全 文 ：湖 北 农 业 科 学 2012 年
第 51卷第 6 期
2012年 3 月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol． 51 No.6
Mar．，2012
收稿日期：2012－01－08
基金项目：泸州市科技计划项目［（2010）128 号］
作者简介：向 丽（1977－），女，四川德阳人，讲师，硕士，主要从事益生菌抗肿瘤机制研究，（电话）15883006835（电子信箱）xiangli006＠sina．com。
青果（Fructus canarii）别名橄榄，为橄榄科植物
橄榄的果实，青果具有抗菌 ［1］、抗病毒 ［2］、抗肿瘤和
抗氧化作用［3－5］，有较高的药用价值。 青果化学成分
包括挥发性成分、三萜类化合物、香豆精、多酚、蛋
白质和氨基酸、脂肪和脂肪酸、矿物质、微量元素等
多种成分。 其中，多酚为青果中的重要化合物，是其
主要功效成分。 泸州合江是四川省青果生产基地，
具有丰富的种质资源，开发青果的药用价值对继承
和发展我国传统医学以及带动和促进当地青果的
产业化发展具有重要意义。 本研究应用福林－酚比
色法对青果多酚进行定量分析，为进一步筛选青果
品种，综合开发其药用价值提供参考。
1 材料与方法
1．1 材料与仪器
材料：青果（购自泸州宝光医药有限公司，选择
优质果实洗净，风干，粉碎）。
分析纯试剂：乙醇、碳酸钠、没食子酸标准品
（批号 MUST－10080401，纯度≥98％，中国食品药品
检定所）；化学纯试剂：酚试剂。
仪器：JY96－Ⅱ超声粉碎仪（宁波新芝生物科技
股份有限公司）；AL104 ／ 00 电子天平（梅特勒－托利
多仪器有限公司）；SP－752 型紫外－可见分光光度计
（上海光谱仪器有限公司 ）；DK－98－1 恒温水浴锅
（天津泰斯特仪器有限公司）。
1．2 方法
准确称取 10 mg 没食子酸标准品， 定容于 10
mL 容量瓶中，配制成 1 mg ／ mL 标准液，取 1 mL 标
准液定容至 100 mL，得 10 μg ／ mL工作液。准确称取
青果果实粉 2．0 g，溶于 40 mL 的 40％乙醇（体积分
数）中，超声 45 min 后，取提取液抽滤，即为样品液，
采用分光光度法对青果多酚的含量进行检测［6－8］。
分光光度法测定青果多酚的含量
向 丽 a，周铁军 b，王光西a
（泸州医学院，a.病原生物学教研室；b．病理学教研室，四川 泸州 646000）
摘要：以没食子酸为标准品，使用酚试剂，采用分光光度法对青果（Fructus canarii）多酚的含量进行检测。
结果表明，酚试剂用量为 1．5 mL，与 6 mL 质量分数 10％的 Na2CO3溶液混合，30 ℃反应 60 min，于 765 nm
处测定吸光度， 没食子酸浓度在 0．5～2．5 mg ／ L 范围内与吸光度有良好的线性关系， 回归方程为 y＝
0．121 2x＋0．004 0。 该方法能较准确地定量分析青果多酚含量，具有简便、快速、稳定，重现性好的优点。
关键词：分光光度法；酚试剂；青果（Fructus canarii）；多酚
中图分类号：O657．32 文献标识码：A 文章编号：0439－8114（2012）06－1242-03
Determination of Polyphenol from Fructus canarii by Spectrophotometry
XIANG Lia，ZHOU Tie－junb，WANG Guang－xia
（a． Department of Pathogen Biology；b． Department of Pathology，Luzhou Medical College， Luzhou 646000，Sichuan，China）
Abstract： The polyphenol in Fructus canarii was detected by spectrophotometry with Folin－Ciocalteu reagent and gallic acid
as standard． The results showed that the best detection condition was that mixing 1．5 mL Folin－Ciocalteu reagent with 6 mL
