全 文 ：ＤＯＩ：１０．１３３５０／ｊ．ｃｊｐｂ．１４０５０６ ·论著·
亚抑菌浓度茅苍术挥发油对金黄色葡萄球菌
毒力因子表达的抑制作用初步研究＊
钱静漪１，王梦茹１，张宁宁１，石祚琴１，秦冕１，王巧丽２，郦雪艳２，邵世和１＊＊
（１．江苏大学基础医学与医学技术学院，江苏镇江２１２０１３；２．江苏大学临床医学院，江苏镇江２１２０１３）
【摘要】　目的　探索亚抑菌浓度茅苍术挥发油对金黄色葡萄球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ）毒力因子如α溶血素等表达
的抑制作用及其机制。　方法　采用微量肉汤稀释法测定茅苍术挥发油对４株金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度（ｍｉｎｉ－
ｍｕｍ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ＭＩＣ）；吸光度测量等方法体外检测亚抑菌浓度茅苍术挥发油作用下金黄色葡萄球菌毒力
因子产量的变化；采用Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ　ＰＣＲ法检测亚抑菌浓度挥发油对ＡｇｒＡ和 Ｈｌａ　ｍＲＮＡ表达的影响。　结果　茅苍术
挥发油可抑制金黄色葡萄球菌生长并呈现浓度依赖性，标准菌株 ＡＴＣＣ２５９２３的 ＭＩＣ为０．０６２５％（ｖ／ｖ），临床菌株的
ＭＩＣ为０．０３１２５％（ｖ／ｖ）。亚抑菌浓度茅苍术挥发油作用后４株菌株凝固酶的分泌受到抑制，标准菌株 ＡＴＣＣ２５９２３的
凝固酶效价只有对照组的１／４，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５），临床菌株的凝固酶效价都只有对照组的１／８，差异有统计
学意义（Ｐ ＜０．０５）。亚抑菌浓度茅苍术挥发油减弱了四株菌株的粘附能力，ＡＴＣＣ２５９２３、ＳＡ１．５、ＳＡ２．３和ＳＡ４．１２的
粘附能力分别只有对照组的（５３．７１±６．５６）％（Ｐ＜０．０１）、（５３．１０±９．３９）％（Ｐ＜０．０１）、（７４．７０±９．００）％（Ｐ ＜０．０１）和
（４５．６２±２１．２２）％（Ｐ＜０．０１）。标准菌株ＡＴＣＣ２５９２３和ＳＡ２．３的溶血活力受到亚抑菌浓度挥发油的显著抑制，溶血活
力分别只有对照组的（１８．４８±２３．８８）％（Ｐ＜０．０１）和（１．６３±４．１８）％（Ｐ＜０．０１）。α－溶血素毒力基因 Ｈｌａ及其调控基因
ＡｇｒＡ的表达受到了亚抑菌浓度挥发油的抑制，其表达水平分别只有对照组的（６．１７±２．２３）％（Ｐ＜０．０１）和（２４．７９±
９．１９）％（Ｐ＜０．０１）。　结论　茅苍术挥发油能抑制金黄色葡萄球菌的生长，并且对多种毒力因子的表达有抑制作用。
【关键词】　茅苍术挥发油；金黄色葡萄球菌；毒力因子；ａｇｒ二元调控系统
【中图分类号】　Ｒ３７８．１１　　　【文献标识码】　Ａ　　　【文章编号】　１６７３－５２３４（２０１４）０５－０４０８－０４
［Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐａｔｈｏｇｅｎ　Ｂｉｏｌｏｇｙ．２０１４Ｍａｙ；９（５）：４０８－４１１，４３３．］
Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ　ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｖｏｌａｔｉｌｅ　ｏｉｌｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｄｒｉｅｄ　ｒｈｉｚｏｍｅ　ｏｆ　Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ　ｌａｎｃｅａ
ｏｒ　Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　ｏｎ　ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｏｆ　Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ
ＱＩＡＮ　Ｊｉｎｇ－ｙｉ　１，ＷＡＮＧ　Ｍｅｎｇ－ｒｕ１，ＺＨＡＮＧ　Ｎｉｎｇ－ｎｉｎｇ１，ＳＨＩ　Ｚｕｏ－ｑｉｎ１，ＱＩＮ　Ｍｉａｎ１，ＷＡＮＧ　Ｑｉａｏ－
ｌｉ　２，ＬＩ　Ｘｕｅ－ｙａｎ２，ＳＨＡＯ　Ｓｈｉ－ｈｅ１＊＊　（１．Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｊｉａｎｇｓｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉ－
ｔｙ，Ｚｈｅｎｊｉａｎｇ，Ｊｉａｎｇｓｕ，２１２０１３，Ｃｈｉｎａ；２．Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｊｉａｎｇｓｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｊｉａｎｇ，Ｊｉａｎｇｓｕ，
２１２０１３）
