全 文 ：收稿日期：２０１４－０９－１２
基金项目：福建省教育厅资助课题（ＪＡ１３１５４），福建中医药大学校管
课题（Ｘ２０１３０１７、Ｘ２０１３０２７），福建省大学生创新创业训练
计划项目（２０１４１０３９３０６３）
作者简介：范世明（１９６４—），男，高级实验师，主要从事中药鉴定与资
源评价研究。
福建不同产地三叶青叶中总黄酮含量比较
范世明１，陈　琳１，林　婧２，于虹敏１，黄学城１，许　文１，３，陈　丹１，黄泽豪１
（１．福建中医药大学药学院，福建 福州 ３５０１２２；２．福建中医药大学中西医结合研究院，福建 福州 ３５０１２２；
３．福建中医药大学生物医药研发中心，福建 福州 ３５０１２２）
　摘　要：　目的　比较福建省不同产地三叶青叶中总黄酮的含量。　方法　用紫外可见分光光度法，以芦丁为对照品，
在波长５００ｎｍ处测定三叶青样品中的总黄酮含量。　结果　芦丁在１６．０８～１４４．７２μｇ／ｍＬ有良好的线性关系，平均加样回
收率为９９．５７％，不同产地的三叶青中总黄酮存在差异。　结论　紫外可见分光光度法可简便、准确、快速地测定三叶青叶中
总黄酮含量，福建永泰、大田、闽侯、仙游、漳平的三叶青叶总黄酮含量较高。
　关键词：三叶青叶；总黄酮；福建
　中图分类号：Ｒ２８４．１　　　文献标志码：Ａ　　　文章编号：１００４－５６２７（２０１５）０３－００３８－０３
　 三叶青是我国特有的珍稀药用植物，又名三叶
崖爬藤（Ｔｅｔｒａｓｔｉｇｍａ　ｈｅｍｓｌｅｙａｎｕｍ　Ｄｉｅｌｓ　ｅｔ　Ｇｉｌｇ），
为葡萄科崖爬藤属植物，主要分布于我国南方的浙
江、江西、福建、广东、广西、云南、海南、台湾等省区，
其块根在民间被广泛药用。据《全国中草药汇编》中
记载：“三叶青，味苦性平。具有清热解毒，祛风化
痰，活血止痛的功效。”［１］据报道［２］三叶青中的化学
成分有黄酮、还原糖、甾类化合物、氨基酸等，其中黄
酮是重要的生理活性物质。现代药理研究表明三叶
青总黄酮部位具有抗肿瘤细胞增殖、诱导凋亡等作
用［３－５］。文献［６］表明，三叶青的叶（或全株）在民间
也供药用，如《海南植物志》中记载三叶青全株可用
于白喉、风湿性腰痛等。《中国植物志》［７］中也记载
全株供药用。《台湾药用植物图鉴》中记载其鲜叶捣
碎可以治皮肤病［８］。目前不同产地的三叶青块根总
黄酮含量测定方法已有报道［９－１０］，但未见三叶青叶
的质量评价报道，三叶青地上部分化学成分定性鉴
别的结果表明，黄酮是其主要成分之一［１１］。因福建
的顺昌、泰宁、福安等地已开始大量种植三叶青，有
必要建立测定三叶青叶中总黄酮含量的方法，为三
叶青叶的品质评价提供实验依据。
１　仪器与试药
１．１　仪器　ＵＶ９１００紫外可见分光光度计（北京瑞
利分析仪器公司）；Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ　ＣＰＡ２２５Ｄ十万分之一
电子天平（赛多利斯科学仪器北京有限公司）；ＫＱ－
５００Ｅ型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；
１．２　试药　三叶青叶２０１３年８月～１２月实地采自
福建顺昌、泰宁、福安等地，采下叶片（带叶柄），晾
干；部分购自浙江台州、丽水等地，经福建中医药大
学中药鉴定教研室卢伟教授鉴定为葡萄科崖爬藤属
植物三叶崖爬藤Ｔｅｔｒａｓｔｉｇｒｎａ　ｈｅｍｓｌｅｙａｎｕｍ　Ｄｉｅｌｓ
ｅｔ　Ｇｉｌｇ．的干燥叶。芦丁对照品（中国食品药品检定
研究院，批号：１１０７７４－２０１１１３）；甲醇（德国 Ｍｅｒｃｋ公
司，色谱纯）；水为超纯水（美国 ｍｉｌｉｐｏｒｅ公司）；其
它试剂为分析级。
２　方法与结果
２．１　对照品溶液制备　精密称取芦丁对照品，用甲
醇制成每１ｍＬ含芦丁０．４０２ｍｇ的对照品溶液，即
得。