10％ Na2CO3 （m ／V）， and then reacting for 60 min at 30 ℃ and detected at 765 nm． The linear range of standard curve was
0．5～2．5 mg ／ L in which the regression equation was y＝0．121 2x＋0．004 0． The method was simple， fast， stable and reproducible
for detecting polyphenol in Fructus canarii．
Key words： spectrophotometry； Folin－Ciocalteu reagent； Fructus canarii； polyphenol
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2012.06.019
第 6 期
2 结果与分析
2．1 测定波长的选择
分别取没食子酸标准溶液和青果样品液在
400～900 nm 范围内扫描， 两者在 765 nm 处均有最
大吸收峰，故选择 765 nm为测定波长。
2．2 试剂用量的确定［9］
酚试剂与 10％的 Na2CO3（质量分数，下同）溶液
比例的确定：取 1．5 mL 没食子酸标准溶液，加入 1．5
mL 酚试剂， 混匀后分别加入 0．75、1．5、3．0、4．5、6．0
和 7．5 mL 10% Na2CO3溶液， 定容至 15 mL，30 ℃
水浴反应显色后，于 765 nm处测定吸光度。 结果表
明，当 10% Na2CO3 溶液加入量为 6 mL 时，体系显
色反应较为完全， 故确定酚试剂与 10％ Na2CO3溶
液的体积比为 1∶4。
酚试剂用量的确定：取 1．5 mL 没食子酸标准溶
液， 分别加入 0．5、1．0、1．5、2．0、3．0 和 4．0 mL 酚试
剂， 混匀后加入酚试剂 4 倍体积的 10％ Na2CO3溶
液，定容至 21．5 mL，30 ℃水浴反应显色后，测定 765
nm 处吸光度。 结果表明，当酚试剂加入量大于 1．5
mL 后吸光度达到最大，并趋于稳定，所以确定酚试
剂用量为 1．5 mL。
2．3 稳定性检测［10］
酚比色法的稳定性结果见表 1。由表 1可知，在
反应前期吸光度随时间增加而上升，120 min 内吸
光度变化较为平缓，表明反应完全，在此阶段稳定
性好，从提高效率的角度考虑选择反应时间为 60min。
2．4 精密度试验
取 3 份青果样品液各 1．5 mL，按照上述方法加
样，反复测定 5 次，结果见表 2。 结果表明该方法具
有较高的精密度，能满足样品分析的要求。
2．5 标准曲线的制作
取 5 支 10 mL 具塞试管， 分别加入 0、0．5、1．0、
1．5、2．0 和 2．5 mL 10 μg ／ mL 的标准溶液，1．5 mL 酚
试剂和 6 mL 10％ Na2CO3溶液，30 ℃水溶 60 min 后
测定 OD765 nm。 以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘
制标准曲线 ， 回归方程为 ：y＝0．121 2x＋0．004，R2＝
0．998 6（图 1），表明没食子酸浓度在 0．5～2．5 mg ／ L
范围内与 OD765 nm呈现良好的线性关系，方程可用于
青果多酚的定量测定。
2．6 重现性试验
检测 6 份同一青果样品液中多酚的含量，结果
见表 3。 结果表明在该条件下青果多酚的平均含量
为 3．309％，RSD＝2．821％，重现性符合要求。
2．7 回收试验［11］
将已知含量的青果样品液 6 份，0．4 mL ／份，分
3 组，各精确加入没食子酸 4，8 和 12 μg，按照上述
方法测吸光度，取平均吸光度计算多酚含量。 按照
下列公式计算回收率：
回收率＝（总多酚含量－原样液多酚含量） ／加标
量×100％
其回收率在 96．275～103．600％之间， 平均回收
率为 100．201％，RSD为 3．121％（表 4）。 结果表明该
方法准确可靠，可用于青果多酚的定量分析。
3 小结
目前多酚含量的测定方法主要有高锰酸钾法、
比色法、色谱法等。 其中高锰酸钾法简便易行，但被
测液中的还原性物质一般均能被氧化， 选择性不
