全 文 ：微 生 物 学 通 报 19 9 5年 2 5 (3)
山苍子油对霉菌抗菌性及其与黄曲霉产毒关系的研究
余 伯 良
(四川轻化工学院 自贡 6 3 40 3 3)
摘要 采用平板法 比较天然增香剂山苍子油与合成食用防腐剂苯甲酸钠 、 山梨酸钾对 8 种霉菌的抗菌效
力 。 结果表明 ,在培养基 p 4H . 5 时山苍子油对多数霉菌的最低抑菌浓度为 1 . 7 m g / 而 , 与山梨酸钾的抑
菌强度相近 , 比苯甲酸钠强 ; 但当培养基 p H S . 5 以上时苯甲酸钠对霉菌几乎无效 , 山梨酸钾的抗菌效力也
有减弱 , 而 山苍子油受影响很小 , 其活性 p H 范围为 4 . 5一 8 . 5 。 山苍子油用脂肪酸蔗糖酷乳化 , 其抗菌效力
增强一倍 。 同时 , 从山苍子油与黄曲霉产毒关系的实验中发现 , 山苍子油对黄曲霉产生黄曲霉毒素有较
强的抑制作用 。
关键词 山苍子油 , 霉菌 , 抗菌性 , 抗菌效力 , 黄曲霉毒素
分类号 0 93一9 36
山苍子油 ( L i st e a e u be b a 0 11)是从山苍 子
的鲜果 、 树皮及叶中提取 的芳香精油 [’ ] , 含柠檬
醛 (6 0% 一 8 0% ) , 甲基 庚 烯 酮 ( 2 . 5% ) , 香 茅 醛
( 1
.
0% )
, a 一 旅烯 , 羡 烯 , a 一蛇 麻烯等 , 是 我 国
G B 2 7 6 0一8 6规定为允许使用的食 用香料 l2] 。 笔
者曾意外发现添加了山苍子精油的辣椒油和香
辣酱 , 与同类产品相 比具有非常突 出的防霉防
腐性能 。
据有 关文献报道 , 多种食用香料植物均有
抑菌 、 抗菌作用 3[] . 特别是在香辛料精油的抗菌
性 研 究 ( K n o b lco h 等 , 1 9 8 9 ) 及 后 来 G仪 h o
( 19 9 2 )针对源于植物 的 26 种芳香族化合物 的
抗菌效果的研究中 , 均有所发现 [’] 。
19 8 0 年 , 湖南省粮科所用山苍子油熏蒸贮
粮防霉治虫试验获得成功 5j[ 。 本文就 山苍子油
对霉菌抗菌性及其与黄曲霉产毒关系进行较深
人的研究 。
1 材料和方法
L l 菌种
黑曲霉 (凡叨 e馆 il zu s n ig e r ) ; 杂色曲霉 ( J砚5夕 .
v e r s ic o l o r )
; 桔青霉 (eP n i e i l i u m 。 i介 in u m ) ;总状
毛 霉 。如 e o : ; a e e脚 o s u s ) ; 禾 谷 镰 刀 霉
(uF
s a r i u m g r a m in e a r u m ) ; 黑 根 霉 (助 iozr u s
n
igr ic an
: )和米根霉 (hR . o yr az e) 来源于上海工
业微生物研究所菌 种站 ; 黄 曲霉 (注 , . afl vu s)
则是本院微生物实验室从霉变花生中分离得到
的一株产毒菌株 (用 “花生察 氏培养基 , 6l[ , 28 ℃
培养 6 d, 薄层层析法 v[] 检测其黄曲霉毒素 B ;含
量为 4 2 . 4 0m g / k g ) .
L Z 试剂
山苍子油 (购于 秀山外贸公 司 , 质量符合
15 0 3 2 14一 19 7 4 E标 准 , 相 对密度 0 . 8 8 5 ) , 苯 甲酸
钠 (A R ) , 山梨酸钾 ( A R ) , 丙三醇 ( C P ) , 脂肪酸
蔗糖酷 (简称蔗糖醋 , 重庆长江化工厂生产 , 食
品级 ) .
L 3 培养基
马铃薯葡萄糖 琼脂 ( PD A 琼脂 )培 养基 8[] ;
花生察氏培养基 。
1
.
