全 文 ：浙江中医药大学学报 2014年 1月第 38卷第 1期
红腺忍冬叶不同溶剂提取物中葡萄糖
和果糖的含量变化研究
郭鑫艳 施思 朱英
浙江中医药大学药学院 杭州 310053
摘要：[目的] 建立用 HPLC-ELSD法测定红腺忍冬叶提取物中葡萄糖和果糖含量的方法，并应用此方法研究红腺忍冬叶不同溶剂提取物中葡萄糖
和果糖含量的变化。[方法] 采用 Lichrospher NH2色谱柱，乙腈-水(90:10)为流动相，柱温 25℃，流速 0.8mL/min；ELSD漂移管温度 70℃，载气为氮
气，流速 1.6L/min。[结果] 红腺忍冬叶提取物中的葡萄糖和果糖能够得到较好地分离，葡萄糖和果糖的线性范围分别为 0.5840~1.168mg·mL-1、
0.8256~1.8576mg·mL-1，r分别为 0.9994、0.9991；平均加样回收率分别为 96.88%、97.55%，RSD分别为 1.11%、1.15%；葡萄糖和果糖的稳定性(RSD)
分别为 2.12%、0.38%，重复性(RSD)分别为 1.31%、0.24%。其中，水提物中葡萄糖和果糖的含量最高（分别为 2.19mg·mL-1、4.10mg·mL-1），50%醇提物
次之（含量分别为 1.13mg·mL-1、2.12mg·mL-1），95%醇提物中含量最低（分别为 0.45mg·mL-1、0.65mg·mL-1）。[结论] 该方法简单、准确、重复性好，可
用于测定红腺忍冬叶提取物中葡萄糖和果糖的含量。该批次红腺忍冬叶中，葡萄糖和果糖含量为水提液>50%乙醇提取物>95%乙醇提取物。
关键词：红腺忍冬叶；HPLC-ELSD法；葡萄糖；果糖
中图分类号：R282.71 文献标识码：A 文章编号：1005-5509（2014）01-0073-05
Study on the Content Change of Glucose and Fructose in Different Solvents Extracts of Leaves of Lonicera Hypoglauca Miq. Guo Xinyan, Shi
Si, Zhu Ying College of Pharmaceutical Science, Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou, China(310053)
Abstract: [Objective]To establish a method to determine the contents of glucase and fructose in extracts of leaves of Lonicera hypoglauca Miq. using
HPLC-ELSD, and apply this method to study the content change of glucose and fructose in different solvents extracts in leaves of Lonicera hypoglauca
Miq. [Methods] The chromatographic separation was achieved on Lichrospher NH2 column using a mobile phase composed of a mixture of acetonitrile
and water(90:10) at a flow rate of 0.8mL·min-1 and the column temperature was 25℃.The ELSD drift tube temperature was set at 70℃ and the carrying
gas was N2 and the flow rate of the gas was 1.6L·min-1. [Results] Glucose and fructose from extracts of the leaves of Lonicera hypoglauca Miq. could be
well separated, and the linearity ranges of glucose and fructose were shown at the concentration of 0.5840~1.168mg·mL-1 and 0.8256~1.8576mg·mL-1,
the average recovery rate of glucose and fructose were 96.88%(RSD=1.11%) and 97.55%(RSD=1.15%), the stability of glucose and fructose was 2.12% and
0.38%, and the repeatability was 1.31% and 0.24%. Among the water extract，50% alcohol extract and 95% alcohol extract，the content of the glucose and
fructose in the water extract was highest，which was 2.19mg·mL and 4.10mg·mL-1, the 50% alcohol extract was second, which was 1.13mg·mL-1 and
2.12mg·mL-1, and the 95% alcohol extract was lowest, which was 0.45mg·mL-1 and 0.65mg·mL-1.[Conclusion] The method is simple, accurate and has
good repeatability, and can be used to determine the contents of glucose and fructose in the extract of leaves of Lonicera hypoglauca Miq. In this batch of
leaves of Lonicera hypoglauca Miq., the contents of fructose and glucose were of water extract>50% ethanol extract >95% ethanol extract.
