全 文 ：紫外可见分光光度法测定三叶青中总黄酮的含量
郑军献　胡轶娟　梁卫青　浦锦宝　魏克民
(浙江省中医药研究院·杭州 310007)
摘　要　目的:建立测定三叶青药材中总黄酮含量的分析方法;探讨不同产地三叶青总黄酮含量的差异。
方法:采用紫外可见分光光度法 ,以芦丁为对照品 , 在波长 500nm 处对样品中的总黄酮进行含量测定。结
果:芦丁在 7.52～ 45.12mg L有良好的线性关系(r=0.9996),该法的平均加样回收率为 99.10%的 , RSD为
1.30%(n=9)。产地不同 , 总黄酮含量也存在差异。结论:所建立的方法准确 、简便 、快速 , 重现性好 , 适
用于三叶青药材中黄酮含量的测定。
主题词　三叶青 分析　总黄酮
　　三叶青(Tetrastigmatis hemsleyani)为葡萄科植物三叶崖爬
藤(Tetrastigm a hemsleyanum Diels et Gilg)的干燥块根 ,是我国
特有植物。我省民间的常用药。其性凉 , 味辛 、苦 , 无毒 , 具
有清热解毒 、活血止痛 、祛风化痰 、消肿等功效 , 常用于高热
惊厥 ,小儿感受冒发热 , 喉痒肿痛 ,咳嗽 , 肺炎 ,肝炎 , 肠炎 , 痢
疾 ,支气管炎及支气管哮喘 , 风湿病 ,疔疮毒疖 , 跌打损作伤
等 ,也可用于一些病毒性疾病 ,及慢性和迁延性疾病。 三叶
青中的化学成分有黄酮 、黄酮苷 、淀粉 、还原糖 、甾类化合物 、
氨基酸等[ 1] , 其中黄酮是一类重要的生理活性物质。药理研
究表明三叶青具有解热 、镇痛 、抗炎 、抗病毒 、保肝 、增强免
疫 、抗肿瘤等作用[1 ～ 5] 。三叶青黄酮具有抗肿瘤细胞增殖和
诱导凋亡等作用[ 6] 。但目前对不同产地三叶青的总黄酮成
分含量测定的报道较少。本文参考有关文献[7] ,采用紫外可
见分光光度法对三叶青的总黄酮成分进行了含量测定。
1　仪器与材料
芦丁对照品(批号:100080-200306):由中国药品生物制
品检定所提供;电子分析天平(万分之一):Sartorius;CARY
100 紫外分光光度计:VARIAN;水为重蒸水 , 亚硝酸钠 、硝酸
铝 、氢氧化钠 、甲醇等均为分析纯。三叶青购于磐安药材市
场及浙江省内各地采集 ,经浙江中医药大学陈锡林教授鉴定
磐安药材市场为广西云南种 , 浙江省内采集的为浙江种 , 留
样凭证存放于浙江省中医药研究院蚕业中心。
2　方法与结果
2.1　检测波长的选择
以甲醇配制一定浓度的芦丁溶液 , 精密吸取 6ml , 置
25ml量瓶中 , 加水至 6ml ,精密加入 5%亚硝酸钠溶液 1ml , 摇
匀 ,放置 6分钟 , 再精密加入 10%硝酸铝溶液 1ml , 摇匀 , 放
置 6分钟 , 精密加入氢氧化钠试液 10ml , 加水至刻度 , 摇匀 ,
放置15分钟 , 照紫外可见分光光度法(《中国药典》 2005 年版
一部附录ⅤA)于 200～ 800nm 范围内进行波长扫描。结果表
明三叶青总黄酮在 500nm 处有最大吸收峰 ,故确定检测波长
为 500nm。
2.2　供试品溶液的制备
取本品粉碎 ,过 10 目筛 ,精密称取 0.5g , 置圆底烧瓶中 ,
加甲醇 50ml ,加热回流提取 2 次 , 每次 1 小时 , 取出放冷 , 滤
过 ,滤液挥干 , 残渣用适量甲醇溶解转移至 10ml量瓶中 , 加
甲醇稀释至刻度 , 摇匀 ,即得。平行操作 3 份。
2.3　对照品溶液的制备　精密称取芦丁对照品适量 , 加甲
醇制成每 1ml含 0.2mg 的溶液 ,摇匀 , 即得。
2.4　标准曲线的制备　精密吸取对照品溶液 0、1、2 、3、4、5、
6ml , 置 25ml具塞比色管中 ,加水至6ml , 精密加入 5%亚硝酸
钠溶液 1ml ,摇匀 , 放置 6分钟 , 再精密加入 10%硝酸铝溶液
1ml , 摇匀 ,放置 6 分钟 ,精密加入氢氧化钠试液 10ml , 加水至
刻度 , 摇匀 ,放置 15 分钟 , 照紫外可见分光光度法(《中国药
典》2005 年版一部附录ⅤA), 于 500nm 处测定吸收度。以吸
收度值 A 为纵坐标 , 芦丁对照品的浓度(mg L)为横坐标 ,绘
制标准曲线 , 回归方程为:A=0.01362C -0.01839 , r =0.
9996。表明芦丁在 7.52～ 45.12mg L范围内呈良好的线性关
系。
2.5　方法学考察
2.5.1　精密度试验　精密吸取对照品溶液4ml、供试品溶液
6ml , 共6 份 ,置 25ml比色管中 , 加水至6.0ml , 其余操作同“标
准曲线的制备” , 于 500nm 处测定吸收度。 结果对照品的
RSD为 1.54%, 供试品的 RSD 为1.66%。
2.5.2　稳定性试验　取精密度项下的对照品和供试品的第
6号样品于 10 、20、40、60 、90、120分钟测定吸收度。结果对照
品的 RSD为 0.57%, 供试品的 RSD 为 1.54%。 对照品溶液
与供试品溶液在显色后 120 分钟内基本稳定。
2.5.3　重复性试验　平行称取 6 份样品 , 按 2.2 项下制备
供试品溶液 , 进样测定 ,结果平均含量为 6.44mg g , RSD为 1.