4 平板法测最低抑菌浓度 (如C ) 9[]
将 山苍子油用丙三醇稀释成如下体积百分
比浓度 (% ) : 7 . 0 , 6 . 0 , 5 . 0 , 4 . 0 , 3 . 0 , 2 . 0 , 1 . 0 。 苯 甲
酸钠 、 山梨酸钾先用 60 ℃ 无菌水溶解成 8 . 59 /
10 0m l 的溶液 , 并以此作为 “原液 ” ; 再将原液用
无菌水分别稀释成如下体积百分比浓度 (% ) :
7
.
0
,
6
.
0
,
5
.
0
,
4
.
0
,
3
.
0
,
2
.
0
,
1
.
0
。 先把 8 种霉菌菌
19 9 7刁 7一0收稿
DOI : 10. 13344 /j . mi crobi ol . chi na . 1998. 03. 006
199 8 年 2 5 ( 3)微 生 物 学 通 报
种在 P D A 琼脂上活化培养 , 然后分别挑取霉菌
抱子制备悬浮液 ( 10 6个抱子 / m l ; 须在 2 4 h 内使
用 ) 。
调节 P D A 琼脂培养基 , 使最 终 p H 为 4 . 5 ,
分装于 1 34 支试管中 (每支 19 m l) 。 灭菌后待降
温至 60 ℃左右 , 分别吸取三种试剂不同浓度 的
稀释液 l m l 加人各 自试管 中 , 充分摇匀 , 于 50 ℃
左右倒制平皿 , 每种 42 付 . 另外在 8 支 P D A 琼
脂试管中各加人 l m l丙三醇 , 摇匀后倒制平皿
作对照 。
在每个平 皿底部外 面 用 记 号 笔 画 一个
“
+
” 字 , 并编号 。 相 同浓度同一试剂的两个平
皿分别接种 4 种实验菌 . 对照组也涂菌 . 28 ℃
培养 4 8h , 观察结果 , 以完全没有菌生长的最低
试剂浓度为该试剂的 M IC 。 (做三次平行实验 ,
以两次或三次相同结果的为准 )
L S 山苍子油与黄曲霉产毒关系的实验
参照 “培养皿 中荧光反应法 ” 6[] , 首先做山
苍子油是否抑制黄曲霉产毒的定性实验 : 将花
生察氏培养基溶化 , 分别放人 巧 支试 管中 (每
支 19m l) , 待降温至 60 ℃左右 , 各 自加人 lm l 用
丙三醇稀释的不 同浓度 的山苍子油 . (分别含油
5
.
0%
、
4
.
0%
、
3
.
0%
、
2
.
0%
、
1
.
0% )
, 每 种浓 度 加 3
管 . 作对照 的 3 支试管仅加人 19 ml 培养基 和
l m l丙三醇 . 各试管摇匀 , 缓缓倾人硅藻土薄层
平皿 。 接种黄曲霉 , 28 ℃培养 6 d , 置于 125 W 紫
外灯下观察 (滤光 片波长 36 5 lun ) , 如果菌丝体
上显现亮蓝紫色荧光则表明有毒素产生 。 选取
实验组 中具代表性 的一个平皿及对照样本 , 用
薄层层析法分别测定培养基中的黄曲霉毒素 B l
含量 。
表 1 三种试荆最低抑菌浓度 单位 : m g/ 耐
菌 种 山苍子油 苯甲酸钠 山梨酸钾
黄曲霉 2 . 2 1 2 . 6 6 1 . 7 7
黑曲霉 l , 7 7 2 2 1 1 . 3 3
杂色曲霉 1 . 7 7 2 2 1 1 3 3
桔青霉 1 . 7 7 2 . 2 1 1 . 7 7
总状毛霉 1 . 7 7 2 . 2 1 1 . 3 3
禾谷旅刀霉 2 2 1 2 . 6 6 1 .7 7
黑根霉 1 . 7 7 2 6 6 1 . 3 3
米根霉 1 . 7 7 2 . 2 1 1 . 3 3
注 : 培养基pH 4 . 5
调节 PD A 琼脂培养基 p H , 使最终 p H 值分
别为 3 . 5 、 4 . 5 、 5 . 5 、 6 . 5 、 7 . 5 、 8 . 5 、 9 . 5 , 然后用 比三
种试剂 MI C 低一个浓度梯度 的稀释液 , 对表 l
前 五种 霉 菌进 行测 定 . 结果 表 明 , 在培养基
pH S
.