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｈｅ　ｐｕｒｐｏｓｅ　ｏｆ　ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ　ｗａｓ　ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｏｆ　Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ
ｂｙ　ｖｏｌａｔｉｌｅ　ｏｉｌｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｄｒｉｅｄ　ｒｈｉｚｏｍｅ　ｏｆ　Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ　ｌａｎｃｅａ　ｏｒ　Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｂｙ　ｗｈｉｃｈ　ｖｏｌａｔｉｌｅ　ｏｉｌｓ
ｉｎｈｉｂｉｔ　ｔｈｅɑ－ｔｏｘｉｎ　ｏｆ　Ｓ．ａｕｒｅｕｓ．　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｂｒｏｔｈ　ｄｉｌｕｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｍｅａｓｕｒｅ　ｔｈｅ　ｍｉｎｉｍｕｍ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ＭＩＣ）ｏｆ
ｖｏｌａｔｉｌｅ　ｏｉｌｓ　ｆｒｏｍＡ．ｌａｎｃｅａｏｒ　Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　ｏｎ　Ｓ．ａｕｒｅｕｓ．Ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ　ｗａｓ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｃｔ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ
ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｗｈｅｎ　Ｓ．ａｕｒｅｕｓ　ｗａｓ　ｅｘｐｏｓｅｄ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｖｏｌａｔｉｌｅ　ｏｉｌｓ　ｆｒｏｍＡ．ｌａｎｃｅａｏｒ　Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ．Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ　ＰＣＲ　ｗａｓ
ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｃｔ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｖｏｌａｔｉｌｅ　ｏｉｌｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ＡｇｒＡ　ａｎｄ　Ｈｌａ　ｍＲＮＡ．　Ｒｅｓｕｌｔ　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｖｏｌａｔｉｌｅ　ｏｉｌｓ　ｆｒｏｍ
Ａ．ｌａｎｃｅａ　ｏｒ　Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ　ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　Ｓ．ａｕｒｅｕｓ　ｉｎ　ａ　ｄｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｍａｎｎｅｒ．Ｖｏｌａｔｉｌｅ　ｏｉｌｓ　ｆｒｏｍＡ．ｌａｎｃｅａ　ｏｒ　Ａ．
ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　ｈａｄ　ａ　ＭＩＣ　ｏｆ　０．０６２　５％ （ｖ／ｖ）ｗｉｔｈ　ｒｅｓｐｅｃｔ　ｔｏ　ａ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｓｔｒａｉｎ　ｏｆ　Ｓ．ａｕｒｅｕｓ（ＡＴＣＣ２５９２３），ａｎｄ　ｔｈｏｓｅ　ｖｏｌａｔｉｌｅ　ｏｉｌｓ　ｈａｄ
ａ　ＭＩＣ　ｏｆ　０．０３１２５％（ｖ／ｖ）ｗｉｔｈ　ｒｅｓｐｅｃｔ　ｔｏ　ｔｈｒｅｅ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｉｓｏｌａｔｅｓ　ｏｆ　Ｓ．ａｕｒｅｕｓ．Ｔｈｅ　ｓｕｂ－ＭＩＣ　ｏｆ　ｖｏｌａｔｉｌｅ　ｏｉｌｓ　ｆｒｏｍＡ．ｌａｎｃｅａｏｒ　Ａ．
ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　ｒｅｄｕｃｅｄ　ｔｈｅ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｏａｇｕｌａｓｅ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｆｏｕｒ　Ｓ．ａｕｒｅｕｓ　ｓｔｒａｉｎｓ．Ｔｈｅ　ｃｏａｇｕｌａｓｅ　ｔｉｔｅｒ　ｏｆ　ＡＴＣＣ２５９２３ｗａｓ　ｏｎｌｙ　１／４ｔｈｅ
