全 文 ：三叶青高效快繁技术体系的建立
邵骏骅，邵卫平，刘永立* (浙江大学农业与生物技术学院，浙江杭州 310012)
摘要 ［目的］研究三叶青快繁技术。［方法］以药用植物三叶青组培苗的节部为外植体，研究了植物生长调节剂对三叶青增殖和生根
的影响。［结果］在含有 6-BA 0． 5 mg /L + NAA 0． 1 mg /L的 MS培养基中，三叶青增殖倍数最大;而三叶青的最佳生根培养基为 MS +
IBA 0． 5 mg /L。生根的三叶青经过驯化后移栽到含有蛭石、草炭、珍珠岩(3∶ 6∶ 1)的混合基质中，一个月后成长为健康植株。［结论］该
研究建立的三叶青高效快繁体系，为解决三叶青的人工栽培所需种苗提供了技术支撑。
关键词 三叶青;组织培养;增殖;生根;移栽驯化
中图分类号 S567 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2015)35 －208 －02
Establishment of Efficient Micropropagation System of Tetrastigma hemsleyanum
SHAO Jun-hua，SHAO Wei-ping，LIU Yong-li* (College of Agriculture ＆ Biotechnology，Zhejiang University，Hangzhou，Zhejiang
310012)
Abstract ［Objective］To study rapid propagation technique of Tetrastigma hemsleyanum． ［Method］Using medicinal plant Tetrastigma hems-
leyanum as experimental material，the effects of plant growth regulators on Tetrastigma hemsleyanum’s multiplication and rooting were studied．
［Ｒesult］The results showed that in 6-BA 0． 5 mg /L + NAA 0． 1 mg /L medium，Tetrastigma hemsleyanum’s proliferation rate is the largest;
Yet the best rooting medium is MS + IBA 0． 5 mg /L． The plants with roots after domestication transplanted to mixed substrate containing ver-
miculite，peat，perlite (3∶ 6∶ 1)． After a month，it grow into a healthy plant． ［Conclusion］This study established an efficient micropropaga-
tion system of Tetrastigma hemsleyanum，providing the technical support to solve Tetrastigma hemsleyanum’s needed for artificial cultivation of
seedlings．
Key words Tetrastigma hemsleyanum;Tissue culture;Multiplication;Ｒooting;Domesticated cultivation
基金项目 玉环县科技局科技攻关项目“玉环植物种苗快繁技术及其
产业化”。
作者简介 邵骏骅(1990 －) ，男，浙江杭州人，硕士研究生，研究方向:
植物生物技术。* 通讯作者，教授，博士，硕士生导师，从事
植物生物技术研究。
收稿日期 2015-11-13
三叶青是我国特有植物，含黄酮类、三萜类化合物及蒲
公英萜醇等，为用途广泛的珍稀名贵中药材［1］。具有清热解
毒、祛风化痰、活血止痛、抗肿瘤、保肝、抗炎、调节免疫等药
理作用，基本无毒［2 －3］。三叶青对于生长环境要求严苛，自
然条件下生长速度缓慢［4］。因对野生三叶青资源的过度利
用及自然环境恶化，致使其野生资源已濒临灭绝，因此开展
三叶青组织培养及人工栽培十分重要，并有人已进行了初步
研究［5 －7］。笔者以药用植物三叶青组培苗的节部为外植体，
研究了植物生长调节剂对三叶青增殖和生根的影响，通过对
三叶青开展组培快繁技术研究，不仅能提供大量医药原材
料，也有保护已濒临灭绝的三叶青野生资源的作用。
1 材料与方法