２．２　供试品溶液制备　取三叶青叶供试品，粉碎过
４０目筛，取粉末１ｇ，精密称定，置具塞锥形瓶中，加
甲醇５０ｍＬ，精密称定，超声（２５０Ｗ，４０ｋＨｚ）处理
３０ｍｉｎ，放冷，精密称定后用甲醇补足减失的重量，
摇匀，０．４５μｍ滤膜滤过，取续滤液，即得。
２．３　总黄酮的显色方法及测定波长　参考文献［９］
测定方法，精密吸取供试品、对照品溶液各４ｍＬ分
别置２５ｍＬ量瓶中，分别加甲醇至１０ｍＬ，按下述显
色方法显色：加入１５％新鲜配制的亚硝酸钠溶液１
ｍＬ，１０％硝酸铝溶液１ｍＬ，摇匀后放置６ｍｉｎ，加入
１０％新鲜配制氢氧化钠溶液１０ｍＬ，用甲醇定容，摇
匀后放置１５ｍｉｎ，即得对照品显色溶液及供试品显
色溶液。上述２种显色溶液分别以同样处理的空白
显色体系为参比，在４１０～８００ｎｍ波长处扫描，对照
品与样品紫外吸收基本一致，最大吸收波长在５００
ｎｍ，故选择５００ｎｍ为比色测定波长。
２．４　方法学考察
２．４．１　线性范围　精密吸取对照品溶液１、２、４、６、
８、９ｍＬ到２５ｍＬ量瓶中，加甲醇至１０ｍＬ，制备得
不同梯度浓度的对照品溶液，按２．３项显色，各对照
品显色体系，以同样处理的空白显色体系为参比，在
５００ｎｍ波长处测定吸光度，以吸光度Ａ对浓度Ｃ进
行回归计算，得线性回归方程：
Ａ＝０．００５７Ｃ＋０．０４１０　　ｒ＝０．９９９４
８３
福建中医药　２０１５年６月　第４６卷　第３期
Ｆｕｊｉａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ＴＣＭ　Ｊｕｎｅ　２０１５，４６（３）
DOI:10.13260/j.cnki.jfjtcm.010915
线性范围为１６．０８～１４４．７２μｇ／ｍＬ。
２．４．２　精密度试验　精密移取对照品溶液和供试
品溶液各４ｍＬ，分别置于２５ｍＬ量瓶中，按２．３项
分别显色，在紫外分光光度计上连续测定６次，结果
对照品和供试品显色产物吸光度的ＲＳＤ为０．２１％、
０．２７％。
２．４．３　重复性试验　精密称取同批三叶青的叶样
品１ｇ，６份，按２．２项制成供试品溶液，精密吸取４
ｍＬ，按２．３项显色，测定吸光度并根据标准曲线计
算，得该批次三叶青中总黄酮平均含量２．６９％，
ＲＳＤ２．０９％。
２．４．４　稳定性试验　精密移取对照品溶液和供试
品溶液各４ｍＬ，分别置于２５ｍＬ量瓶中，按２．３项
显色处理后，在１２０ｍｉｎ内每隔１５ｍｉｎ测定吸光度。
结果表明，对照品和样品显色产物在室温下１２０ｍｉｎ
内稳定。
２．４．５　回收率试验　取重复性试验同批次三叶青
的叶样品０．５ｇ，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加入
近似样品总黄酮含有量的对照品量（芦丁１３．５
ｍｇ），按２．２项制成供试品溶液，精密吸取４ｍＬ，按
２．３项显色，测定吸光度并根据标准曲线计算，平行
测定６份，结果见表１。
表１　加样回收试验
样品的总黄酮含量／ｍｇ 加入标准品／ｍｇ 测得量／ｍｇ 回收率／％ 平均回收率／％ ＲＳＤ／％
１３．６４　 １３．５　 ２６．９２　 ９８．３９
１３．５７　 １３．５　 ２７．０８　 １００．０７
１３．６７　 １３．５　 ２７．４１　 １０１．７８
１３．６５　 １３．５　 ２６．７５　 ９７．０７
１３．５９　 １３．５　 ２６．８６　 ９８．３０
１３．５６　 １３．５　 ２７．３０　 １０１．８１
９９．５７　 １．９８
２．５　样品含量测定　精密称取不同产地三叶青的
叶样品各１ｇ，每批测定３份，按２．２项制成供试品
溶液，精密吸取４ｍＬ，按２．３项显色，以相应的空白
显色体系试剂为参比，测定吸光度。同时测定各个
批次三叶青叶含水量，按干燥品，计算得不同产地三
叶青叶中总黄酮含量，结果见表２。
表２　福建不同产地三叶青叶总黄酮的含量测定