ｔｉｔｅｒ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ（Ｐ＜０．０５）ｗｈｉｌｅ　ｔｈｅ　ｃｏａｇｕｌａｓｅ　ｔｉｔｅｒｓ　ｏｆ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｉｓｏｌａｔｅｓ　ｗｅｒｅ　ｏｎｌｙ　１／８ｔｈｅ　ｔｉｔｅｒ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ（Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅ
ｓｕｂ－ＭＩＣ　ｏｆ　ｖｏｌａｔｉｌｅ　ｏｉｌｓ　ｆｒｏｍＡ．ｌａｎｃｅａｏｒ　Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　ａｌｓｏ　ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ　ｔｈｅ　ａｄｈｅｓｉｖｅ　ａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ＡＴＣＣ２５９２３ｔｏ　５３．７１±６．５６％ｃｏｍ－
ｐａｒｅｄ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０１），ｉｔ　ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ　ｔｈｅ　ａｄｈｅｓｉｖｅ　ａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ＳＡ１．５ｔｏ　５３．１０±９．３９％ （Ｐ＜０．０１），ｉｔ　ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ　ｔｈｅ
ａｄｈｅｓｉｖｅ　ａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ＳＡ２．３ｔｏ　７４．７０±９．００％ （Ｐ＜０．０１），ａｎｄ　ｉｔ　ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ　ｔｈｅ　ａｄｈｅｓｉｖｅ　ａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ＳＡ４．１２，ｔｏ　４５．６２±２１．２２％ （ｐ
＜０．０１）．Ｔｈｅ　ｓｕｂ－ＭＩＣ　ｏｆ　ｖｏｌａｔｉｌｅ　ｏｉｌｓ　ｆｒｏｍＡ．ｌａｎｃｅａｏｒ　Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　ｍａｒｋｅｄｌｙ　ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ　ｔｈｅ　ｈｅｍｏｌｙｔｉｃ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｔａｎｄａｒｄ
·８０４·
中 国 病 原 生 物 学 杂 志
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐａｔｈｏｇｅｎ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　
２０１４年５月　第９卷第５期
Ｍａｙ　２０１４，Ｖｏｌ．９，Ｎｏ．５
＊
＊＊
【基金项目】　２０１２年江苏省高等学校大学生实践创新训练计划（Ｎｏ．２０１２ＪＳＳＰＩＴＰ１２６０）。
【通讯作者】　邵世和，Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｈａｏｓｈｉｈｅ２００６＠１６３．ｃｏｍ
【作者简介】　钱静漪（１９８８－），女，在读硕士研究生，主要从事病原菌致病机制的研究。
ｓｔｒａｉｎ（ＡＴＣＣ２５９２３）ｔｏ　１８．４８±２３．８８％ （Ｐ＜０．０１）ａｎｄ　ｔｈｅ　ｈｅｍｏｌｙｔｉｃ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ＳＡ　２．３ｔｏ１．６３±４．１８）％ （Ｐ＜０．０１）ｃｏｍ－
ｐａｒｅｄ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅ　ｓｕｂ－ＭＩＣ　ｏｆ　ｖｏｌａｔｉｌｅ　ｏｉｌｓ　ｆｒｏｍＡ．ｌａｎｃｅａｏｒ　Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓｉｎｈｉｂｉｔｅｄ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ
ｇｅｎｅ　Ｈｌａ，ｗｈｉｃｈ　ｅｎｃｏｄｅｓɑ－ｔｏｘｉｎ，ｔｏ　６．１７±２．２３％ （Ｐ＜０．０１）ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｉｔ　ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ
ｔｈｅ　ｇｅｎｅ　ｔｈａｔ　ｒｅｇｕｌａｔｅｓ　Ｈｌａ，ＡｇｒＡ，ｔｏ　２４．７９±９．１９％ （Ｐ＜０．０１）．　Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｖｏｌａｔｉｌｅ　ｏｉｌｓ　ｆｒｏｍ　Ａ．ｌａｎｃｅａ　ｏｒ　Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ
