全 文 ：三叶青有效成分的提取效果分析
刘 琴1，林 玲2(1. 杭州市拱墅区康桥街道社区卫生服务中心 杭州 310022;2. 浙江工业大学药学院 杭州
310015)
摘要:目的 优选三叶青有效成分提取效果的方法。方法 尝试采用不同的有机溶剂提取三叶青有效成分，再通过液相色谱、气相色谱、液质
联用等方法对提取物进行检测分析。结果 三叶青高温煎煮的提取率比较好;用乙酸乙酯、乙醚及甲醇的萃取效果较好，有效成分较易溶解于
极性较大的物质。结论 初步确定乙酸、乙酯、乙醚与甲醇的萃取效果较好，但对其提取物应做进一步鉴定研究。
关键词:三叶青;提取;效果
中图分类号:Ｒ284. 2 文献标识码:B 文章编号:1006-3765(2014)-03-0070-03
作者简介:刘 琴，女(1971. 9 －)。毕业于南华大学。职称:主管中
药师。联系电话:13357146128
三叶青又叫蛇附子，为蔓生藤本植物。三叶青是一种用
途非常广泛的中草药。药理研究表明具有解热、镇痛、抗炎、
抗病毒、保肝、增强免疫、抗肿瘤等作用〔1〕。
三叶青化学成分非常复杂，已经鉴定出的化学成分有黄
酮、黄酮苷、淀粉、还原糖、甾类化合物、氨基酸等。关于三叶
青的针剂提取物，目前研究发现含有淀粉、还原糖、黄酮、黄酮
苷、甾体类化合物和氨基酸等〔2〕。其中重要的生理活性物质
有黄酮类、黄酮苷类、甾类。由于三叶青的作用非常广泛，具
有很强的药用价值，因此，国内对三叶青有效成分的分析研究
一直没有停止。笔者对三叶青中有效成分提取方法进行研
究，筛选出萃取效果较好的有机溶剂分别是乙酸乙酯、乙醚与
甲醇。
1 仪器与材料
1. 1 仪器 岛津 SPD-20A 液相色谱仪;岛津 LCMS-2020 液
质联用质谱仪;Agilent6890N 气相色谱仪(氢气发生器:CYH-
500，进样器:Agilent7683B，色谱柱:HP-5，30m × 320μm ×
0. 25μm);电子天平;旋转蒸发仪。
1. 2 试剂 三叶青块根(产自于浙江丽水，计 1. 25kg，粉碎
后过 100 目筛);乙醚、石油醚、乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、丙
酮、甲醇均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 回流提取 取粉状三叶青 150g，平均分成 3 份，分别加
入 220mL蒸馏水，浸泡 3d。在 60℃下恒温回流提取 3d，提取
完后的药材呈现棕褐色，浆状。用 4 层纱布过滤，得滤液约
200mL，棕黄色，备用。
2. 1. 1 有机萃取:收集滤液，在 60℃下旋转蒸发，减压蒸干
后得到 2. 46g 浸膏，呈棕褐色，黏着状。将浸膏过硅胶柱，按
照极性从小到大，用有机溶剂冲洗。发现浸膏基本不溶于极
性小的溶剂。最后用甲醇冲洗，部分溶于甲醇，出现红色物
质，经称量仅为 0. 16g。
2. 1. 2 甲醇萃取物检测:对用甲醇萃取的收集的红色物质进
行高效液相色谱检测，峰号 5、7、8 的物质含量分别是
10. 9396、20. 0557、23. 0946，占比达到 54. 09%。
2. 2 煎煮提取 取 500g三叶青，加入 800g蒸馏水，浸泡 3d。
将药液分成 2 份，在 100℃下，搅拌煎煮 3d，煎煮后的药液呈
糊状。将糊状提取物倒入 2000mL 大烧杯中，加入 500mL 蒸
馏水静置 1 天 1 夜。之后用四层纱布过滤。两批滤液合并，
在 60℃下旋转蒸发浓缩，得到 1L 浓缩液，呈棕黄色，将浓缩
液继续过滤 1 次，析出部分大分子物质，如糖类、淀粉等。
2. 2. 1 有机溶剂梯度萃取:用于萃取滤液的有机溶剂根据极
性大小为:乙醚 ＜石油醚 ＜二氯甲烷 ＜乙酸乙酯 ＜氯仿 ＜丙
