全 文 ：HPLC-ELSD法测定胆南星中胆酸类成分的含量
蔡宇忆1，叶永浩1，杨丽莹1，黄玉梅2，吴志坚2，马永德2，李书渊1
(1．广东药科大学 中药学院，广东 广州 510006;2． 广州市药材公司中药饮片厂，广东 广州
510360)
摘要:目的 建立 HPLC-ELSD 法测定胆南星中 4 种胆酸类成分质量分数的方法。方法 色谱柱为
WELCH AQ-C18柱(4． 6 mm × 250 mm，5 μm) ，流动相为乙腈-0． 2%(体积分数)冰醋酸(体积比 60∶ 40) ，
柱温为 30 ℃，流速为 1． 0 mL /min，检测器为 ELSD，载气流速为 2． 2 mL /min，漂移管温度为 90 ℃。结果
胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸、去氧胆酸均在定量范围内呈良好的线性关系，平均回收率分别为 97．
62%、98． 38%、97． 32%、97． 86%。结论 本方法操作简单，测定结果准确，可用于胆南星中胆酸类成分的
质量分数测定及质量控制。
关键词:胆南星;HPLC-ELSD法;胆酸;猪去氧胆酸;鹅去氧胆酸;去氧胆酸
中图分类号:Ｒ284． 1 文献标志码:A 文章编号:1006-8783(2016)03-0311-04
DOI:10． 16809 / j． cnki． 1006 － 8783． 2016032301
收稿日期:2016-03-23
基金项目:广州市荔湾区科技计划(20133115008)
作者简介:蔡宇忆(1991—) ，女，2013 级硕士研究生，Email:406371983@ qq． com;通信作者:李书渊(1963—) ，女，教授，从事中
药物质基础和质量标准研究，Email:1018720684@ qq． com。
网络出版时间:2016-05-24 15:34 网络出版地址:http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /44． 1413． Ｒ． 20160524． 1534． 003． html
Determination of cholic acid constituents from Arisaema cum Bile by HPLC-ELSD
CAI Yuyi1，YE Yonghao1，YANG Liying1，HUANG Yumei2，WU Zhijian2，MA Yongde2，LI Shuyuan1
(1． School of Traditional Chinese Medicine，Guangdong Pharmaceutical University，Guangzhou 510006，
China;2． Guangzhou Materia Company，Guangzhou 510360，China )
Abstract: Objective To develop a HPLC-ELSD method for the determination of cholic acids from Arisaema
cum Bile． Methods WELCH AQ-C18 column ( 4． 6 mm × 250 mm，5 μm) was employed and eluted at 30 ℃
with a mobile phase consisting of acetonitrile-0． 2% glacial acetic acid ( 60 ∶ 40) ，and the flow rate was
1． 0 mL /min． The drift-tube temperature of ELSD was 90 ℃，and the flow rate of air was 2． 2 mL /min．
Ｒesults Cholic acid， hyodeoxycholic acid， chenodeoxycholic acid and deoxidation cholic acid had good
linearity within the quantitative range，and their mean recovery ratios were 97． 62% ，98． 38% ，97． 32% and
97． 86% ，respectively． Conclusion The method was simple and accurate，which could be used for the
determination and quality control of cholic acid constituents from Arisaema cum Bile．
Key words: Arisaema cum Bile; HPLC-ELSD; cholic acid; hyodeoxycholic acid; chenodeoxycholic acid;
deoxidation cholic acid
2015 年版《中国药典》所记载的“胆南星”为制
天南星的细粉与牛、羊或猪胆汁经加工而成，或为生
天南星细粉与牛、羊或猪胆汁经发酵加工而成［1］。
目前，胆南星疗效成分不完全清楚，胆汁为胆南星主
要加工辅料，据现代实验药理学研究报道胆汁具有
一定镇静、安神、调节心血管系统作用［2-3］，因此测定
胆汁酸质量分数可以部分反映胆南星药用质量。古