Key words: leaves ofLonicera hypoglauca Miq. ; HPLC-ELSD; glucose; fructose
红腺忍冬 Lonicera hypoglauca Miq. 为忍冬科忍
冬属藤本植物，以干燥花蕾或带初开的花入药，具有
清热解毒、疏散风热的功效，为中药山银花的植物来
源之一[1]。目前，中国药典规定山银花的药用部位是
红腺忍冬等植物的花蕾部分，而红腺忍冬叶一直被
视为非药用部位而被弃之，从而造成了极大浪费。因
此，为了综合利用红腺忍冬植物资源，有必要对红腺
忍冬叶等其他部位进行药理、化学等方面的系统研
究。本课题组前期实验表明，红腺忍冬叶水提物、50%
乙醇提取物和 95%乙醇提取物都具有一定的体内外
抗氧化作用，其中水提液抗氧化效果较佳[2]。目前，关
于忍冬属植物化学成分的报道虽较多，但对红腺忍
冬叶中的单糖类成分的结构及含量未见报道，为此本
实验对红腺忍冬叶水提物、50%乙醇提取物和 95%乙
醇提取物中的葡萄糖和果糖含量进行了研究，旨在为
红腺忍冬叶的化学研究及其质量控制提供一定的实
验依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器 Agilent 1260高效液相色谱仪；十万分之
一电子分析天平（AL104型）；Alltech 3300蒸发光散
射检测器；KQ-250E型超声波清洗器（昆山市超声仪
器有限公司）；超纯水仪（杭州景元科技有限公司）；华
迪超导热风干燥箱（浙江新昌暖通设备厂）。
1.2 试药 果糖对照品（中国药品生物制品检定所，
JO
U
RN
AL
O
F
ZH
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G
CH
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ESE
M
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U
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VO
L.
38
N
O
.1
Jan.
2014
中
药
研
究
————————
基金项目:浙江省自然科学基金(Y2100832)
Fund Project: The Natural Science Fund of Zhejiang Province(Y2100832)
通讯作者:朱英,E-mail: zhuyinggww@163.com
73
DOI:10.16466/j.issn1005-5509.2014.01.024
浙江中医药大学学报 2014年 1月第 38卷第 1期
郭
鑫
艳
，
等
：
红
腺
忍
冬
叶
不
同
溶
剂
提
取
物
中
葡
萄
糖
和
果
糖
的
含
量
变
化
研
究
批号 100231-200904，含量为 99.6%）。D-无水葡萄糖
（中国食品药品检定研究院，批号 110833-201205，含
量以 99.5%计）。红腺忍冬叶 2012年 7月采集于浙
江省温州市，经本校药用植物教研室陈锡林副教授鉴
定为忍冬科植物红腺忍冬（Lonicera hypoglauca Miq．）
的叶子。HPLC所用试剂为色谱纯，水为超纯水，其他
试剂为分析纯。
2 溶液制备
2.1 红腺忍冬叶提取物的制备
2.1.1 红腺忍冬叶水提物的制备 取药材 10g，石油
醚脱脂 2 次，每次 24h，弃去石油醚，药材挥至无醚
味，加 12 倍量蒸馏水，煎煮 2 次（保持水位），每次
1h，趁热过滤，浓缩定容至 50mL，即得。
2.1.2 红腺忍冬叶 50%醇提物和 95%醇提物的制备
按 2.1.1项下同条件脱脂后，同条件分别用 50%乙醇
和 95%乙醇回流提取两次，分别过滤合并滤液，回收
乙醇，得 50%醇提浸膏和 95%醇提浸膏。浸膏分别加
水溶解，过滤，滤液分别定容至 50mL，即得。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取 D-无水葡萄糖
对照品 0.0292g，蒸馏水定容于 25mL 容量瓶中，配
置成 1.168 mg·mL-1的 D-无水葡萄糖对照品溶液。
精密称取果糖对照品 0.0516g，蒸馏水定容于 25mL
容量瓶中，配置成 2.064 mg·mL-1的果糖对照品溶
液。
2.3 供试品溶液的制备 分别精密量取红腺忍冬叶
水提液等 4mL，置 10mL容量瓶中，加蒸馏水定容至
刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液，作为供
试品溶液。
2.4 阴性供试品溶液的制备 除红腺忍冬叶外，按
供试品溶液制备方法制成阴性供试品溶液。
3 方法与结果
3.1 色谱条件 色谱柱：Lichrospher NH2柱(250mm×
4.6mm,5μm)；流动相：乙腈-水=90:10；流速：0.8mL/
min；ELSD气化室温度 70℃；气体流速：1.6L/min；柱
温：25℃；增益：1；载气：氮气；进样量：20μL。
3.2 系统适应性试验 分别吸取 D-无水葡萄糖对