1． 1 材料 以三叶青组培苗的幼嫩带腋芽茎段为外植体，
该材料原产于浙江省台州地区。
1． 2 方法
1． 2． 1 增殖培养试验。切取带腋芽茎段接种到 20 个不同
激素浓度组合 6-BA(0． 1、0． 2、0． 5、1． 0、2． 0 mg /L )、NAA
(0. 02、0． 10、0． 20、0． 50 mg /L)的MS培养基中。附加30 g /L
蔗糖、7 g /L 琼脂粉，pH = 5． 7。组织培养室中光强为 30
μmol /(m2·s)，温度为(25 ±2)℃。培养 8周后，分别统计每
个处理的增殖倍数和株高。
1． 2． 2 生根培养试验。切取带腋芽茎段接种到含不同浓度
IBA的 MS培养基中，研究 4个不同浓度 IBA(0、0． 1、0． 5、1． 0
mg /L )对三叶青生根的影响。培养 4、6周后，分别统计每个
处理的根数、根长。
1． 2． 3 品种和光照试验。研究品种(原始品种、“早生”品
种)、光照(不遮光、遮光 50%)对三叶青组培苗生长发育的
影响，切取带腋芽茎段接种到含 6-BA 0． 5 mg /L + NAA 0． 1
mg /L的 MS培养基中培养 4周后，分别统计每个处理的出芽
率、增殖倍数、株高和节数。
1． 2． 4 驯化移栽试验。选取生长情况良好的三叶青试管
苗，炼苗后洗去根部的培养基，栽植于装有蛭石、草炭、珍珠
岩(3∶ 6∶ 1)混合基质的塑料盆中。第 1周浇足水后覆盖塑料
薄膜，置于阴凉处，3 d以后逐渐揭开塑料薄膜至 1周后完全
去除。
2 结果与分析
2． 1 增殖培养试验结果 由表 1 ～ 2可知，生长调节剂对植
株的增殖倍数和株高均有显著影响。在 6-BA 浓度 ＜ 1． 0
mg /L 时，增殖倍数随着 6-BA浓度的升高而升高，植株较高，
但当6-BA浓度≥1． 0 mg /L时，密集的丛生芽开始增多，少许
出现愈伤组织，植株较矮，因此 6-BA浓度以 0． 5 mg /L为宜。
加 0． 5 mg /L 6-BA时，增殖倍数随 NAA浓度的增大而减小，
株高随 NAA浓度的增大而增大，且 0． 10 和 0． 02 mg /L NAA
时增殖倍数差异不显著，0． 10、0． 20、0． 50 mg /L NAA时株高差
异不显著，所以 NAA浓度以 0． 10 mg /L为宜。因此 6-BA 0． 5
mg /L +NAA 0． 1 mg /L 为三叶青增殖培养中最佳激素组合。
2． 2 生根培养试验结果 从表 3可看出，平均根数随着 IBA
浓度升高而升高，当 IBA 浓度达 0． 5 mg /L后，趋于平缓，当
IBA为 0． 5 mg /L时为最大值 4． 04;平均根长受 IBA 影响不
大，低浓度时(＜0． 5 mg /L)的平均根长略大于高浓度时的平
均根长。因此 0． 5 mg /L为生根试验最佳 IBA 浓度。此外，
试验数据显示 4个处理的生根率均为 100%。由此可见 IBA
(吲哚丁酸)促进三叶青生根的效果显著。
责任编辑 黄小燕 责任校对 况玲玲安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2015，43(35):208 － 209
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2015.35.076
表 1 植物生长调节剂对三叶青增殖倍数的影响
6-BA
mg /L
NAA∥mg /L
0． 02 0． 10 0． 20 0． 50
0． 1 1． 26 ±0． 10abc 1． 52 ±0． 12bcde 1． 17 ±0． 08ab 1． 00 ±0． 00a
0． 2 1． 75 ±0． 11cde 1． 67 ±0． 14cde 1． 45 ±0． 13abcd 1． 13 ±0． 07ab
0． 5 2． 63 ±0． 14gh 2． 30 ±0． 19fg 2． 00 ±0． 20ef 1． 88 ±0． 18def
1． 0 2． 58 ±0． 15gh 2． 66 ±0． 17gh 3． 33 ±0． 21hi 2． 96 ±0． 15hi
2． 0 2． 42 ±0． 21gh 1． 13 ±0． 09ab 3． 05 ±0． 18i 2． 79 ±0． 17h
注:数据后不同小写字母表示处理间差异显著(P ＜0． 05)。
表 2 植物生长调节剂对三叶青株高的影响 cm
6-BA
mg /L
NAA∥mg /L
0． 02 0． 10 0． 20 0． 50
0． 1 3． 96 ±0． 37cd 3． 55 ±0． 33c 5． 92 ±0． 29f 4． 93 ±0． 43e