代胆南星炮制一般用牛胆汁，现在逐步发展成用牛
胆汁、猪胆汁、羊胆汁，甚至可以采用混合胆汁。
2015 年版《中国药典》“胆南星”项下尚无检查项和
含量测定项，其质量评价标准还未完善。由于有关
原药材天南星的毒性物质基础研究比较少，与传统
广东药学院学报
Journal of Guangdong Pharmaceutical University Jun． 2016，32(3)
药效相对应的活性成分还不清楚，不容易从中选择
质量控制的指标成分，所以本研究参照文献［4-5］，
选用胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸、去氧胆酸作为
对照品，首次建立 HPLC-ELSD法同时测定胆南星中
4 种胆酸类成分的质量分数测定方法。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪(日本岛津公司) ，WELCH AQ-
C18色谱柱，Dikma EasyGuard 保护柱;3300 ELSD 蒸
发光散射检测器(美国奥泰公司) ;XWK-Ⅲ无油空
气泵(天津市津分分析仪器制造有限公司) ;BP211D
十万分之一电子天平(德国赛多利斯集团) ;AY120
万分之一电子天平(日本岛津公司) ;SK250HP 科导
超声仪(上海科导超声仪器有限公司) ;ANKE TGL-
16G-A恒温高速离心机(上海安亭科学仪器厂)。
胆酸对照品(中国食品药品检定研究院，批号:
10078-0013) ，猪去氧胆酸对照品(成都曼思特生物
科技有限公司，批号:MUST-14060906) ，鹅去氧胆酸
对照品(中国食品药品检定研究院，批号:110806-
200303) ，去氧胆酸对照品(中国食品药品检定研究
院，批号:724-8601) ;甲醇(分析纯) ;乙腈(色谱
纯) ;蒸馏水。
10 批胆南星样品均产自四川，经广东药科大学
中药学院李书渊教授鉴定符合《中国药典》标准，其
来源详见表 1。
表 1 10 批胆南星样品来源信息表
Table 1 The information of 10 batches of Arisaema cum Bile
编号 批号 购买公司 产地
1 20130901 四川百胜药业有限公司 四川
2 YPA2D002 广州市药材公司中药饮片厂 四川
3 YPA3C001 广州市药材公司中药饮片厂 四川
4 YPA2J001 广州市药材公司中药饮片厂 四川
5 YPA3C003 广州市药材公司中药饮片厂 四川
6 YPA3G001 广州市药材公司中药饮片厂 四川
7 YPA2D001 广州市药材公司中药饮片厂 四川
8 20140604 四川千方中药饮片有限公司 四川
9 20111102 四川千方中药饮片有限公司 四川
10 20130101 四川千方中药饮片有限公司 四川
2 方法与结果
2． 1 混合对照品溶液的制备
分别取胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸、去氧胆
酸对照品适量，精密称定，置于 50 mL 容量瓶中，加
甲醇制成每 1 mL含胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸、
去氧胆酸分别为 0． 205、1． 024、0． 952、0． 398 mg 的
混合对照品溶液。
2． 2 供试品溶液的制备
取胆南星(过 4 号筛)0． 5 g，精密称定，置 50
mL锥形瓶中，加甲醇 10 mL，称定质量，超声处理
(功率 250 W，频率 40 kHz)30 min，冷却，称定质量，
加甲醇补足减失质量，置离心管中离心(12 000 r /
min)10 min，取上清液，用 0． 45 μm 微孔滤膜滤过，
即得。
2． 3 色谱条件及适应性试验
色谱柱:WELCH AQ-C18色谱柱(4． 6 mm × 250
mm，5 μm) ，Dikma EasyGuard 保护柱;流动相:乙腈
－ 0． 2%(体积分数，下同)冰醋酸(体积比 60∶ 40) ，
流速:1． 0 mL /min;柱温:30 ℃;蒸发光检测器载气
流速:2． 2 mL /min，漂移管温度:90 ℃。精密吸取混
合对照品、供试品溶液各 20 μL，按上述条件进行测
定。色谱图见图 1。
1．胆酸;2．猪去氧胆酸;3．鹅去氧胆酸;4．去氧胆酸。
图 1 混合对照品(A)、胆南星供试品(B)溶液的 HPLC-
ELSD色谱图
Figure 1 The HPLC-ELSD chromatogram of mixed references
(A)and Arisaema cum Bile (B)
2． 4 线性关系的考察
分别取胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸、去氧胆
酸混合对照品溶液 0． 1、1、2． 5、5、10 mL置于 10 mL
容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，得系列混合对
照品溶液。分别精密吸取各混合对照品溶液 20
μL，按照“2． 3”项下条件进行测定。以对照品进样
量对数为横坐标(X) ，峰面积的对数为纵坐标(Y)
绘制标准曲线，结果见表 2。由表 2 可知，4 种胆酸
成分均在测定范围内呈良好的线性关系。
213 广东药学院学报 第 32 卷
