全 文 ：书牛大力中刺桐碱的分离鉴定和含量测定
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张宏武1，丁刚1，李榕涛2，魏建和1，邹忠梅1＊＊
(1．中国医学科学院北京协和医院药用植物研究所，北京 100193;
2．中国医学科学院北京协和医院药用植物研究所海南分所，万宁 571533)
摘要 目的:首次从牛大力药材中分离制备刺桐碱对照品并应用高效液相色谱方法建立牛大力药材中刺桐碱含量的测定方
法。方法:Agilent (SB － C18) (5 μm，4. 6 mm × 150 mm)色谱柱，乙腈 －水(1∶ 9)为流动相，流速为 0. 8 mL·min
－1，检测波长为
280 nm，柱温 30 ℃。结果:刺桐碱在 0. 0113 ～ 2. 825 mg·mL －1范围内呈良好的线性关系(r = 0. 9996，n = 5) ，平均回收率(n =
9)为 99. 6%。结论:本方法准确，简便，重复性好，可用于牛大力药材中刺桐碱的含量测定。
关键词:中药材;牛大力;豆科;崖豆藤属;刺桐碱;分离;鉴定;含量;高效液相色谱法
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:0254 － 1793(2011)06 － 1024 － 03
Isolation，identification and quantitative analysis of hypaphorine
in the root of Millettia speciosa Champ． *
ZHANG Hong － wu1，DING Gang1，LI Rong － tao2，WEI Jian － he1，ZOU Zhong － mei1＊＊
(1． Institute of Medicinal Plant Development，Chinese Academy of Medical Science ＆ Peking Union Medical College，Beijing 100193，China;
2． Hainan Branch Institute of Medicinal Plant，Chinese Academy of Medical Science ＆ Peking Union Medical College，Wanning 571533，China)
Abstract Objective:To firstly report the isolation of hypaphorine from the roots of Millettia speciosa Champ． and
establish an HPLC method for determination of hypaphorine in the root of Millettia speciosa Champ． Method:A SB
－ C18(5 μm，4. 6 mm ×150 mm)column was adopted with a mobile phase of acetonitrile － water (1∶ 9)at the flow
rate of 0. 8 mL·min －1 and the column temperature was set at 30 ℃ ． The detection wavelength was 280 nm． Re-
sults:The linear range of hypaphorine was 0. 0113 － 2. 825 mg·mL －1(r = 0. 9996，n = 5)and the average recover-
y (n = 9)was 99. 6% ． Conclusion:The method is accurate，simple，reproducible，and can be used to determine the
content of hypaphorine in Millettia speciosa Champ．
Key words:traditional Chinese medicine;Millettia speciosa;Leguminosae;Millettia;hypaphorine;isolation;identifi-
cation;content;HPLC
牛大力为豆科崖豆藤属植物美丽崖豆藤 Mille-
ttia speciosa Champ．的根［1］，又名猪脚笠、山莲藕、大
力薯等，具补虚润肺、强筋活络之功效，可用于治疗
腰肌劳损、风湿性关节炎、肺虚咳嗽等病症。现代药
理研究表明:牛大力具有祛痰、镇咳、平喘［2］，保护
肝损伤［3］及免疫调节作用［4］。牛大力为岭南地区
药食两用植物，常用于煲汤，具有补骨强筋保健作
用，化学成分研究表明含有三萜皂苷、黄酮类化学成
分［5，6］。为了建立评价其质量的含量测定方法，我
们选择提取物中主要特征性成分，进行了分离制备
和结构测定，得吲哚类生物碱刺桐碱对照品，并对海
南产牛大力药材中刺桐碱含量进行了测定。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪(美国 Waters 公司) :600 泵;