酮 ＜甲醇。按极性从小到大逐次进行萃取。用不同配比配置
展开剂，展开剂为氯仿-甲醇。比例为 10∶1，9∶1，7∶1，5∶ 1，3∶ 1，
1∶1。在不同比例下，取滤液点板，放在紫外检测器下检测。
最后得到在 3∶1 的展开剂比例下，乙酸乙酯、乙醚、丙酮、甲醇
的分离效果比较好。然后将萃取物分别进行液相色谱与气相
色谱分析。
2. 2. 2 有机溶剂萃取物液相和气相色谱检测(见表 1、2)。
表 1 液相色谱检测结果
萃取剂
Peak No．
(部分) 峰高 峰面积 含量
(≥10)
乙酸乙酯 6 956722． 250 9356449． 000 13． 5242
10 952965． 188 8226361． 500 11． 8907
11 191284． 016 334171086． 000 48． 3025
乙 醚 2 390617． 344 2478397． 500 11． 2549
4 375371． 438 2574701． 000 11． 6922
6 386303． 500 2410347． 250 10． 9458
7 63905． 563 4632779． 500 21． 0383
8 28346． 281 2396320． 000 10． 8821
9 171095． 422 4039857． 250 18． 3458
丙 酮 2 77165． 180 2057544． 750 13． 0241
5 61698． 992 3022458． 750 19． 1320
8 59819． 027 6579061． 500 41． 6450
甲 醇 3 491214． 375 3296137． 750 28． 5137
7 211909． 547 2960323． 500 25． 6087
9 80717． 008 2245875． 750 19． 4283
·07·
海峡药学 2014 年 第 26 卷 第 3 期
表 2 气相色谱检测结果
萃取剂 峰
#
(取前五个)
保留时间
(min) 类型 峰宽(min)
峰面积
(PA* S) 峰高(PA) 峰面积 /%
甲 醇 1 1． 017 BB S 0． 0622 7． 27203e5 1． 83125e5 99． 34304
2 8． 440 MM Ｒ 0． 0857 162． 31841 31． 5680 0． 02217
3 10． 497 BV 0． 0513 1298． 13599 366． 56448 0． 17734
4 11． 736 VV 0． 0940 2886． 96973 480． 87625 0． 39439
5 11． 895 VB 0． 1115 461． 60745 55． 21887 0． 06306
丙酮 1 1． 018 BV S 0． 0243 4． 76991e5 3． 21973e5 45． 61510
2 1． 058 VB S 0． 0366 5． 53060e5 2． 51646e5 52． 88958
3 1． 285 BV X 0． 0318 562． 63666 245． 35565 0． 05381
4 1． 388 VV X 0． 0402 6747． 99756 2373． 20337 0． 64532
5 1． 447 VV X 0． 0395 3234． 12598 1062． 55811 0． 30928
乙酸乙酯 1 0． 576 BV S 0． 0275 1． 00115e6 5． 99611e5 72． 75267
2 0． 631 VV S 0． 0310 3． 72373e6 2． 00263e5 27． 06012
3 0． 744 VB S 0． 0292 2270． 93604 1297． 31958 0． 16503
