全 文 ：HPLC-ELSD法同时测定三叶青中胡萝卜苷
和 β-谷甾醇的含量
丁 丽1，章璐幸1，邱 彦2
(1．浙江医药高等专科学校药学系，浙江 宁波 315100;2． 厦门大学医学院，福建 厦门 361102)
摘要:目的 建立同时测定三叶青药材中胡萝卜苷和 β-谷甾醇含量的方法。方法 采用 HPLC-ELSD 法，岛津 VPN-ODS C18
柱(150 mm ×4． 6 mm，5 μm)为色谱柱，以甲醇为流动相，体积流量为 0． 7 mL·min －1，柱温为 30℃;漂移管温度 60℃，氮气体
积流量 1． 8 L ·min －1。结果 胡萝卜苷和 β-谷甾醇分别在 0． 1 ～ 2． 0 μg和 0． 2 ～ 4． 0 μg范围内呈良好线性关系，回归方程分
别为 Y = 0． 696X + 2． 737，r = 0． 999 7;Y = 0． 752 X + 2． 909，r = 0． 999 6。平均回收率分别为 99． 32%、100． 13%。结论 该
方法简便，结果准确、可靠，可作为三叶青药材中胡萝卜苷和 β －谷甾醇的含量测定方法，为三叶青质量控制提供依据。
关键词:三叶青;HPLC-ELSD法;胡萝卜苷;β －谷甾醇
doi:10． 3969 / j． issn． 1009 － 6469． 2015． 11． 012
三叶青为葡萄科植物三叶崖爬藤(Tetrastigma-
tis hemsleyani Diels et Gilg)的干燥块根，是浙江民间
常用药之一。现代药理研究表明，三叶青具有解热
镇痛、抗炎、抗病毒、保肝及抗肿瘤等作用［1 － 7］。三
叶青中含有酚类、糖类、黄酮类、甾体类及油脂类等
多种成分［8 － 9］，其中，胡萝卜苷具有免疫调节作
用［10］，而 β-谷甾醇具有降血脂、抗肿瘤、抗炎等作
用［11 － 12］。谷甾醇是胡萝卜苷的苷元，课题组在预
试验中发现，二者在三叶青中的含量较接近，已有
文献报道三叶青中 β-谷甾醇的含量测定［13］，但未
见有同时测定三叶青中此 2 种成分的报道。本实
验采用 HPLC-ELSD法同时测定三叶青中胡萝卜苷
和 β-谷甾醇的含量，为三叶青药材质量标准的建立
提供依据。
1 仪器与试药
Agilent 1260 型高效液相色谱仪(美国安捷伦
公司) ;蒸发光散射检测器 (Agilent 380) ;XS
1050DU型电子分析天平(Mettler Toledo公司)。
β-谷甾醇对照品(中国食品药品生物制品检定
所，批号 110851 － 201407，纯度≥98%) ;胡萝卜苷
对照品(北京北纳创联生物技术研究院，批号
20140926，纯度≥98%) ;甲醇(色谱纯) ;三叶青药
材分别购自杭州市和宁波市各药店，经浙江医药高
等专科学校中药系杨雄志教授鉴定为 Tetrastigma
hemsleyanum Diels et． Gilg的干燥块根。
基金项目:宁波市自然科学基金(No 2012A610181)
2 方法与结果
2． 1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱为岛津
VPN-ODS C18柱(150 mm × 4． 6 mm，5 μm) ;流动相
为甲醇;体积流量为 0． 7 mL ·min －1，柱温为 30℃;
进样量 20 μL;蒸发光检测器，以氮气为载气，漂移
管温度 60℃，体积流量 1． 8 L·min －1。理论塔板数
按胡萝卜苷计不低于 4 000，分离度均大于1． 5。色
谱图见图 1。
图 1 混合对照品(A)和三叶青药材(B)HPLC色谱图
注:1．胡萝卜苷 2． β －谷甾醇。
2． 2 对照品溶液的制备 取胡萝卜苷和 β-谷甾醇
对照品适量，精密称定，置于 100 mL 的量瓶中，加
甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，即制成含胡萝
卜苷 0． 05 g ·L －1和 β-谷甾醇 0． 1 g·L －1的混合对
照品溶液。
2． 3 供试品溶液的制备 将三叶青药材粉碎，过
30 目筛，取粗粉约 3 g，精密称定，置 150 mL圆底烧
瓶中，加入乙酸乙酯 50 mL，水浴加热回流 6 h，趁热
过滤，取滤液，旋干溶剂，残渣用甲醇溶解后转移至
5 mL量瓶中，并稀释至刻度。
2． 4 线性关系 分别精密吸取混合对照品溶液