PDA紫外检测器;半制备液相色谱仪(日本岛津公
司) :LC －6AD泵;SPD － 20A 检测器;试剂:色谱甲
醇(天津西华试剂) ，重蒸水，其余试剂均为分析纯。
样品:10 批海南产牛大力样品分别采自海南儋
州、琼中县及五指山市，由中国医学科学院北京协和
医学院药用植物研究所海南分所李榕涛助理研究员
鉴定为崖豆藤属植物美丽崖豆藤 Millettia speciosa
Champ．的根。
—4201— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2011，31(6)
＊
＊＊
十一五国家科技支撑计划(2007BAI27B06)
通讯作者 Tel:(010)57833290;E － mail:zmzou@ implad． ac． cn
DOI:10.16155/j.0254-1793.2011.06.017
2 对照品制备
2. 1 提取与分离 牛大力药材细粉 1 kg，95%乙醇
提取 2 次，每次 2 h。得浸膏 100 g，加适量水混悬
后，分别用乙酸乙酯和正丁醇萃取。正丁醇部分
(约 25 g)溶于水中经 D － 101 大孔树脂分离(10%
乙醇、30%乙醇、60%乙醇、95%乙醇梯度洗脱) ，将
30%乙醇部分再经反相硅胶色谱分离，甲醇和水梯
度洗脱。甲醇 －水(1∶ 9)流分，经 Sephadex LH － 20
凝胶柱分离，甲醇洗脱，再经制备高效液相纯化，得
化合物 1(9 mg)。
2. 2 结构鉴定 刺桐碱:无色结晶，mp 246 ℃，溶
于水，碘化铋钾反应阳性，UV(MeOH)λmax(log ε)
289，281，274 nm;IR(KBr)νmax 1640，1360;EI － MS
m/z(%)187 (M + － 59) ，143 (187 － COO －) ，130，
115(吲哚环) ，59［N + (CH3)3］，58(100%) ;
1H
NMR(D2O)δ 3. 30［9H，s，N
+ (CH3)3］，3. 37(1H，
dd，J = 13. 2，12. 0 Hz，H － 10a) ，3. 44(1H，br． d J =
12. 6 Hz，H －10b) ，3. 95(1H，br． d，J = 11. 4 Hz，H －
11) ，7. 25(1H，t，J = 7. 2 Hz，H －7) ，7. 32(1H，t，J =
7. 2 Hz，H － 6) ，7. 56(1H，d，J = 7. 8 Hz，H － 8) ，
7. 70(1H，d，J = 7. 8 Hz，H － 5) ;13 C NMR(D2O)δ
22. 8(C － 10) ，52. 0［N + (CH3)3］，78. 9(C － 11) ，
107. 1(C － 3) ，112. 0(C － 8) ，118. 1(C － 5) ，119. 4
(C －7) ，122. 0(C － 6) ，124. 7(C － 2) ，126. 4(C －
4) ，136. 1(C － 9) ，171. 5(－ COO －)。以上数据与
文献报道从 Ptercarous officinalis［7］种子分离得到的
N，N，N －三甲基色氨酸(hypaphorine)一致，中文名
为刺桐碱［8］。为首次在牛大力中分离得到，经
HPLC归一化法测定其纯度大于 95%。
3 色谱条件
Agilent (SB － C18)色谱柱 (5 μm，4. 6 mm ×150
mm) ;乙腈 －水(1 ∶ 9)为流动相;流速为 0. 8 mL·
min －1;检测波长为 280 nm;柱温 30 ℃。色谱分离
见图 1。
4 实验方法及方法学考察
4. 1 供试品溶液的制备 称取牛大力样品细粉
(过 60 目筛)2. 0 g，用 70%乙醇 50 mL 超声提取 2
次(功率:200 W;频率 40 kHz) ，每次 20 min。合并
滤液，蒸干，甲醇 － 水(1 ∶ 1)定容于 5 mL 量瓶中，
0. 45 μm微孔滤膜过滤，即得。
4. 2 对照品溶液的制备 精密称取刺桐碱对照品约
1. 0 mg，甲醇 －水(1∶ 1)定容于 1 mL量瓶中，即得。
4. 3 线性及定量限的测定 精密称取刺桐碱对照
品配制成 2. 825，2. 26，1. 13，0. 565，0. 0113 mg·
mL －1系列对照品溶液，以浓度为横坐标，峰面积积
分值为纵坐标，进行线性回归，得回归方程:
Y = 1. 000 × 107X － 5. 110 × 105 r = 0. 9996
结果表明:刺桐碱在 0. 0113 ～ 2. 825 mg·mL －1范围
内呈良好的线性关系。最低定量限为 2. 26 ng·
mL －1(S /N≥10)。
4. 4 重复性试验 精密称取同一批牛大力药材粉
末 5 份，按“4. 1”项下方法制备供试品溶液，按照
“3”项下色谱条件测定，平均含量为 0. 16%，RSD为
0. 21%。
4. 5 精密度试验 取同一对照品溶液，连续进样 5
次，测得峰面积，其日间精密度 RSD为 0. 72%，日间
精密度为 1. 2%。
4. 6 稳定性试验 取同 1 份供试品溶液，在 0，4，
8，24，48 h分别按照“3”项下色谱条件进样测定，记
录峰面积，结果表明供试品溶液在 48 h 内基本稳