0． 2 3． 87 ±0． 29cd 4． 71 ±0． 27e 5． 71 ±0． 29f 5． 78 ±0． 38f
0． 5 3． 25 ±0． 18c 4． 59 ±0． 24de 4． 35 ±0． 26de 5． 03 ±0． 31e
1． 0 2． 32 ±0． 14b 3． 36 ±0． 17c 2． 34 ±0． 13b 2． 48 ±0． 13b
2． 0 2． 27 ±0． 11b 6． 22 ±0． 39f 1． 61 ±0． 08a 1． 52 ±0． 05a
注:数据后不同小写字母表示处理间差异显著(P ＜0． 05)。
表 3 IBA对三叶青生根数量和根长的影响
IBA
mg /L
根数
4周 6周
根长∥cm
4周 6周
0 2． 62 ±0． 28a 3． 04 ±0． 23a 1． 99 ±0． 13a 2． 93 ±0． 16b
0． 1 2． 62 ±0． 23a 3． 12 ±0． 25a 2． 20 ±0． 15a 2． 94 ±0． 18b
0． 5 3． 95 ±0． 34b 4． 04 ±0． 33b 1． 57 ±0． 08b 2． 73 ±0． 11a
1． 0 3． 50 ±0． 24b 3． 95 ±0． 29b 1． 43 ±0． 08b 2． 64 ±0． 11ab
注:同列数据后不同小写字母表示处理间差异显著(P ＜0． 05)。
2． 3 品种和光照试验结果 由表 4 可见，遮光会降低“早
生”品种的出芽率、增殖倍数和株高，对于原始品种影响较
小;当不做遮光处理时，“早生”品种的株高和节数均高于原
始品种，其中株高比原始品种高约 25%。因此，若生产环境
光照条件良好，可以选用“早生”品种，生长速度较快，生产周
期短，株高和节数均优于原始品种;若生产环境光照条件不
良，则应当选用原始品种，能够适应阴暗的环境，各项数值比
较稳定，受光照影响较小。
表 4 品种和光照对三叶青生长发育的影响
品种
光照
%
出芽率
%
增殖倍数
株高
cm
节数
早生 100 0． 71 1． 46 ±0． 09a 1． 25 ±0． 07b 2． 17 ±0． 08ab
50 0． 53 1． 28 ±0． 08a 1． 18 ±0． 10b 2． 21 ±0． 13b
原始 100 0． 78 1． 48 ±0． 10a 0． 99 ±0． 04a 1． 98 ±0． 07ab
50 0． 75 1． 51 ±0． 09a 0． 96 ±0． 04a 1． 93 ±0． 07a
注:同列数据后不同小写字母表示处理间差异显著(P ＜0． 05)。
2． 4 驯化移栽试验结果 从图 1可以明显看出，4周的移栽
苗比 2周的移栽苗枝叶发达，茎干粗壮，生长势旺盛。移栽 2
周时，三叶青还未完全适应驯化地的环境，不能及时地吸收
水分，叶片不饱满;等到 4周以后，移栽苗已经完全适应驯化
地的环境，生长势旺盛。
图 1 2周(a)和 4周(b)三叶青移栽苗的生长发育情况
3 小结
为了保护野生资源，维持生物多样性，建立珍贵药用植
物三叶青的人工繁殖与栽培体系是有效的方法。综合考虑
增殖试验的增殖倍数和株高因素，最后判定最佳增殖培养基
为 MS +6-BA 0． 5 mg /L + NAA 0． 1 mg /L，比较不同浓度 IBA
对于生根试验的影响，最后判定最佳生根培养基为 MS + IBA
0． 5 mg /L，选择蛭石、草炭、珍珠岩(3∶ 6∶ 1)为移栽苗的混合
基质。整个育苗过程周期较短，从带腋芽的茎段开始增殖培
养到生根移栽仅需要 10 周时间，操作简单，管理方便，为三
叶青的规模化生产提供了初步的规范化组织培养和栽培
方案。
参考文献
［1］江华．三叶青的研究进展［J］．中国保健营养，2013(6):54 －55．
［2］杨王伟，叶俊英，周莹莹，等．中药资源三叶青应用基础研究进展［J］．
现代农业科技，2012(23):79 －81．
［3］陈丽芸，郭素华．三叶青的化学成分及药理作用研究进展［J］．浙江中
医药大学学报，2012，36(12):1368 －1370．
［4］杜苏瑞，向太和，李朦．生物技术在药用植物三叶青中的应用研究进展
［J］．杭州师范大学学报(自然科学版)，2012，11(2):142 －145．
［5］吴浩，彭昕，林言娜，等．三叶青愈伤组织诱导及分化培养基筛选［J］．
现代农业科技，2011(21):121 －122，125．
［6］钟毓倩．三叶青的组织培养与快速繁殖研究［J］．浙江中医杂志，2007，
42(6):363．
［7］符渊淼．药用植物三叶青的种质鉴定和组培快繁研究［D］．杭州:浙江
大学，2011．
90243 卷 35 期 邵骏骅等 三叶青高效快繁技术体系的建立