表 2 胆南星中 4种胆酸类成分的线性范围、回归方程及 r值
Table 2 The linear relationship，regression equations and r
values of four cholic acids in Arisaema cum Bile
成分 线性范围 /μg 回归方程 r
胆酸 0． 041 ～ 4． 1 Y = 1． 049 1X + 12． 103 8 0． 999 5
猪去氧胆酸 0． 204 8 ～ 20． 48 Y = 1． 022 6X + 12． 048 6 0． 999 1
鹅去氧胆酸 0． 190 4 ～ 19． 04 Y = 1． 018 2X + 11． 652 4 0． 999 0
去氧胆酸 0． 079 6 ～ 7． 96 Y = 1． 021 7X + 11． 588 3 0． 999 5
2． 5 精密度试验
精密吸取混合对照品溶液 20 μL，按“2． 3”项下条
件进行测定，重复 6次，记录胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧
胆酸和去氧胆酸的峰面积，计算其 ＲSD 值分别为 0．
38%、0． 86%、0． 84%、1． 33%，表明仪器精密度良好。
2． 6 稳定性试验
取同一批胆南星粉末(批号:20130901)约 0． 5
g，精密称定，按“2． 2”项下制备供试品溶液，于室温下
放置 0、2、4、8、12、24 h 后分别进样，按“2． 3”项下色谱
条件测定，记录胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸和去氧
胆酸的峰面积，计算其 ＲSD值分别为 1． 81%、1． 48%、
1． 72%、1． 43%，表明供试品溶液在 24 h内稳定。
2． 7 重复性试验
取同一批胆南星粉末(批号:20130901)约
0． 5 g，精密称定，按“2． 2”项下方法制备供试品溶
液，重复操作 6 份。分别按“2． 3”项下色谱条件测
定并记录胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸和去氧胆酸
的峰面积。计算得胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸和
去氧胆酸质量分数的 ＲSD 值分别为 2． 86%、1．
98%、2． 21%、2． 50%，表明方法重复性好。
2． 8 加样回收率试验
取已知胆酸成分总质量分数的同一批胆南星粉
末(批号:20130901)约 0． 25 g，共 6 份，精密称定，分
别加入适量胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸和去氧胆
酸对照品溶液，分别按照“2． 2”项下方法制备供试
品溶液，按“2． 3”项下色谱条件测定，记录胆酸、猪
去氧胆酸、鹅去氧胆酸和去氧胆酸的峰面积，计算其
平均回收率分别为 97． 62%、98． 38%、97． 32%、97．
86%，ＲSD 值分别为 2． 11%、1． 96%、1． 86%、2．
48%。结果见表 3。
表 3 胆南星中 4 种胆酸类成分的加样回收率试验结果
Table 3 The recovery results of four cholic acids in Arisaema cum Bile (n = 6)
成分 样品量 /g 样品中的量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% 平均回收率 /% ＲSD值 /%
胆酸 0． 254 2 0． 261 8 0． 204 6 0． 459 9 96． 82 97． 62 2． 11
0． 250 4 0． 257 9 0． 204 6 0． 464 4 100． 93
0． 247 6 0． 255 0 0． 204 6 0． 455 2 97． 84
0． 251 9 0． 259 5 0． 204 6 0． 461 7 98． 84
0． 249 8 0． 2573 0． 204 6 0． 453 5 95． 91
0． 252 6 0． 260 2 0． 204 6 0． 455 3 95． 37
猪去氧胆酸 0． 254 2 0． 422 0 0． 409 6 0． 825 1 98． 43 98． 38 1． 96
0． 250 4 0． 415 7 0． 409 6 0． 825 8 100． 13
0． 247 6 0． 411 0 0． 409 6 0． 819 9 99． 82
0． 251 9 0． 418 2 0． 409 6 0． 815 0 96． 89
0． 249 8 0． 414 7 0． 409 6 0． 805 0 95． 30
0． 252 6 0． 419 3 0． 409 6 0． 827 8 99． 73
鹅去氧胆酸 0． 254 2 0． 429 6 0． 380 8 0． 809 8 99． 83 97． 32 1． 86
0． 250 4 0． 423 2 0． 380 8 0． 788 1 95． 82
0． 247 6 0． 418 4 0． 380 8 0． 795 4 98． 99
0． 251 9 0． 425 7 0． 380 8 0． 792 7 96． 38
0． 249 8 0． 422 2 0． 380 8 0． 785 1 95． 31