照品溶液、果糖对照品溶液、供试品溶液及阴性供试
品溶液各进样 20μL，按 3.1色谱条件测定，样品与对
照品在相同位置有单一峰，阴性对照无干扰。结果见
图 1。
A B
1
2
C
1
D
2
图 1 高效液相色谱图
1-果糖；2-葡萄糖
A.阴性供试品；B.果糖对照品；C.葡萄糖对照品；D.供试品
Fig.1 HPLC chromatograms
1-fructose；2-glucose
A. negative test sample；B. fructose standard samples；C. glucose standard samples；D. sample
3.3 线性关系的考察 分别精密量取 D-无水葡萄
糖对照品溶液 1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、2.0mL 置 2mL 棕
色容量瓶中，加水稀释至刻度。取稀释液 20μL进样，
按 3.1色谱条件分别测定，以峰面积(A)对浓度(C)进
行线性回归，得葡萄糖回归方程：A=6714.8C-1571.7，
r=0.9994，葡萄糖在 0.5840~1.168mg·mL-1浓度范围
内，与峰面积的积分呈良好的线性关系。
分别精密量取果糖对照品溶液 0.8、1.0、1.2、1.4、
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提液 2mL6 份，分别置于 10mL 容量瓶中，分别精密
加入果糖、葡萄糖，超声处理 15min，再加蒸馏水至
刻度，摇匀，按 2.3 制备供试品溶液，按 3.1 色谱条
件，进样 20μL，计算回收率，结果见表 4~表 5。
3.8 样品含量测定 精密吸取红腺忍冬叶水提物、
50%醇提物、95%醇提物 4mL各 3份，定容至 10mL容
量瓶里，按 2.3制备供试品溶液，按 3.1色谱条件测
定，结果如下。
4 讨论
目前，测定糖类成分含量的方法主要有苯酚-硫
酸法、蒽酮-硫酸法、二硝基水杨酸法、气相色谱法和
液相色谱法。常规的苯酚-硫酸法、蒽酮-硫酸法和
二硝基水杨酸法只能测定总还原糖，不能测定各种
糖的含量。气相色谱法因在测定糖含量上具有选择
1.6、1.8mL置 2mL棕色容量瓶中，加水稀释至刻度。
取稀释液 20μL进样，按 3.1色谱条件分别测定，以峰
面积(A)对浓度(C)进行线性回归，得果糖回归方程：A=
8472.1C-3746.8，r=0.9991，在 0.8256~1.8576mg·mL-1
浓度范围内，与峰面积的积分呈良好的线性关系。
3.4 精密度试验 取同一对照品溶液，按 3.1色谱
条件，重复进样 6次，进样 20μL，测定峰面积。结果
见表 1。
表 1 精密度试验结果
Tab.1 The test results of the precision
1 2 3 4 5 6 RSD(%)
葡萄糖峰面积
果糖峰面积
1913
1473
1915
1443
1967
1419
2000
1490
1890
1440
1937
1453
2.33
1.94
3.5 稳定性试验 取同一份供试品溶液，按 3.1色
谱条件，分别于 0、2、4、6、12、24h进样 20μL，结果见
表 2，表明测定葡萄糖、果糖时，供试品溶液在 24h
内均稳定。
表 2 稳定性试验结果
Tab.2 The test result of stability
1 2 3 4 5 6 RSD(%)
葡萄糖峰面积
果糖峰面积
4311
10201
4424
10127
4442
10155
4529
10227
4516
10133
4317
10171
2.12
0.38
3.6 重复性试验 按 2.3制备红腺忍冬叶水提物供
试品溶液 6份，按 3.1色谱条件，进样 20μL，计算含
量，结果见表 3。
3.7 加样回收率试验 精密量取已测定含量的水
表 4 葡萄糖加样回收率试验结果（n=6）
Tab.4 The test results of the recovery of glucose（n=6）
样品含量(mg) 加入量(mg) 测得量(mg) 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%)
9.6634
9.6499
9.6615
9.6789
9.6654
9.6769
9.6480
9.6480
9.6480
9.6480
9.6480
9.6480
19.0702
19.1049
18.9718
18.8638
18.9564
19.1126
97.5
98.0
96.5
95.2
96.3
97.8
96.88 1.11
郭
鑫
艳
，
等
：
红
腺
忍
冬
叶
不
同
溶
剂
提
取
物
中
葡
萄
糖
和
果
糖
的
含
量
变
化
研
究
表 3 重复性试验结果
Tab.3 The test results of repeatability
时间(h) 0 2 4 6 12 24 RSD(%)
葡萄糖含量(mg·mL-1)
果糖含量(mg·mL-1)
4311
10201
4424
10127
4442
10155
4529
10227
4516
10133
4317
10171