定，其峰面积 RSD为 1. 0%。
4. 7 回收率试验 精取同一已知含量的牛大力药
材粉末 9 份(1. 0 g) ，分别置三角瓶中，每 3 份为 1
组，按样品中刺桐碱含有量的 120%，100%，80%
(即 1. 2 g，1. 0 g，0. 8 g) ，分别加入适量刺桐碱对照
品溶液(0. 786 mg·mL －1) ，然后按“4. 1”项下方法
制备供试溶液，进样测定，结果平均加样回收率(n
= 9)为 99. 6%，见表 1。
表 1 刺桐碱加样回收率 (n =3)
Tab 1 Recovery of Hypaphorine
样品量
(sample)
/mg
加入量
(addition)
/mg
测定量
(determin
ation)/mg
回收率
(recovery)
/%
平均回收率
(average
recovery)/%
RSD
/%
0. 44 0. 40 0. 825 98. 21 99. 5 1. 7
0. 44 0. 40 0. 832 99. 04
0. 44 0. 40 0. 852 101. 4
0. 55 0. 55 1. 091 99. 18 98. 7 1. 1
0. 55 0. 55 1. 072 97. 46
0. 55 0. 55 1. 093 99. 36
0. 66 0. 63 1. 280 99. 23 100. 6 1. 2
0. 66 0. 63 1. 304 101. 1
0. 66 0. 63 1. 309 101. 5
4. 8 样品测定 取 10 批牛大力药材粉末，按
“4. 1”项下方法制备供试品溶液，按照“3”项下条件
测定，结果见表 2。
—5201—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2011，31(6)
表 2 牛大力药材中刺桐碱含量测定结果
Tab 2 The content of hypaphorine in the root of
Millettia speciosa Champ
样品编号
(sample
No．)
产地
(habit)
含量
(content)
/%(n =3)
1 琼中县乘坡农场(Chengpo ranch，Qiongzhong
county)
0. 055
2 琼中县牙钗农场(Yachai ranch，Qiongzhong county) 0. 041
3 五指山市毛阳镇(Maoyang town，Wuzhishan city) 0. 159
4 儋州南丰(Nanfeng region，Danzhou city) 0. 027
5 儋州兰洋(Lanyang region，Danzhou city) 0. 089
6 儋州兰洋(Lanyang region，Danzhou city) 0. 125
7 儋州雅拉农场(Yala ranch，Danzhou city) 0. 062
8 儋州南丰(Nanfeng region，Danzhou city) 0. 027
9 儋州兰洋(Lanyang region，Danzhou city) 0. 141
10 儋州南丰(Nanfeng region，Danzhou city) 0. 0028
5 讨论
5. 1 对照品的选择 牛大力临床上多为水煎液，刺
桐碱水溶性极好。在牛大力药材的指纹图谱中发
现，刺桐碱是牛大力药材中的主要成分。同时现代
药理研究表明牛大力具有祛痰、镇咳、平喘的作用，
而刺桐碱则具有镇静作用，与牛大力的功效具有一
定相关性。因此对该成分进行了分离制备，建立其
含量测定方法，以期为牛大力药材的质量评价提供
方法。但刺桐碱是否为牛大力药材祛痰、镇咳、平喘
作用的活性物质基础还有待进一步研究。
5. 2 提取方法的选择 本实验曾分别用二氯甲烷、
70%乙醇和甲醇作为提取溶剂，超声提取牛大力中
刺桐碱，提取 2 次，合并滤液，甲醇 －水(1 ∶ 1)定容
于 5 mL量瓶中，HPLC测定结果发现 70%乙醇提取
物中刺桐碱含量最高。并对 70%乙醇超声提取和
回流提取方式及提取次数进行了考察，最后确定提
取方法为 70%乙醇超声提取 2 次，每次 20 min。
5. 3 耐用性的考察 本实验换用 Shiseido (Pak －
C18)色谱柱 (5 μm，4. 6 mm × 250 mm) ，用适当乙
腈和水等度洗脱，刺桐碱也达到基线分离，结果表明
该方法耐用性较好。
5. 4 样品测定结果 从海南不同产地 10 批牛大力
中刺桐碱含量测定结果来看，10 批牛大力药材中刺
桐碱的含量差异比较大，儋州兰洋地区所产牛大力
中刺桐碱含量均较高，因此有必要对牛大力药材的
种植进行集中管理。
图 1 刺桐碱对照品(A)和牛大力样品(B)HPLC色谱图
Fig 1 HPLC chromatograms of hypaphorine reference substance(A)and
the roots of Millettia speciosa(B)
参考文献
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(本文于 2010 年 7 月 5 日收到)
—6201— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2011，31(6)