滤液蒸干，残渣用甲醇使溶解，转移置
10mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。
3 结 果
3． 1 色谱分离结果 在上述色谱条件下，β －谷甾醇对照
品峰的平均保留时间约为 27． 8 min。与共存的其他成分分
离良好，见图 1 ～ 3。样品在对照品峰相应保留时间位置上
出峰，并与其他成分分离良好，分离度为 2． 05，理论塔板数
以 β －谷甾醇计大于 5000。
图 1 供试品溶液色谱图
图 2 对照品溶液色谱图
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图 3 空白溶液色谱图
3． 2 线性关系 分别精密吸取 2μL、5μL、8μL、10μL、
15μL、20μL的对照品溶液，分别注入液相色谱仪中，按上
述色谱条件测定色谱峰面积，以所进对照品质量的自然对
数为纵坐标，峰面积的自然对数为横坐标。绘制标准曲线，
回归方程为:Y = 1． 5477X + 2． 7278 结果显示，进样量在
0． 264 ～ 2． 64μg范围内线性关系良好(r = 0． 9999)。
3． 3 精密度试验 取对照品溶液 10μL，在上述色谱条件
下连续进样 5 次，分别测定 β －谷甾醇峰面积，结果 β －谷
甾醇峰面积自然对数 RSD = 0． 5%，表明仪器精密度良好。
3． 4 重复性试验 取同一批号样品 5 份，称取粉末约 1g，
精密称定，分别进样进行含量测定，测得 β －谷甾醇含量平
均值为0． 729mg /g，RSD = 1． 73%。
3． 5 稳定性试验 取同一份样品供试液分别放置后 0h、
2h、4h、8h、12h 进样测定，测的 β －谷甾醇对照品峰面积常
用对数的 RSD = 0． 78% ，表明供试品溶液在 12h 内含量稳
定。
3． 6 回收率实验考察 取样品 5 份，每份取粉末约 1g，精
密称定，精密加入 β －谷甾醇对照品溶液 5mL，按上述含量
测定方法操作，结果见表 1。
表 1 回收率试验测定结果
表 1 加样回收试验
样号
本底量
(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均值
(%)
RSD
(%)
1 0． 6804 0． 6600 1． 3069 97． 5
2 0． 6878 0． 6600 1． 2737 94． 5
3 0． 6870 0． 6600 1． 2877 95． 6 96． 3 1． 3
4 0． 6822 0． 6600 1． 2979 96． 7
5 0． 6839 0． 6600 1． 3063 97． 2
3． 7 不同批次三叶青中 β －谷甾醇的含量测定 按上述
条件测定不同批次三叶青中 β －谷甾醇的含量，结果见表
2。
4 讨 论
目前三叶青有效成分研究报道多见于黄酮类成分，众
所周知中药的药效是多种成分综合作用的结果，仅仅以黄
酮类的含量作为质量控制指标是否很科学，有待商榷，因
此，研究 β －谷甾醇的含量测定对于合理制定三叶青药材
的质量标准以及合理开发利用三叶青药材资源有一定参考
价值。本文采用 HPLC － ELSD 法，测定三叶青中 β －谷甾
醇的含量，为三叶青中 β －谷甾醇的含量测定提供了可靠
的依据。结果可按外标两点法对数方程计算。
表 2 不同批次三叶青中 β －谷甾醇的含量(n = 3)
样品 含量(%) RSD(%)
20080304
20080406
20090706
20100704
20100708
0． 060
0． 088
0． 068
0． 073
0． 067
0． 82
0． 75
0． 91
0． 89
0． 89
本试验中对供试品溶液的制备方法进行了考察，曾考
察了甲醇、乙醇、氯仿为提取溶剂，结果表明:采用氯仿为溶
剂，提取样品中 β －谷甾醇的含量最高;同时考察了超声处
理、加热回流提取和索式提取 3 种方式提取，结果表明:采
用超声处理与索氏提取的样品的 β －谷甾醇峰面积相差不
大，但超声处理方法操作简单，因此最终确定了供试品溶液
的制备方法。高效液相色谱条件参照有关文献［4］。
产地、生长年限、种类或品种以及采收季节的不同对三
叶青中 β －谷甾醇含量是否会产生影响，是否有其内在规
律，有待于进一步研究。
参考文献
［1］ 伍昭龙，吕江明．中药三叶青的研究现状［J］． 中国民族民间
医药杂志 2006(78) :15 － 18．
［2］ 郑军献，胡轶娟，梁卫青，等．紫外可见分光光度法测定三叶
青中总黄酮的含量［J］． 中国中医药科技，2009，16 (5) :
386 － 387．
［3］ 王英平 ，李向高．玉米须化学成分和药理作用研究进展［J］．
特产研究，2004(2) :42 － 46 ．
［4］ 张海波，李钦． HPLC － ELSD 法测定玉米须中 β －谷甾醇的
含量［J］．河南大学学报:医学版，2006，25(4) :53 － 55．
9831