4 0． 830 BB S 0． 0168 204． 66174 187． 09065 0． 01487
5 1． 291 VB 0． 0265 100． 62231 60． 08005 0． 00731
乙醚 1 1． 025 PB S 0． 0340 1． 64764e6 8． 08577e5 97． 07676
2 5． 534 MM Ｒ 0． 0540 57． 73563 17． 80547 0． 00340
3 6． 631 MM Ｒ 0． 0584 157． 07489 44． 84740 0． 00925
4 6． 718 MMＲ 0． 0485 71． 84942 24． 68027 0． 00423
5 6． 940 BV 0． 0375 2477． 50293 1134． 61658 0． 14597
2. 2. 3 甲醇萃取物液质联用检测:因甲醇萃取后的分离效果
较好，故用液质联用(LC /MS)检测，其中有 4 个最大的峰(见
图 1 ～ 5)。
图 1 甲醇液质联用分析
图 2 甲醇 LC /MS峰 1 图 3 甲醇 LC /MS峰 2
图 4 甲醇 LC /MS峰 3 图 5 甲醇 LC /MS峰 4
甲醇萃取物经过质谱检测后，又用核磁做定量分析，计算
出 4 个主要峰的相对分子质量为:644. 70、579. 50、691. 70、
648. 65。
3 讨论分析
3. 1 回流提取 回流提取效果并不很好，用有机溶剂萃取时
基本得不到浸膏。可能的原因:①三叶青中的有效成分未被
有效煎煮出来;②三叶青有效成分主要是黄酮类、甾体类与氨
基酸等，是亲脂性物质，难溶于极性小的溶剂;③依旧有部分
溶解于水的有效成分，只是量很少，不易用水提取出来;④可
能与其他成分形成了助溶现象，于是无法提取完全。
3. 2 液相检测 乙酸乙酯分析中，11 号峰的含量最高，占
48. 3025%;乙醚分析中，除 7、9 号峰略高，其余各成分含量较
多;丙酮中 8 号峰含量最高，占 41. 6450%，其余含量与乙醚相
似，含量也较多;甲醇分析中除了 3、7、9 号含量为 28. 5137%、
25. 6087%和 19. 4283%，其余成分含量较低，萃取效果好。
3. 3 气相检测 乙醚的气相分析结果显示，有一个含量
97. 07676%，可能由于乙醚提取物中其他物质不易汽化，也可
能由于得到了比较纯的有效成分。乙酸乙酯的分析结果没有
乙醚好，但是也有两个组分含量较高，只是杂质含量也较多，
萃取效果没有乙醚好。
乙醚、甲醇中均只有一种物质含量特别高，分别为
97. 07676%、99. 34304%;可以对乙醚及甲醇的提取物做进一
步的测定和研究。丙酮中有两种物质的成分含量比较高，分
别是 1 号 45. 61510%，2 号 52. 88958%，其他成分含量很低。
3. 4 实验结果 尝试了用不同萃取剂对三叶青进行提取，并
检测其成分含量。在萃取溶剂的选择方面，乙酸乙酯、乙醚与
甲醇的萃取效果较好。但是由于成分比较复杂，实验室条件
·17·
Strait Pharmaceutical Journal Vol 26 No. 3 2014
限制等原因，未对有效成分做进一步分离。本研究发现，水提
法在沸水煎煮的状态下提取效果比较好，用有机溶剂提取的
效果也不错，回流提取并不可取;本实验仅用了液相色谱分析
与气象色谱分析，简单使用过质谱仪，对于三叶青中未知成分
结构的鉴定还需要更多更有效的检测方法和仪器。
参考文献
〔1〕杨学楼，罗经，孙松柏，等 . 三叶青抗病毒作用的研究〔J〕. 湖北中
医杂志，1989，(4) :40.
〔2〕朱华，张可锋，高雅，等 . 三叶青藤生药学研究〔J〕. 海峡药学，
2008，20(1):55-58.