高；色谱法测定速度快、灵敏度高，但需要进行繁杂
的衍生前处理，且分析成本高。 相比较而言，分光光
度比色法测定总多酚含量简便、快速 ［11］。 青果为药
表 1 不同水浴时间对福林-酚比色法的影响
样品
标准品的OD765 nm
样品液的OD765 nm
0
0.209
0.336
30
0.210
0.338
60
0.215
0.342
120
0.205
0.322
180
0.173
0.309
反应时间//min
表 2 福林-酚比色法精密度结果
样品
1
2
3
0.171
0.186
0.280
0.171
0.185
0.279
0.172
0.186
0.280
0.172
0.186
0.280
0.171
0.186
0.279
RSD//%
0.320
0.240
0.196
平均值
0.171
0.186
0.280
测定值（n=5）
表 3 福林-酚比色法测定青果多酚的重现性结果
样品
1
2
3
4
5
6
OD675 nm
0.171
0.173
0.172
0.177
0.184
0.178
青果多酚含量//%
3.218
3.253
3.234
3.330
3.465
3.351
平均值//%
3.309
RSD//%
2.821
0.35
0.30
0.25
0.20
0.15
0.10
0.05
0.00
OD
76
5n
m
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0
没食子酸浓度//mg/L
图 1 没食子酸溶液的标准曲线
y＝0．121 2x＋0．004 0
R2＝0．998 6
向 丽等：分光光度法测定青果多酚的含量 1243
湖 北 农 业 科 学 2012 年
（上接第 1241页）
0.14
0.12
0.10
0.08
0.06
0.04
0.02
0.00
OD
51
5n
m
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0
乙醇提取液体积//mL
y=0.040 3x+0.003 6
r=0.997 0
图 3 样品 95％乙醇提取液的 OD515nm
表 3 95%乙醇提取液的 OD515nm
提取液体积//mL
0.5
2.0
3.0
平行 1
0.012 4
0.088 0
0.119 4
平行 2
0.011 7
0.085 6
0.122 3
平行 3
0.011 0
0.079 9
0.116 1
平均值
0.011 7
0.084 5
0.119 3
（责任编辑 周有祥）
依次采用水、60％、85％、95％乙醇在 50 ℃下超声提
取 50 min，将提取液经抽滤、减压浓缩后，最终得到
水提取液 （81 mL）和醇提取液 （126 mL）两种提取
物。 在弱碱条件下，用 Al（NO3）3与黄酮类化合物反
应，以芦丁作为标准品，在 515 nm 下分别测定总黄
酮的含量。其中水提取物中黄酮含量为 11．03 mg，乙
醇提取物中黄酮含量为 3．45 mg，水溶性黄酮为醇溶
性黄酮的 3．2 倍， 枸杞花中总黄酮含量达到 2．95
mg ／ g。
参考文献：
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（责任编辑 周有祥）
表 4 福林-酚比色法的回收率结果
编号
1
2
3
4
5
6
样品中多酚含量//μg
5.06
5.06
5.06
5.06
5.06
5.06
没食子酸加标量//μg
4
4
8
8
12
12
实测值//μg
9.158
8.911
12.954
13.284
17.492
16.749
回收率//%
102.450
96.275
98.675
102.800
103.600
97.408
平均回收率//%
100.201
RSD//%
3.121
食兼用型水果，多酚是青果的重要药效成分，主要
集中在果肉中，与青果的苦涩味和药理作用密切相
关［7］。本试验采用福林－酚比色法测定青果中的多酚
含量，其最佳条件为：酚试剂 1．5 mL、10％ Na2CO3
6 mL、在 30 ℃下反应 60 min，测定波长为 765 nm。
该方法操作简便、稳定、重现性好、结果准确可靠。
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