产　地 ｎ 总黄酮含量／％ ＲＳＤ／％ 水分／％
三明泰宁 ３　 １．８５　 ２．９９　 １０．２６
南平光泽 ３　 ０．３１　 ３．０２　 １４．２１
宁德霞浦县盐田乡 ３　 ２．４１　 ２．２８　 １２．２１
古田鹤塘 ３　 １．３７　 ２．６７　 １１．９８
宁德福安 ３　 １．４５　 ２．６７　 １０．４２
福州永泰横串村 ３　 ３．０６　 ２．４６　 １２．１９
三明大田 ３　 ３．４７　 ２．３９　 ６．４９
南平顺昌 ３　 １．４２　 ２．７０　 ９．８９
闽侯白沙 ３　 ３．６９　 ２．６４　 ７．６２
莆田仙游 ３　 ３．２９　 ２．５８　 ７．８６
泉州南安 ３　 ２．７７　 ２．２５　 ８．２８
龙岩漳平 ３　 ３．８９　 ２．２９　 ８．１９
泉州永春 ３　 ２．７０　 ３．０８　 ７．３８
宁德福鼎 ３　 ２．１７　 ２．８４　 ７．６５
上尤溪（三明尤溪新阳镇宝山村） ３　 ２．９０　 ２．５１　 ６．２９
下尤溪（三明尤溪梅仙镇文际村） ３　 ２．７５　 ２．３９　 ６．３２
浙江台州 ３　 １．９６　 ２．５９　 ９．８３
浙江丽水 ３　 １．１７　 ２．７０　 １２．４８
浙江台州野生（卵圆叶） ３　 １．４７　 ２．２７　 １０．２８
浙江台州野生（长圆叶） ３　 ２．１０　 ２．４１　 ８．６７
３　讨　论
３．１　采用紫外可见分光光度法测定闽产三叶青的
叶中总黄酮含量，该方法经过方法学考察符合分析
要求，方法简便、准确，适合于三叶青叶的定量分析
和品质评价，为三叶青叶的进一步开发利用提供了
实验依据。
３．２　福建不同产地三叶青叶总黄酮含量测定比较
表明不同产地其总黄酮含量差异较大，其中以永泰、
大田、闽侯、仙游、漳平的含量较高，达到３％以上，相
对高于浙江三叶青主产地，提示闽产三叶青中这些
９３第３期　　　　　　　　　范世明等：福建不同产地三叶青叶中总黄酮含量比较
櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅
产地品质较好，适合开发利用。
参考文献：
［１］ 《全国中草药汇编》编写组 ．全国中草药汇编：上册［Ｍ］．北
京：人民卫生出版社，１９７５：３１－３２．
［２］ 陈丽芸，郭素华 ．三叶青的化学成分及药理作用研究进展［Ｊ］．
浙江中医药大学学报，２０１２，３６（１２）：１３６８－１３７０．
［３］ 丁丽，纪其雄 ．三叶青抗肿瘤活性部位的筛选研究［Ｊ］．海峡
药学，２０１１，２３（１２）：４６－４８．
［４］ 倪克锋，金波，蒋福升，等 ．三叶青黄酮对 Ｈ２２荷瘤小鼠
ＴＩＭＰ－２ｍＲＮＡ表达的影响［Ｊ］．中国中医药科技，２００９，１６
（３）：１９５－１９６．
［５］ 张立明，樊瑞军，杨凤琴 ．三叶青黄酮诱导ＳＭＭＣ－７７２１肝癌
细胞凋亡的实验研究［Ｊ］．时珍国医国药，２０１０，２１（１１）：２８５０－
２８５１．
［６］ 广东省植物研究所 ．海南植物志［Ｍ］．北京：科学出版社，
１９７４，３－２３．
［７］ 中国科学院中国植物志编辑委员会 ．中国植物志：２册［Ｍ］．
北京：科学出版社，１９９８：４８，１２２－１２３．
［８］ 张宪昌 ．台湾药用植物图鉴［Ｍ］．台中：晨星出版有限公司，
２００７：２０１．
［９］ 范世明，林婧，许文，等 ．不同产地三叶青中总黄酮含量的比
较［Ｊ］．福建中医药大学学报，２０１３，２３（３）：４４－４５．
［１０］ 郑军献，胡轶娟，梁卫青，等 ．紫外可见分光光度法测定三叶青
中总黄酮的含量［Ｊ］．中国中医药科技，２００９，１６（５）：３８６－３８７．
［１１］ 蔡韦炜，陈丹，范世明，等 ．三叶青地上部分化学成分分析［Ｊ］．
福建中医药大学学报，２０１３，２３（５）：３４－３５．
收稿日期：２０１５－０３－２０