0． 252 6 0． 426 9 0． 380 8 0． 798 5 97． 69
去氧胆酸 0． 254 2 0． 307 6 0． 398 4 0． 687 5 95． 35 97． 86 2． 48
0． 250 4 0． 303 0 0． 398 4 0． 700 7 99． 84
0． 247 6 0． 299 6 0． 398 4 0． 681 0 95． 74
0． 251 9 0． 304 8 0． 398 4 0． 702 3 99． 77
0． 249 8 0． 302 3 0． 398 4 0． 702 9 100． 57
0． 252 6 0． 305 6 0． 398 4 0． 687 8 95． 91
313第 3 期 蔡宇忆，等． HPLC-ELSD法测定胆南星中胆酸类成分的含量
2． 9 样品测定
分别取 10 批胆南星样品粉末，各 0． 5 g，精密称
定，每批重复操作 2 份，分别按“2． 2”项下方法制备
供试品溶液，按“2． 3”项下条件测定并记录胆酸、猪
去氧胆酸、鹅去氧胆酸、去氧胆酸的峰面积，分别计
算 4 种胆酸类成分的质量分数及其总质量分数。结
果见表 4。
表 4 胆南星中 4 种胆酸成分及总质量分数的测定结果
Table 4 The determination results of four cholic acids in
Arisaema cum Bile(n = 2) w /%
序号 胆酸
猪去氧
胆酸
鹅去氧
胆酸
去氧
胆酸
胆酸类
成分
1 0． 103 0． 166 0． 169 0． 121 0． 559
2 0． 016 1． 280 0． 184 0． 051 1． 531
3 0． 055 0． 416 1． 425 0． 138 2． 035
4 － 0． 464 0． 492 － 0． 956
5 0． 012 0． 676 1． 259 － 1． 947
6 － 0． 735 0． 616 － 1． 351
7 － 0． 541 0． 470 － 1． 011
8 － 0． 357 0． 207 － 0． 564
9 － 0． 227 0． 125 － 0． 352
10 － 0． 072 0． 066 － 0． 138
注:“－”表示未检出。
3 讨论
本实验旨在研究建立同时测定胆南星中 4 种胆
酸类成分的方法，从而为制定胆南星的质量标准提
供依据。由张能荣［6］对牛、羊、猪胆汁中 15 种成分
的研究结果可知:牛、羊胆汁中无猪去氧胆酸，猪胆
汁中不含胆酸与去氧胆酸，而鹅去氧胆酸为 3 种胆
汁共有的成分，据此可以判断市售的胆南星药材在
炮制过程中加入了何种胆汁。从本试验结果可以看
出，所检测 10 个批次的胆南星中采用的胆汁辅料大
多是猪胆汁，部分批次采用的是混合胆汁;各样品胆
酸类成分的质量分数差异较大，可能是由于加工过
程中加入胆汁类型和加入胆汁量不同导致的———因
此把胆酸类成分作为胆南星的质量控制指标是必不
可少的。方法学考察结果表明，本法操作简单，测定
结果准确、重复性好，可用于胆南星胆酸类成分的质
量分数测定和质量控制。
参考文献:
［1］国家药典委员会． 中华人民共和国药典:2015 年版一
部［M］．北京:中国医药科技出版社，2015:245．
［2］王凯平，石朝周．动物胆汁药用研究的概况与展望［J］．
中国中医药科技，2000，7(5) :350-352．
［3］白万富，鞠爱华，杨乾．牛胆汁的化学成分及临床应用的
研究进展［J］．中华中医药杂志，2008，23(2) :149-151．
［4］赫炎，张永欣，赵惠东，等． HPLC 测定胆南星中猪去氧
胆酸的含量［J］． 中国中药杂志，2007，32(16) :1634-
1636．
［5］王光函，姜鸿，邹桂欣，等． HPLC-ELSD 法测定胆南星中
胆酸含量［J］．亚太传统医药，2014，10(22) :8-9．
［6］张能荣．牛羊胆汁质量的研究［J］．中草药，1983，14(7):15．
(责任编辑:刘晓涵
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)
科学家发现弓形虫与神经退行性疾病的联系
全球约 1 /3 的人口感染弓形虫，弓形虫主要通过食用未煮熟的肉或未洗净的蔬菜摄入。孕妇在妊娠期间感
染弓形虫，弓形虫可通过胎盘传给胎儿，影响胎儿的发育，造成胎儿畸形，甚至死亡。加州大学的研究人员通过小
鼠实验发现，感染弓形虫会导致大脑神经递质破坏，促使有神经疾病倾向的小鼠发病。相关研究结果于 2016 年 6
月 9 日发表在《PLOS Pathogens》上。
谷氨酸为神经元之间兴奋信号的传递递质，谷氨酸积累被认为是创伤性脑损伤及神经退行性疾病如癫痫、多
发性硬化和肌萎缩性侧索硬化症等疾病的重要病理证据。星形胶质细胞通过谷氨酸转运蛋白 GLT-1 去除细胞外
的谷氨酸，避免谷氨酸在细胞外累积至病理水平，损害神经元。其机制为 GLT-1 吸收神经元释放的谷氨酸，将谷
氨酸转化为可被细胞转化成能量的物质———谷氨酰胺。研究人员发现，弓形虫感染时 GLT-1 不能正确表达，导致
细胞外谷氨酸积累。
下一步，研究人员将研究弓形虫感染引发 GLT-1 下调的机制。
(PLOS Pathogens，2016，DOI:10． 1371 / journal． ppat． 1005643 温玉琴 编译)
413 广东药学院学报 第 32 卷