ｉｎｈｉｂｉｔ　ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　Ｓ．ａｕｒｅｕｓ　ａｎｄ　ｃａｎ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ　ｉｎｈｉｂｉｔ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｓｅｖｅｒａｌ　ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ　ｆａｃｔｏｒｓ．
【Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ】　Ｖｏｌａｔｉｌｅ　ｏｉｌｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｄｒｉｅｄ　ｒｈｉｚｏｍｅ　ｏｆ　Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ　ｌａｎｃｅａ　ｏｒ　Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ，Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕ－
ｒｅｕｓ，ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ　ｆａｃｔｏｒ，ａｇｒ　ｔｗｏ－ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ｓｙｓｔｅｍ
　　金黄色葡萄球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ）是一种
临床上常见的毒性较强，也是人类化脓感染中最常见
的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜
性肠炎、心包炎等，甚至引起败血症、脓毒症等全身感
染。金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生
的毒素和侵袭性酶，包括溶血素、肠毒素、杀白细胞素、
血浆凝固酶、脱氧核糖核酸酶、表皮剥脱毒素及毒素休
克综合征毒素等。这些毒素和侵袭酶或者作为菌体表
面蛋白黏附于宿主细胞或组织基质中，或者作为胞外
蛋白分泌到环境中，对宿主细胞或组织造成损伤［１］。
随着青霉素的广泛使用，有些金黄色葡萄球菌产生青
霉素酶，能水解β－内酰胺环，表现为对青霉素耐药，从
而增加了治疗的难度。
茅苍术（Ｒｈｉｚｏｍａ　ａｒｅａｃｔｙｌｏｄｉｓ　ｌａｎｃｅａｅ）又叫南苍
术，菊科植物，江苏茅山地区是茅苍术主要产区。苍术
味辛、苦，具有燥湿健脾、祛风散寒、明目之功效［２，３］。
茅苍术中含大量挥发油，油中主含苍术素（Ａｔｒａｃｔｙｌｏ－
ｄｉｎ）、β－桉油醇（β－Ｅｕｄｅｓｍｏｌ）、茅术醇（Ｈｉｎｅｓｏｌ）、羟基
苍术酮（Ｈｙｄｒｏｘｙ－ａｔｒａｃｔｙｌｏｎ）等［４］。研究发现茅苍术
对大肠埃希菌、结核杆菌、枯叶杆菌、绿脓杆菌［５］及真
菌［６］等均有抑制作用。本研究采用体外实验方法观察
亚抑菌浓度茅苍术挥发油对金黄色葡萄球菌毒力因子
表达的抑制作用及其机制。
材料与方法
１　材料
１．１　 菌株和药物 　 金黄色葡萄球菌标准菌株
（ＡＴＣＣ２５９２３）由江苏大学基础医学与医学技术学院
检验医学研究所保存；金黄色葡萄球菌临床菌株由江
苏大学附属医院江滨医院检验科微生物室提供（编号
分别为ＳＡ１．５　ＳＡ２．３　ＳＡ４．１２）。茅苍术为南京师
范大学戴传超教授馈赠，４℃保存 。
１．２　主要试剂　 Ｂｒａｄｆｏｒｄ蛋白定量试剂盒为中国
ＡＵＲＡＧＥＮＥ 公司产品；纤维蛋白原为德国 ＳＩＥ－
ＭＥＮＳ公司产品；逆转录试剂盒为日本ＴＯＹＯＢＯ公
司产品；Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ　ＰＣＲ试剂盒为日本 ＴＡＫＡＲＡ公
司产品。
２　方法
２．１　药物制备与稀释　茅苍术提取参考《中华人民共
和国药典２０１０》附录中的挥发油提取方法，用水蒸气
蒸馏法提取。称取茅苍术６０ｇ，加入６００ｍｌ双蒸水浸
泡过夜，用挥发油提取器提取挥发油，按照４∶１（茅苍
术挥发油∶ＤＭＳＯ）比例溶解，避光４℃保存。
２．２　最小抑菌浓度（ＭＩＣ）测定　先向９６孔板的第１
～８孔各加入１００μｌ　Ｍ－Ｈ液体培养基，然后向第１孔
加入２％（ｖ／ｖ）茅苍术挥发油药液１００μｌ，依次进行倍
比稀释至第８孔并弃去１００μｌ溶液；分别向１～８孔加
入１００μｌ菌悬液，第９孔和第１０孔分别加培养基和菌
液各２００μｌ作为对照，混匀。每组重复两孔，实验重
复３次。
２．３　抑菌曲线的测定　从血琼脂平板上挑取单个菌
落于３ｍｌ　ＬＢ培养基中，于３７℃以２００ｒ／ｍｉｎ振摇过
夜；取０．４ｍｌ菌液加入到４０ｍｌ　ＬＢ培养基中继续培
养，当Ａ６００值为０．３时，将其分成４份，每份１０ｍｌ，其
中一份为空白对照，其他３份分别加入茅苍术挥发油
至终体积浓度为各菌株所对应的１／２ＭＩＣ、１／４ＭＩＣ、
１／８ＭＩＣ，继续培养，测定Ａ６００值，并绘制抑菌曲线。在
对数生长后期收集全部菌液，以１０　０００ｇ离心５ｍｉｎ，