丹栀逍遥颗粒的含量测定方法研究
王模强，张 会(四川绵竹鸿基制药有限责任公司研发部 绵竹 618200)
摘要:目的 用高效液相色谱法测定丹栀逍遥颗粒中芍药苷的含量。方法 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-0. 1%磷酸溶液(15∶
85)为流动相;流速为 1. 0mL·min －1，检测波长为 230nm。结果 芍药苷在 0. 10μg ～ 0. 98μg 范围内，浓度与峰面积呈良好的线性关系，Y =
1. 00 × 10 －6X + 1. 36 × 10 －2，Ｒ2 = 0. 9992(n = 6)。平均回收率为 98. 07%，其 ＲSD为 1. 02%，符合含量测定要求。结论 该方法简便、快速、准
确，可用于丹栀逍遥颗粒中芍药苷的含量测定。
关键词:丹栀逍遥颗粒;高效液相色谱法;含量测定;芍药苷
中图分类号:Ｒ927. 2 文献标识码:A 文章编号:1006-3765(2014)-03-1172-0072-03
作者简介:王模强，男(1978. 11 －)。毕业于沈阳药科大学。职称:制
药工程师。研究方向:药物制剂和质量标准研究。联系电话:
18683759565
丹桅逍遥片是在《太平惠民和剂局方》所载“逍遥散”基
础上加减而成的著名舒肝理脾常用方剂。由柴胡、当归、白
芍、白术、茯苓、甘草、牡丹皮、桅子八味中药组成。本品是丹
栀逍遥片的改剂产品，功能主治为舒肝解郁，清热调经。用于
肝郁化火，胸胁胀痛，烦闷急躁，食欲不振或有潮热，以及妇女
月经先期，经行不畅，乳房与少腹胀痛。原剂型丹栀逍遥片其
质量标准中未对含量进行质量控制。根据对处方研究，本品
中主要成份含芍药苷，为控制产品质量，用高效液相法测定芍
药苷的含量，为芍药苷的含量测定提供定量的检测方法。
1 材料
1. 1 仪器 高效液相色谱系统(ALLTECH HPLC PUMP 426;
ALLTECH UV 200，N2000 色谱工作站)，色谱柱(十八烷基硅
烷键合硅胶为填充剂，250 × 4. 6mm，5μm);电子天平(Sartori-
us BP211D)。
1. 2 试药 乙腈为色谱纯(MEＲCK 公司);磷酸为分析纯
(成都金山化学试剂公司);乙醇为分析纯成都金山化学试剂
公司;水为纯化水(本公司车间自制)。芍药苷对照品(批号:
110736-200933)。
1. 3 样品 样品(自制):规格为 5g /袋;批号:111001、
111002 和 111003。
2 方法
2. 1 含量测定 按中国药典 2010 年版一部附录ⅤD高效液
相色谱法中进行测定。
2. 2 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅
胶为填充剂;以乙腈-0. 1%磷酸溶液(15∶ 85)为流动相;检测
波长为 230nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于 2000。
2. 3 测定方法 取本品，取内容物，研细，精密称取约 0. 2g，
置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇 25mL，密塞，称定重量，超
声处理 30min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，
摇匀，静置，滤过，滤液用微孔滤膜(0. 45μm)滤过，取续滤液，
即得。精密称取芍药苷对照品约 5mg，置 10mL 棕色量瓶中，
加稀乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取 1mL，置 10mL
棕色量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，即得(每 1mL 约含芍药
苷 50μg)。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10μL，
注入液相色谱仪，测定，即得。
3 方法学研究
3. 1 检测限试验 精密称取芍药苷对照品适量，加稀乙醇溶
解并稀释至每 1mL含 0. 492mg溶液作为贮备液，精密量取适
量逐步稀释测定，直到芍药苷主峰信号约为检测器噪声水平
的三倍为止。测得芍药苷最低检测限为 9. 8ng。
3. 2 线性试验 精密称取芍药苷对照品适量，加稀乙醇溶解
并稀释成每 1mL约含 0. 0492mg 的溶液，精密吸取对照品溶
液 2μL、7μL，10μL、14μL、20μL，注入液相色谱仪，记录色谱
图，以对照品峰面积和对照品进样量进行线性回归(见表 1 及
图 1)。
表 1 芍药苷线性试验结果表
芍药苷进样量(μg) 芍药苷峰面积
0. 0984 69350
0. 3444 242001
0. 4920 361890
0. 6888 496067
0. 9840 733186
回归方程:Y =1. 00 × 10 －6X + 1. 36 × 10 －2 Ｒ2 = 0. 9992
·27·
海峡药学 2014 年 第 26 卷 第 3 期