5和 以上时 , 苯甲酸钠对实验的五种霉菌几
乎无效 , 山梨酸钾的抗菌性随 pH 上升也有所降
低 , 而山苍子油受 p H影响很小 , 其 p H活性范围
在 .4 5一 .8 5 之间 。 图 1 以黄曲霉为例 , 说明 p H
值对三种试剂抗菌效力的影响 。
.2 3 蔗糖醋对山苍子油抗菌效力的影响
2 结果与讨论
.2 1 山苍子油与合成防腐剂的 M I C 值比较
MI C 越低 , 表明相应试剂抗 菌效力越 强 。
从表 l 可 知 , 山苍 子油 对多数霉 菌 的 M I C 为
l
.
7 7m g / 而 , 苯甲酸钠为 2 . 2 l m g / m l , 山梨酸钾
为 1 . 3 m g / m l。 山苍子油的抗菌效力比山梨酸
钾略低 , 比苯甲酸钠强 。
.2 2 p H 值对山苍子油抗菌效力的影响
3 5 4 5 55 65 7 5 8 5 9 5
PH
图 1 p H 值对三种试剂抗菌效力的影响
一
j r 山苍子油 一月卜苯甲酸钠 一 一 一 一一山梨酸钾
注 : “ 一 ”表示肉眼看不到菌丝 , 无霉斑 ; “ + ” 表示能看
到稀少 的菌丝或发芽抱子 , 无霉斑 ; “ + + ” 表示能看到
较 多 的 菌丝 或出现霉斑 ; “ + + 十 ” 则 指 试样表 面
几乎全部被菌丝及抱子筱盖或出现许多霉斑 .
山苍子油用于食品特别是饮料 、 汤料等非
油性液体或半固体食品需事先乳化 。 用蔗糖醋
乳化较好 , 不仅无毒 , 而且能防止精油损失 , 改
善保藏性 l0] 。 本实验按常规方法乳化 。 测定不
同浓度的山苍子油乳化液的 M IC , 结果显示 , 经
乳化后山苍子油 的 MI C 值明显降低 . 对表 1前
五种霉菌中除黄曲霉外的四种霉菌 , 其 MI C 均
14 6 微 生 物 学 通 报 19 9 8 年 2 5 ( 3)
曲霉毒素 B I含量为 37 . 7 1m g /地 , 而添加了山苍
子油的样本 ,其毒素含量仅为 5 . 05 m g / k g , 明显
少于对照组 。
由于山苍子油具有特殊风味 , 不可能广泛
用作食品的天然防腐剂 。 但 山苍子油对霉菌的
强抗菌性及抑制黄曲霉毒素产生的功 能 , 使它
不失为那些需要柠檬果香味的食品 , 特别是易
受霉 菌及黄曲霉毒素污染的花生 、 玉米等食品
的良好的天然防腐剂 。
参 考 文 献
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凌关庭 , 王亦芸 , 唐述潮 , 编 . 食品添加剂手册 (上册 ) .
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宁正 祥 , 王若峰 , 谭龙飞 , 食 品与发酵工业 , 19 95 , :6
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5 8 6
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1.JōJ、月人,`r.L.F
为 o . 89m g/ 耐 , 抗菌效力增强一倍 。 对照组的蔗
糖醋在此浓度下也有微弱的抑菌作用 。 山苍子
油与蔗糖醋结合抗菌效力增强 , 可能与协同作
用及山苍子油的分散度提高有关 。
.2 4 山苍子油与黄曲霉产毒的关系
从 表 2 可 见 , 加 人 山 苍 子 油 浓 度 为
.0 45 m留 inl 、 0 . 89 m g/ inl 的培养基 , 其菌丝生长
情况与对照组的相近 , 但它们的荧光反应都较
对照组的为弱 , 说明 山苍子油有抑制黄曲霉产
毒的作用 。 其 中添加了 0 . 89 m g/ m l山苍子油的
实验皿具有代表性 , 其荧光反应较弱 (即受抑制
较强 ) . 此样本及对照组的样本 , 分别用薄层层
析法测定黄曲霉毒素 B I含量 。 重复一次 , 取平
均值 , 列于表 2 。 未加山苍子油的对照样本中黄
1.J,J1肉Jj峪气ùr.LùL
1且J.产
O,了r.rL卫
1.J,山.JOn,r.L一se
ó
表 2 山苍子油与黄曲 . 产毒的关系
浓度 对照组
m g/ lnI 2
.
2 1 1
.
7 7 1
.