分离上清与菌体。
２．４　胞外总蛋白量测定　按照Ｂｒａｄｆｏｒｄ蛋白定量试
剂盒中所述方法测定上清中总蛋白量。取１０μｌ蛋白
标准品（５ｍｇ／ｍｌ　ＢＳＡ）用ＰＢＳ稀释至１００μｌ，使终浓
度为０．５ｍｇ／ｍｌ；将稀释后的标准品按照０、１、２、４、８、
１２、１６、２０μｌ分别加到９６孔板中，并用ＰＢＳ将各孔体
积补足至２０μｌ；每个上清取１０μｌ加入到９０μｌ　ＰＢＳ
中，充分混匀后每孔加入２０μｌ，每份上清做３个复孔；
向各孔加入２００μｌ　Ｂｒａｄｆｏｒｄ染色液，置微量振荡板上
震荡５ｍｉｎ；用酶标仪测定Ａ５９５值，绘制标准曲线（Ｒ＞
０．９９），计算上清总蛋白含量。
２．５　凝固酶效价的测定　用ＰＢＳ将新鲜兔血浆作４
倍稀释。用无菌ＬＢ将收集的细菌培养上清倍比稀释
于试管中，１００μｌ／管。取０．５ｍｌ稀释兔血浆加入试管
内，混匀后置３７℃６ｈ，观察血浆凝集情况，以出现凝
集的最高稀释倍数作为凝固酶效价。
２．６　ɑ溶血素活力的测定　参照文献［７］　的方法测
定溶血素活力。取新鲜兔血５ｍｌ，置于灭菌的装有少
量小玻璃珠的锥形瓶中，按同一方向持续摇晃锥形瓶
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中 国 病 原 生 物 学 杂 志
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐａｔｈｏｇｅｎ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　
２０１４年５月　第９卷第５期
Ｍａｙ　２０１４，Ｖｏｌ．９，Ｎｏ．５
以除去纤维蛋白。用灭菌氯化钙缓冲液（２０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＣａＣｌ２，０．１４５ｍｏｌ／Ｌ　ＮａＣｌ）洗涤３次，再加入氯化钙缓
冲液至终体积５ｍｌ悬浮红细胞。向１．５ｍｌ离心管中
加入８７５μｌ氯化钙缓冲液，１００μｌ上清，２５μｌ红细胞，
混匀后置３７℃孵育３０ｍｉｎ，以５　５００ｇ离心１ｍｉｎ，取
上清测Ａ５４３值。
２．７　黏附分析　参照文献［８］的方法进行黏附分析。
将纤维蛋白原（２０ｍｇ／Ｌ）连续倍比稀释于９６孔板中，
每孔５０μｌ，４℃过夜，ＰＢＳ洗２次；加入５％ＢＳＡ，于３７
℃封闭１ｈ。ＰＢＳ洗３次；加入１００μｌ不同体积浓度
茅苍术挥发油培养的细菌（Ａ６００值为１），置室温２ｈ，
ＰＢＳ洗４次；用２５％甲醛固定２０ｍｉｎ，结晶紫染色５
ｍｉｎ，最后于５７０ｎｍ波长处读取Ａ值。
２．８　观察亚抑菌茅苍术挥发油对金黄色葡萄球菌
ＳＡ２．３ａｇｒＡ、ｈｌａ基因表达的影响
２．８．１　引物设计　根据ＧｅｎＢａｎｋ中金黄色葡萄球菌
基因全长序列为模板，分别设计ａｇｒＡ、ｈｌａ以及标准内
参１６ＳｒＲＮＡ的上、下游引物，引物由上海英骏生物技
术有限公司合成。引物序列及扩增片段长度见表１。
表１　荧光定量ＰＣＲ引物
Ｔａｂｌｅ　１　ｑＲＴ－ＰＣＲ　ｐｒｉｍｅｒｓ
基因
Ｇｅｎｅ
引物序列（５′－３′）
Ｐｒｉｍｅｒ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ（５′－３′）
产物长度（ｂｐ）
Ｔｈｅ　ｌｅｎｇｔｈ　ｏｆ
ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ（ｂｐ）
ａｇｒＡ－Ｆ　 ＡＡＡＡＣＧＴＧＧＣＡＧＴＡＡＴＴＣＡＧＴＧＴＡ
ａｇｒＡ－－Ｒ　 ＧＧＴＴＡＴＣＴＡＡＡＴＧＧＧＣＡＡＴＧＡＧＴＣ
９８
ｈｌａ－Ｆ　 ＣＣＴＧＧＣＣＴＴＣＡＧＣＡＴＴＴＡＡＧ
ｈｌａ－Ｒ　 ＣＡＧＡＡＴＣＡＴＣＡＣＣＡＧＴＣＡＣＧＴＴ
１５３
１６ＳＲＮＡ－Ｆ　ＡＣＴＧＧＧＡＴＡＡＣＴＴＣＧＧＧＡＡＡ
１６ＳＲＮＡ－Ｒ　ＣＧＴＴＧＣＣＴＴＧＧＴＡＡＧＣＣ
１４７
２．８．２　金黄色葡萄球菌总ＲＮＡ提取和逆转录　将
１０ｍｌ生长至对数生长后期的菌液离心，弃上清，加入
１ｍｌ　Ｔｒｉｚｏｌ裂解，混匀后于室温放置１０ｍｉｎ充分裂
解，按Ｔｒｉｚｏｌ说明书提取细菌总 ＲＮＡ，进行逆转录。
逆转录体系：总ＲＮＡ　１μｇ，Ｏｌｉｇｏ　ｄＴ　１μｌ，５×Ｂｕｆｆｅｒ　４
μｌ，ｄＮＴＰｓ（１０ｍｍｏｌ／Ｌ）２μｌ，ＲＮａｓｅ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　１μｌ，
ＲｅｖｅｒＴｒａ　Ａｃｅ　１μｌ，ｄｄＨ２Ｏ补足至２０μｌ。反应条件：
６５℃５ｍｉｎ，３７℃１５ｍｉｎ，９８℃５ｍｉｎ。将ＲＮＡ及逆
转录的ｃＤＮＡ分别于－７０℃和－２０℃保存备用。
２．８．３　Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ　ＰＣＲ 检测　ｃＤＮＡ　１μｌ，ＳＹＢＲ
Ｐｒｅｍｉｘ　Ｅｘ　Ｔａｑ（２×）７．５μｌ，Ｆｏｒｗａｒｄ　Ｐｒｉｍｅｒ　０．３μｌ，
Ｒｅｖｅｒｓｅ　Ｐｒｉｍｅｒ　０．３μｌ，ｄｄＨ２Ｏ　５．９μｌ。反应条件：９５
℃预变性３０ｓ；９５℃变性５ｓ，５６℃退火３０ｓ，７２℃延
伸３０ｓ，共４０个循环。于７２℃收集荧光信号，做融解
曲线分析，确定反应产物的单一性。
２．９　数据统计分析　每个试验均重复３次，数据以ｘ
±ｓ表示，用ＳＰＳＳ１７．０软件进行单因素方差分析，采