作者简介：张方方（１９９０—），女，２０１３级中药学专业硕士研究生，主要
从事中药生物工程研究。
ＵＦＬＣ法测定蛇足石杉不同部位的石杉碱甲含量
张方方，郑雅媗，黄小强，谌赛男，吴水生
（福建中医药大学药学院，福建 福州 ３５０１２２）
　关键词：蛇足石杉；石杉碱甲；ＵＦＬＣ法
　中图分类号：Ｒ２８４．１　　　文献标志码：Ａ　　　文章编号：１０００－３３８Ｘ（２０１５）０３－００４０－０２
　 石杉碱甲是２０世纪８０年代我国学者从蛇足石
杉中分离得到的一种新型石松类生物碱，被广泛用
于治疗阿尔茨海默症、重症肌无力，同时又能促智、
提高青春期学生的学习记忆功能［１］。目前测定蛇足
石杉不同部位提取物中生物碱含量的方法主要为反
相高效液相色谱法（ＲＰ－ＨＰＬＣ）［２］，尚无超高效液相
或超快速液相检测蛇足石杉中石杉碱甲含量的报
道。超快速液相色谱（ｕｌｔｒａ　ｆａｓｔ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａ－
ｐｈｙ，ＵＦＬＣ）是一种新型液相色谱技术，被广泛应用
于快速分析生物制品和中药材中目标化合物的分
离［３］。我们用岛津超快速液相色谱仪，通过选用低
浓度的乙酸铵缓冲盐溶液作为流动相，以建立一种
快速定量分析石杉碱甲含量的方法。
１　仪器与试药
Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ　ＵＦＬＣＸＲ超快速液相色谱仪 （日
本岛津公司）；Ａｃｑｕｉｔｙ　ｕｐｌｃ　ｂｅｈ　Ｃ１８色谱柱（美国
Ｗａｔｅｒｓ公司）；Ｍｉｌｉ－Ｑ纯水系统（美国 Ｍｉｌｉｐｏｒｅ公
司）；十万分之一电子天平（美国Ｏｈａｕｓ公司）；真空
干燥箱（上海森信实验仪器有限公司）；ＫＱ５２００ＤＥ
超声仪（江苏省昆山市超声仪器有限公司）。石杉碱
甲 （长 沙 中 仁 生 物 科 技 有 限 公 司，批 号：
２０１２１２０３０１）；甲醇（德国默克公司）；水为超纯水；
其它试剂为分析纯。
蛇足石杉，２０１２年７月采自福建省连城县冠豸
山，经福建中医药大学药学院中药鉴定教研室杨成
梓副 教 授 鉴 定 为 蛇 足 石 杉 Ｈｕｐｅｒｚｉａ　ｓｅｒｒａｔａ
（Ｔｈｕｍｂ．）Ｔｒｅｙ．
２方法与结果
２．１　色谱条件　色谱柱：Ａｃｑｕｉｔｙ　ｕｐｌｃ　ｂｅｈ　Ｃ１８色谱
柱（２．１ｍｍ　ｘ　１００ｍｍ，１．７μｍ）；流动相：甲醇（Ａ）
和５ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸铵溶液（Ｂ，用冰醋酸调ｐＨ 至
６．０）；洗脱程序：０～１ｍｉｎ，２８％Ａ，１～４．５ｍｉｎ，４０％
Ａ，４．５～１０ｍｉｎ，２８％Ａ；流速：０．１５ｍＬ／ｍｉｎ；检测
波长：３０９ｎｍ；柱温：３０℃；进样量：５μＬ。
２．２　对照品溶液的制备　精密称取石杉碱甲对照
品１０ｍｇ，置１０ｍＬ瓶中加入甲醇使之溶解，并稀释
到刻度，摇匀，作为贮备液，置４℃冰箱中保存，备
用。用上述溶液逐级稀释石杉碱甲储备液，配制成
质量浓度为１、４、８、１２、１６、２０、２４ｍｇ／Ｌ的对照品溶
液。
２．３　供试品溶液的配制　取蛇足石杉新鲜植株按
根、茎、叶分离并洗净，洗净的植物样品于５０℃烘
干，用研钵充分研碎过４０目筛，置烘箱中烘至恒重。
精密称取０．１ｇ，加入２％的酒石酸５ｍＬ，浸泡过夜，
超声提取２ｈ，１７　０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，取上清液
０４
福建中医药　２０１５年６月　第４６卷　第３期
Ｆｕｊｉａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ＴＣＭ　Ｊｕｎｅ　２０１５，４６（３）
DOI:10.13260/j.cnki.jfjtcm.010916