3 3 0名9 0 4 5
菌丝生
长情况 一 + + + + + + + + + + + +
荧光
强弱 0 0 + + + + + + +
黄曲霉 5 . 0 5 3 7刀 l
毒素 B : / / / ( 5 2 6 / ( 3 8 4 7
(mg / kg ) 4
,
84 ) 36
.
9 5 )
注 : 表示菌丝生长情况的符号含义如 图 1 说明 . 表示荧
光强弱的符号 : ` 。 ’ 为无荧光 , ` + . + , + 十 + ’ 为强度依次递增 .
毒素重复测定值于 括号内 . 所有数据均为小数点后 3位 4
舍 5 人 , 取小数点后 2位 . [
1 0 ]
A N T I B I O T I C A C T IV I T IE S O F L I T S E A C t 」B E B A O I L O N M o t JL D S
A N D E F F E C T O F L I T S E A C U B E B A O I L O N A F L A T O X IN
P R O D U C T I O N
Y u B o l ian g
(&
e h u a n nI
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A b s t r a e t 刀 l e an it b io it e ac it v i it e s o f li ts e a c u be b a 0 11
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199 8 年 2 5 (3 )微 生 物 学 通 报 · 147 ·
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K e y w o r d s U st e a c u be ab 0 11
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A n it b i o it e P r o pe yrt
,
A n it ib o it c ac it v i yt
,
A fl aot
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猴头菌固体发酵降解玉米淀粉的初步研究
韩 建
(山西大学生命科学系
荣
太原 0 30 0 0 6 )
摘要 猴头菌在玉米粉培养基上 进行固体发酵时能够产生活性较强的 a 一淀粉酶降解玉米淀粉 。 添加
5% 一 巧% 黄豆粉和发酵时间从 15 d 延长到 2d5 能显著提高淀粉酶活力和淀粉降解率 。 在添加 150/ 黄豆
粉 , 加水 40 % , 25 ℃发酵 25 d 的玉米粉发酵产物中 , 淀粉降解率达到 65 . 20 % ; 蛋白质含量达到 1 6 . 83 % ; 蛋
白质中赖氨酸含量由 35 . 96 m g / g 提高到 56 . 12 m g / g , 色氨酸含量由 9 . o s m g / g 提高到 13 . 25m g / g , 从而
明显提高了玉米粉的营养价值 。
关健词 猴头菌 , 固体发酵 , 玉米粉 , 淀粉
分类号 09 3一3 35
猴头菌 (eH r i e i u m e r in a e e u s )是 一种著 名
的药食两用真菌 。 现代医学证明 , 用该菌制成
的猴菇菌片 , 对医治 消化 道溃疡 , 胃癌等症 有
显著效果 。 营养成分分析 测定表 明 ,猴 头菌还
具有很高的营养价值 , 子 实体和菌 丝体 中都
含有较高的蛋 白质 , 且蛋 白质 中赖氨 酸 、 色 氨
酸的含量很高川 。 国 内已经有人川将猴头菌加
人到 饼 干 当中来 防 治学 龄 前 儿 童 营 养性 贫
血 。 玉米是我国的主要作物之一 , 但玉米粉 由
于蛋 白质中赖氨酸 , 色氨酸 含量较低 3l[ , 因而
具有营养上不足 的缺点 , 再加 上淀粉含量 高 、
口 味较差 , 大大影 响了人们对玉 米 的直接食
用 , 大量 的玉米 被用来生产淀粉 或加工饲料 。
如果采 用一种 新 的发 酵工 艺 , 使 猴头 菌在 充
分降解 利用 玉米粉 中淀粉物 质 的同 时 , 提 高
玉米粉 中赖氨酸 、 色 氨酸的含量 , 并 以猴头 菌
特有 的风味改变 玉米粉 口 味差 的缺点 , 这将
会大 大提高玉米 粉 的营养 价值和 食用 价值 。
主要 探讨了猴头 菌固体发酵降解玉米淀粉 的
工艺条件 , 并分析 了发 酵产物中一些 主要 营
养成分 和氨 基酸 的变 化 , 取 得 了 比较满 意的
结果 。
1 材料与方法
1
.
1 菌种及培养基
猴头菌 (eH r ic iu m e r in a e e u s ) H 1 8 从上海农
科院食用菌研究所引进 .
斜 面 菌种 培养基 (% ) : 葡萄糖 1 , 蛋 白脉
19 9 7刃 9 { l收稿