用Ｄｕｎｎｅｔｔ　ｔ检验进行对照组与加药组的比较分析，Ｐ
＜０．０５为差异有统计学意义。
结　果
１　茅苍术挥发油 ＭＩＣ以及抑菌曲线
茅苍术挥发油对标准菌株 ＡＴＣＣ２５９２３的 ＭＩＣ
为０．０６２５％（ｖ／ｖ），对临床株ＳＡ１．５、ＳＡ２．３和ＳＡ
４．１２的 ＭＩＣ均为０．０３１２５％（ｖ／ｖ）。细菌生长曲线表
明茅苍术挥发油的抑菌作用呈浓度依赖（图１）。
　　
Ａ　ＡＴＣＣ２５９２３　Ｂ　ＳＡ１．５　Ｃ　ＳＡ２．３　Ｄ　ＳＡ４．１２
图１　茅苍术挥发油抑菌金黄色葡萄球菌曲线
Ｆｉｇ．１　Ｇｒｏｗｔｈ　ｃｕｒｖｅ　ｏｆ　Ｒｈｉｚｏｍａ　ａｒｅａｃｔｙｌｏｄｉｓ　ｌａｎｃｅａｅ　ｖｏｌａｔｉｌｅ　ｏｉｌｓ
ａｇａｉｎｓｔ　Ｓ．ａｕｒｅｕｓ
２　胞外蛋白含量的测定
用不同浓度的茅苍术挥发油处理后，４株菌株外
排蛋白的含量见表２～５，与对照组比较差异无统计学
意义（Ｐ＞０．０５）。
表２　茅苍术挥发油作用后ＡＴＣＣ２５９２３胞外蛋白产量
及凝固酶效价的变化
Ｔａｂｌｅ　２　Ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｅｌｕｌａｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｙｉｅｌｄ　ａｎｄ　ｃｏａｇｕｌａｓｅ　ｔｉｔｅｒ
ａｆｔｅｒ　Ｒｈｉｚｏｍａ　ａｒｅａｃｔｙｌｏｄｉｓ　ｌａｎｃｅａｅ　ｖｏｌａｔｉｌｅ　ｏｉｌｓ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ＡＴＣＣ２５９２３
茅苍术挥发油浓度
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ
胞外蛋白质浓度（ｘ±ｓ，ｍｇ／Ｌ）
Ｅｘｔｒａｃｅｌｕｌａｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ
凝固酶效价
Ｃｏａｇｕｌａｓｅ　ｔｉｔｅｒ
１／２ＭＩＣ　 １７．２８±３．４４　 １∶４＊
１／４ＭＩＣ　 １５．３１±２．２４　 １∶８＊
１／８ＭＩＣ　 １８．４６±５．８１　 １∶１６
对照组 １７．２８±３．０１　 １∶１６
　　＊与对照组比较（Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ），Ｐ＜０．０５。
表３　茅苍术挥发油作用后临床株ＳＡ１．５胞外蛋白产量
及凝固酶效价的变化
Ｔａｂｌｅ　３　Ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｅｌｕｌａｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｙｉｅｌｄ　ａｎｄ　ｃｏａｇｕｌａｓｅ　ｔｉｔｅｒ
ａｆｔｅｒ　Ｒｈｉｚｏｍａ　ａｒｅａｃｔｙｌｏｄｉｓ　ｌａｎｃｅａｅ　ｖｏｌａｔｉｌｅ　ｏｉｌｓ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ＳＡ１．５
茅苍术挥发油浓度
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ
胞外蛋白质浓度（ｘ±ｓ，ｍｇ／Ｌ）
Ｅｘｔｒａｃｅｌｕｌａｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ
凝固酶效价
Ｃｏａｇｕｌａｓｅ　ｔｉｔｅｒ
１／２ＭＩＣ　 １６．１０±２．０２　 １∶８＊
１／４ＭＩＣ　 １７．５４±１．３８　 １∶１６＊
１／８ＭＩＣ　 １６．４６±２．１７　 １∶１６＊
对照组 １７．４１±１．０８　 １∶６４
　　＊与对照组比较（Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ），Ｐ＜０．０５。
·０１４·
中 国 病 原 生 物 学 杂 志
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐａｔｈｏｇｅｎ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　
２０１４年５月　第９卷第５期
Ｍａｙ　２０１４，Ｖｏｌ．９，Ｎｏ．５
表４　茅苍术挥发油作用后临床株ＳＡ２．３胞外蛋白产量
及凝固酶效价的变化
Ｔａｂｌｅ　４　Ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｅｌｕｌａｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｙｉｅｌｄ　ａｎｄ　ｃｏａｇｕｌａｓｅ　ｔｉｔｅｒ
ａｆｔｅｒ　Ｒｈｉｚｏｍａ　ａｒｅａｃｔｙｌｏｄｉｓ　ｌａｎｃｅａｅ　ｖｏｌａｔｉｌｅ　ｏｉｌｓ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ＳＡ２．３
茅苍术挥发油浓度
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ
胞外蛋白质浓度（ｘ±ｓ，ｍｇ／Ｌ）
Ｅｘｔｒａｃｅｌｕｌａｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ
凝固酶效价
Ｃｏａｇｕｌａｓｅ　ｔｉｔｅｒ