2.12
0.38
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表 5 果糖加样回收率试验结果（n=6）
Tab.5 The test results of the recovery of fructose（n=6）
样品含量(mg) 加入量(mg) 测得量(mg) 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%)
17.6617
17.6370
17.6582
17.6899
17.6652
17.6864
17.6330
17.6330
17.6330
17.6330
17.6330
17.6330
35.0302
35.0760
35.5682
34.7586
34.9455
34.8257
98.5
98.9
95.9
96.8
98.0
97.2
97.55 1.15
表 6 红腺忍冬叶水提物和醇提物中葡萄糖和果糖的含量(n=3)
Tab.6 The test results of the content of fructose and glucose in the water extract and alcohol extract of the Lonicera
hypoglauca Miq. (n=3)
葡萄糖(mg·mL-1) RSD(%) 果糖(mg·mL-1) RSD(%)
水提物
50%醇提物
95%醇提物
2.19
1.13
0.45
1.38
1.10
1.23
4.10
2.12
0.65
0.91
1.09
0.86
性好、样品用量少、分辨率高、快速准确、灵敏等优
点，得到广泛应用。但气相色谱法测定糖类时，由于
糖类的挥发性不足，必须将其转化为挥发性衍生物
才能进行测定，步骤繁琐，耗时长，同时不可避免地
增加了试验误差。与以上方法比较，高效液相色谱法
测定单糖类成分含量时步骤相对简单，无需衍生化，
对单糖和低聚糖的分析效果较好，但通常所用的示
差折光检测器易受前沿峰的干扰，使得分析复杂化，
并且示差检测器对温度极其敏感，基线很不稳定，与
梯度洗脱不相容。紫外检测器因要求被分析化合物
带有发色团，故在使用时受到限制。蒸发光散射检测
器是基于色谱柱流出物雾化后的不挥发性溶质颗粒
的光散射电信号对样品的定性定量测定分析，对物
质的响应不依赖于样品的光学特性，灵敏度高、无溶
剂峰干扰，故广泛应用于测定糖类成分含量。
在实际操作中参考有关文献报道 [3-5]，分别选择
了 70:30、75:25、80:20、85:15、90:10 的乙腈-水作为
流动相，结果发现流动相中水的比例越大分离度越
小，但出峰越快，最终选择了 90:10 的流动相配比。
同时还考查了 1.2、1.0、0.8mL/min 的流速对分离效
果的影响，发现流速越大出峰时间越早，但分离效果
不好，分离度低，而 0.8mL/min的流速分离效果最
好。实验中还考查了不同检测器温度对分离效果的
影响，结果是检测器温度对分离效果无明显影响，鉴
于较低温度下仪器能耗较低、升温时间短，所以采用
70℃作为最佳温度。此外，还考察了不同溶剂甲醇、
乙醇对色谱图的影响，发现甲醇和乙醇处理过的样
品放置一段时间后会有沉淀，不利于样品的保存，故
选水作为溶剂。
目前，关于忍冬属植物化学成分的报道较多，但
对糖类成分的研究较少。陈有根等[6]采用 RP-HPLC-
ELSD 对三种经典工艺生产的金银花提取物中葡萄
糖、果糖和蔗糖的含量进行了比较，邓庆华等 [7]采用
气相色谱法检测到了金银花样品中鼠李糖、阿拉伯
糖、甘露糖、半乳糖及果糖。但未见对红腺忍冬叶中
的单糖类成分的结构及含量进行研究，故本文采用
HPLC-ELSD 法测定了红腺忍冬叶提取物中的果糖
和葡萄糖含量，且该方法分离效果佳、准确、重复性
好并且简单快速，可为红腺忍冬叶的化学研究及其
质量控制提供一定的实验依据。
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叶
不
同
溶
剂
提
取
物
中
葡
萄
糖
和
果
糖
的
含
量
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总结各种并发症，主要原因是技术不熟练、操作
粗暴、术后观察处理不当造成出血、血肿、皮下积液致
皮肤营养障碍、皮肤成活不良以及皮下腺体残留等所
致。在该手术过程中，如何减少出血，防止发生血肿
是手术成败的关键。总结以上经验，第 1：手术操作避
免粗暴[7]。第 2：正确的分离平面[8]。第 3：可靠的包扎
固定[9]。第 4：通畅的引流[10]。第 5：早期的术区观察[11]。
微小切口盲剪吸刮术治疗腋臭的临床效果肯定，
手术去除皮下大汗腺，同时去除皮下毛囊皮脂腺复合
体脱除腋毛治疗更彻底，疗效更佳，复发明显减少，而
并发症无明显增多。随着技术的精炼，并发症可有效
减少，有一定的临床应用价值。
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(收稿日期：2013-07-09)
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