［9］ 马春靖，闫 冬，姚宏涛，等．加校正因子的主成分自身对照法
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·3802·安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2015 Nov;19(11)
2． 0、5． 0、10． 0、20． 0、30． 0、40． 0 μL，按“2． 1”项色
谱条件测定峰面积，以峰面积的常用对数为纵坐标
(Y)、对照品所进质量的常用对数为横坐标(X) ，进
行线性回归，得胡萝卜苷的回归方程为 Y = 0． 696X
+ 2． 737，r = 0． 999 7;β-谷甾醇的回归方程为 Y =
0． 752 X + 2． 909，r = 0． 999 6。结果表明，胡萝卜
苷在进样量为 0． 1 ～ 2． 0 μg 线性关系良好，β-谷甾
醇在进样量为 0． 2 ～ 4． 0 μg线性关系良好。
2． 5 精密度试验 精密吸取对照品溶液 20 μL，按
“2． 1”项色谱条件，重复进样 6 次。以胡萝卜苷和
β-谷甾醇的峰面积计算，ＲSD 分别为 1．64%、
0． 55%。
2． 6 稳定性试验 取同一份供试品溶液(广西) ，
按“2． 1”项色谱条件，在制备后 0、2、4、6、8、10、12 h
后分别进样，以胡萝卜苷和 β-谷甾醇峰面积计算，
结果 ＲSD分别为 1． 79%、1． 13%，表明供试品溶液
在 12 h内稳定。
2． 7 重复性试验 取广西产三叶青粗粉，按“2． 3”
项下方法，制备 6 份供试品溶，按“2． 1”项色谱条件
测定，测得结果胡萝卜苷和 β-谷甾醇的平均质量分
数分别为 0． 062 mg·g －1和 0． 154 mg·g －1，ＲSD分
别为 2． 03%和 1． 36%。
2． 8 加样回收率试验 取广西产三叶青药材 1． 5 g
粉碎，过 30 目筛，精密称定，置 150 mL圆底烧瓶中，
加入含 0． 050 20 g·L －1胡萝卜苷和 0． 1153 g·L －1
β －谷甾醇的混合对照品溶液 2 mL，按“2． 3”项下
方法制备供试品溶液，平行制备 6 份，按“2． 1”项色
谱条件测定，计算胡萝卜苷和 β-谷甾醇的加样回收
率分别为 99． 32%和 100． 13%，ＲSD 分别为 1． 71%
和 1． 43%。
2． 9 样品测定 取不同产地的药材，按“2． 3”项下
方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，记录
胡萝卜苷和 β-谷甾醇的峰面积，取“2． 2”项下对照
品溶液，分别进样 10、20 μL。按外标二点法计算胡
萝卜苷和 β-谷甾醇的质量分数，结果见表 1。
表 1 三叶青药材中胡萝卜苷和 β-谷甾醇测定结果
产地 胡萝卜苷 /% β －谷甾醇 /%
浙江 0． 011 6 0． 010 2
广西 0． 005 6 0． 006 3
云南 0． 008 7 0． 009 5
安徽 0． 010 4 0． 008 1
贵州 0． 007 2 0． 009 3
3 讨论
本实验考察了安捷伦 ZOＲBAX SB － ODS C18柱
(250 mm ×4． 6 mm，5 μm)和岛津 VPN － ODS C18柱
(150 mm ×4． 6 mm，5 μm) ，结果表明后者能获得较
好的峰形与分离度。选择流动相时，比较了甲醇 －
水、乙腈 －水和甲醇 3 种流动相，结果以甲醇分离
效果最佳。本实验还考察了丙酮、乙酸乙酯、70%
乙醇、95%乙醇 4 种有机溶剂的提取效率，发现乙酸
乙酯提取药材中的两种成分含量均较高;同时对提
取方式、提取时间、物料比进行了考察，得出最佳提
取条件。
三叶青药材化学成分较多，目前主要以黄酮类
成分研究居多［14 － 15］。本实验选取胡萝卜苷和 β －
谷甾醇 2 种指标成分作为三叶青药材的评价依据，
对 5 个产地的三叶青药材中胡萝卜苷和 β －谷甾醇
进行定量测定，结果发现:浙江产三叶青中胡萝卜
苷和 β-谷甾醇的含量均较其他产地高，2 种成分含
量的高低与三叶青药材药理作用的相关性有待进
一步研究。本方法简便，结果准确、可靠，可作为三
叶青药材中胡萝卜苷和 β-谷甾醇的测定方法，为三
叶青的质量控制提供实验依据。
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