１／２ＭＩＣ　 １９．１２±４．６２　 １∶８＊
１／４ＭＩＣ　 ２１．７５±３．２３　 １∶１６＊
１／８ＭＩＣ　 ２２．２７±４．９９　 １∶１６＊
对照组 １９．７８±１．０４　 １∶６４
　　＊与对照组比较（Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ），Ｐ＜０．０５。
表５　茅苍术挥发油作用后临床株ＳＡ４．１２胞外蛋白产量
及凝固酶效价的变化
Ｔａｂｌｅ　５　Ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｅｌｕｌａｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｙｉｅｌｄ　ａｎｄ　ｃｏａｇｕｌａｓｅ　ｔｉｔｅｒ
ａｆｔｅｒ　Ｒｈｉｚｏｍａ　ａｒｅａｃｔｙｌｏｄｉｓ　ｌａｎｃｅａｅ　ｖｏｌａｔｉｌｅ　ｏｉｌｓ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ＳＡ４．１２
茅苍术挥发油浓度
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ
胞外蛋白质浓度（ｘ±ｓ，ｍｇ／Ｌ）
Ｅｘｔｒａｃｅｌｕｌａｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ
凝固酶效价
Ｃｏａｇｕｌａｓｅ　ｔｉｔｅｒ
１／２ＭＩＣ　 １７．４１±１．１８　 １∶８＊
１／４ＭＩＣ　 １８．８６±２．８０　 １∶１６＊
１／８ＭＩＣ　 １８．８６±２．１７　 １∶１６＊
对照组 １９．１２±０．６０　 １∶６４
　　＊与对照组比较（Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ），Ｐ＜０．０５。
３　凝固酶效价
１／２ＭＩＣ和１／４ＭＩＣ的茅苍术挥发油能减少标准
菌株ＡＴＣＣ２５９２３凝固酶的产生而１／８ＭＩＣ浓度时不
能抑制凝固酶的产生；１／２ＭＩＣ、１／４ＭＩＣ和１／８ＭＩＣ挥
发油均能减少临床株凝固酶的产生，药物组金黄色葡
萄球菌凝固酶效价与对照组比较差异有统计学意义
（Ｐ＜０．０５）。
４　ɑ－溶血素活力
在血平板上生长时，临床株ＳＡ１．５和ＳＡ４．１２均
不产 生 溶 血 环，无 ɑ－溶 血 素 产 生。标 准 菌 株
ＡＴＣＣ２５９２３和临床株 ＳＡ２．３分别用 １／２ＭＩＣ、１／
４ＭＩＣ和１／８ＭＩＣ挥发油处理后的溶血活力见图２，与
对照组比较差异有统计学意义（ＡＴＣＣ２５９２３：１／
２ＭＩＣ：ｔ＝５．４２４，Ｐ＜０．０１；１／４ＭＩＣ：ｔ＝４．７３４，Ｐ＜
０．０１；１／８ＭＩＣ：ｔ＝４．３１１，Ｐ＜０．０１；ＳＡ２．３：１／
２ＭＩＣ：ｔ＝３８．３７，Ｐ＜０．０１；１／４ＭＩＣ：ｔ＝３９．４８，Ｐ＜
０．０１；１／８ＭＩＣ：ｔ＝３０．８３，Ｐ＜０．０１）（图２），且呈浓
度依赖。
　　
Ａ　ＡＴＣＣ２５９２３　Ｂ　ＳＡ２．３
＊与对照组比较（Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ），Ｐ＜０．０１。
图２　茅苍术挥发油作用后金黄色葡萄球菌ɑ溶血素产量变化
Ｆｉｇ．２　Ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆɑ－ｔｏｘｉｎ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｓ．ａｕｒｅｕｓ
５　黏附分析
１／２ＭＩＣ、１／４ＭＩＣ和１／８ＭＩＣ挥发油抑制标准菌
株ＡＴＣＣ２５９２３和临床株ＳＡ１．５金黄色葡萄球菌对于
纤维蛋白原的黏附作用见图３，实验组黏附因子的量
与对照组比较差异有统计学意义（ＡＴＣＣ２５９２３：１／
２ＭＩＣ：ｔ＝８．２０６，Ｐ＜０．０１；１／４ＭＩＣ：ｔ＝５．７６８，Ｐ＜
０．０１；１／８ＭＩＣ：ｔ＝６．４２７，Ｐ＜０．０１；ＳＡ１．５：１／
２ＭＩＣ：ｔ＝９．６４７，Ｐ＜０．０１；１／４ＭＩＣ：ｔ＝７．１６１，Ｐ＜
０．０１；１／８ＭＩＣ：ｔ＝５．５７４，Ｐ＜０．０１）。１／２ＭＩＣ和１／
４ＭＩＣ挥发油对ＳＡ２．３有显著抑制作用，１／２ＭＩＣ挥
发油对ＳＡ４．１２有显著抑制作用。
　　
Ａ　ＡＴＣＣ２５９２３　Ｂ　ＳＡ１．５　Ｃ　ＳＡ２．３　Ｄ　ＳＡ４．１２
＊与对照组比较（Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ），Ｐ＜０．０１。
图３　茅苍术挥发油作用后金黄色葡萄球菌对纤维蛋白原
黏附能力的变化
Ｆｉｇ．３　Ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　Ｓ．ａｕｒｅｕｓ　ａｄｈｅｒｅｎｃｅ　ｔｏ　ｓｏｌｉｄ－ｐｈａｓｅ　ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ
６　亚抑菌浓度茅苍术挥发油对金黄色葡萄球菌ＳＡ２．
３ａｇｒＡ、ｈｌａ基因表达的影响
茅苍术挥发油处理组的ＡｇｒＡ基因和Ｈｌａ基因的
表达量见图４。１／２ＭＩＣ、１／４ＭＩＣ和１／８ＭＩＣ茅苍术
挥发油作用组金黄色葡萄球菌ＳＡ２．３ａｇｒＡ基因表达
量差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），其中１／８ＭＩＣ 组
ａｇｒＡ表达量最高，为２７．９３％；挥发油处理组与对照
组相比差异有统计学意义（１／２ＭＩＣ：ｔ＝２２．０７，Ｐ＜
０．０１；１／４ＭＩＣ：ｔ＝２３．６９，Ｐ＜０．０１；１／８ＭＩＣ：ｔ＝
２１．１４，Ｐ＜０．０１）。挥发油处理组 Ｈｌａ基因表达量与
对照组相比差异有统计学意义（１／２ＭＩＣ：ｔ＝９３．４９，
Ｐ＜０．０１；１／４ＭＩＣ：ｔ＝８０．８３，Ｐ＜０．０１；１／８ＭＩＣ：ｔ
＝８６．２３，Ｐ＜０．０１）。对比分析ＡｇｒＡ基因和 Ｈｌａ基
因的表达量不呈线性相关。
　　
＊与对照组比较（Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ），Ｐ＜０．０１。
图４　ＳＡ２．３的ＡｇｒＡ基因和Ｈｌａ基因相对表达量
Ｆｉｇ．４　Ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ａｇｒＡ　ａｎｄ　ｈｌａ　ｏｆ　ＳＡ２．３
（下转４３３页）
·１１４·
中 国 病 原 生 物 学 杂 志
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐａｔｈｏｇｅｎ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　
２０１４年５月　第９卷第５期
Ｍａｙ　２０１４，Ｖｏｌ．９，Ｎｏ．５
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【收稿日期】　２０１３－１２－２８　【修回日期】　
檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼
２０１４－０２－２６
（上接４１１页）
讨　论
实验结果表明，茅苍术挥发油能够抑制标准菌株
ＡＴＣＣ２５９２３以及多株临床耐药菌的生长。亚抑菌浓
度的茅苍术挥发油对金黄色葡萄球菌外排总蛋白量没
有影响，但能够抑制金黄色葡萄球菌多种毒力因子的
产量。４株金黄色葡萄球菌在茅苍术挥发油作用后凝
固酶的分泌都受到抑制且呈浓度依赖性，其中两株在
１／８ＭＩＣ时其黏附作用显著降低，说明茅苍术挥发油能
够减少细菌凝集因子的产量，从而抑制金黄色葡萄球
菌的进一步感染和传染。ɑ－溶血素的分泌也受到茅苍
术挥发油抑制，且呈浓度依赖性。表明茅苍术挥发油
具有减少ɑ－溶血素产生的作用，从而减轻金黄色葡萄
球菌对机体的侵害。
金黄色葡萄球菌中存在两类主要的调控系统———
ＴＣＲＳｓ（二元调控系统）和ＳａｒＡ蛋白家族，ＴＣＲＳｓ与
其他的转录因子以及ＳａｒＡ蛋白家族相互作用可以对
环境刺激产生反应，调节多种毒力因子的表达，从而调
节细菌对环境及宿主的适应能力。在二元调控系统
中，ａｇｒ系统是目前在金葡菌中研究得较为清楚的一个
重要系统。ａｇｒ基因包括两个转座子，ＲＮＡⅡ和 ＲＮＡ
Ⅲ，分别由Ｐ２和Ｐ３启动子启动［９］。Ｐ２启动转录４个
基因ａｇｒＢ、ａｇｒＤ、ａｇｒＣ 和 ａｇｒＡ，以活化 ＲＮＡⅡ 和
ＲＮＡⅢ。Ｐ３ 转录２６个氨基酸，包括溶血素多肽。
ＡｇｒＡ为反应效应因子，ＡｇｒＡ的激活［１０］启动ＲＮＡⅢ
的转录从而对毒力因子进行调控。金黄色葡萄球菌的
毒性就是由多种蛋白质和基因相互反馈而形成的网络
作用的结果［１１］。通过检测茅苍术挥发油对金黄色葡萄
球菌ＡｇｒＡ和 Ｈｌａ基因表达量的变化，证明茅苍术挥
发油差异性抑制了ＡｇｒＡ、Ｈｌａ基因的转录推测可能是
通过抑制 ＡｇｒＡ转录，使 ＡｇｒＡ表达下调，导致ａｇｒ启
动子Ｐ２、Ｐ３的转录下降，从而抑制下游基因的转录，
最终导致一些毒力因子的表达下调。由于 ＡｇｒＡ 与
Ｈｌａ基因表达量并不线性相关，说明茅苍术挥发油除
了作用ａｇｒ调控系统外，可能还作用于其他调控系统
或直接抑制 Ｈｌａ基因的表达。由于 Ｈｌａ基因的表达和
ɑ－溶血素分泌的变化并不完全一致，推测可能有其他
基因能够调控ɑ－溶血素的分泌。
综上所述，茅苍术挥发油能够抑制金黄色葡萄球
菌的生长，并且对多种毒力因子的表达有抑制作用，从
而减轻金黄色葡萄球菌感染后的炎症反应，起到预防
和治疗金黄色葡萄球菌感染的作用。
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ＡｇｒＡ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｔｏ　ｔｈｅ　ＲＮＡＩＩＩ－ａｇｒ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ｒｅｇｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ　Ｂａｃｔｅｒｉ－
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生研究，１９９８，２７（Ｓ１）：３５－７．
【收稿日期】　２０１４－０３－２１　【修回日期】　２０１４－０５－０９
·３３４·
中 国 病 原 生 物 学 杂 志
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐａｔｈｏｇｅｎ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　
２０１４年５月　第９卷第５期
Ｍａｙ　２０１４，Ｖｏｌ．９，Ｎｏ．５