46%。
2.5.4　加样回收试验　称取已知含量的同一批样品 9 份 ,
精密称定 ,分别精密加入不同量的对照品溶液 , 按供试品溶
液制备方法制备 , 测定 ,计算回收率 , 平均回收率为 99.10%,
RSD为 1.30%, 结果见表 1
2.6　样品测定　分别取 2 个不同批号样品 , 按 2.2 项下制
备供试品溶液 , 测定 , 计算样品中总黄酮的含量 , 结果见表
2。
·386· 中国中医药科技 2009年 9 月第 16 卷第 5期 Sep.2009 Vol.16 No.5
表 1 样品回收率试验结果(n=9)
样品中含量
(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
3.2335 2.6322 5.8463 99.27
3.2889 2.6320 5.8838 98.59
3.2258 2.6320 5.8902 101.23
3.2561 3.1964 6.3834 97.85
3.2599 3.196 6.4802 100.76 99.10 1.30
3.2374 3.1963 6.3893 98.62
3.2722 3.7600 7.0077 99.35
3.2284 3.7603 6.8812 97.15
3.2818 3.7600 7.0061 99.05
　　表 2 三叶青药材中总黄酮的含量
编号 采集日期 产地 含量(mg g) 备注
1 08-09-16 广西 6.5059 购于亳州
2 06-12-16 广西 6.0575 方前引广西种
3 05-08-27 广西 7.5712 购于磐安特产城
4 07-12-10 广西 4.0418 购于磐安特产城
5 08-11-24 广西 6.6217 购于磐安特产城
6 06-07-19 天台 6.1664 野生
7 07-07-01 建德 5.5550 家种
8 07-09-06 兰溪 5.6734 野生
9 07-09-06 建德 8.4131 野生
10 07-08-03 常山 6.8045 野生
3　讨论
3.1　本试验中对供试品溶液的制备方法进行了考察 , 分别
比较了甲醇 、乙醇为提取溶剂 , 加热回流提取和超声提取 , 提
取时间等 ,最终确定了供试品溶液的制备方法 。
3.2　本试验采用紫外可见分光光度法测定三叶青中总黄酮
的含量 ,该方法简便 、准确 , 适合 , 为中药三叶青的定量分析
和品质评价及含量测定提供了快速 、准确 、有效的分析方法。
3.3　尽管不同产地三叶青所含化学成分大致相同 , 但由于
生长环境不同 , 各成分的含量并不完全一样。因此根据其生
长环境的分布情况 , 共采集了广西产三叶青样本 6 个 , 浙江
产的三叶青样本 4 个。实验数据表明浙江产的三叶青总黄
酮含量高于广西产 , 浙江产三叶青野生的总黄酮含量高于家
种药材 ,浙江省内野生药材以建德产黄酮含量最高 , 常山次
之 ,天台第三 , 兰溪最低。不同产地具有不同的生态环境 ,对
三叶青中总黄酮含量产生影响是必然的 , 但影响三叶青中总
黄酮含量的因素不仅仅只是生长环境 ,还有生长年限 、种类
或品种以及采收季节的不同。故总黄酮的含量测定可作为
三叶青药材质量的参考依据 , 对保证其质量 、指导其栽培生
产 ,以及相关制剂产品的质量控制具有重要意义和应用价
值。
　　参考文献
1　杨学楼 ,罗经 ,孙松柏 ,等.三叶青抗病毒作用的研究.湖北中医
杂志 , 1989 ,(4)40.
2　钟晓明 ,毛庆秋 ,黄真 ,魏佳平等.三叶青提取物对四氯化碳致急
性肝损伤小鼠的保护作用及急性毒性实验.中成药 , 2006 , 28
(3):422.
3　钟晓明 ,毛庆秋 ,黄真 ,等.三叶青提取物对烫伤大鼠肠道局部和
全身免疫功能的影响.中药材 , 2006 ,29(9):953.
4　丁钢强 ,郑军献 ,魏克民 ,等.三叶青提取物对肝癌细胞 HepG-2
及原代大鼠肝细胞的体外毒性作用研究.浙江预防医学, 2005,
17(9):122.
5　冯正权 ,倪克锋 ,何煜 ,等.三叶青黄酮诱导 SGC-7901胃癌细胞
凋亡的实验研究.中国临床药理学与治疗学 , 2006, 11(6):669.
6　倪克锋 ,金波 ,蒋福升 ,等.三叶青黄酮对 H22荷瘤小鼠 TIMP-
2mRNA 表达的影响.中国中医药科技 , 2009 , 16(3):195.
7　黄真 ,胡瑛瑛.正交试验法优选三叶青中总黄酮的提取工艺.中
国现代应用药学杂志 , 2008, 25(1):34.
(修回:2009-07-19)
中西医结合治疗女性外阴白色病变 198例
张淑华　赵子诚　(黑龙江省医院·哈尔滨 150001)
　　1　临床资料　本组 198例均为我院 2006-06～ 12门诊就诊的女性
外阴白色病变患者 ,年龄 6～ 27岁。病史 1～ 20年。
2　方法　止痒消白散(由苦参 、黄柏 、黄连、薄荷等纯中药组成),每
天早上取 1小袋(20g),早晚各取 1 2袋 ,用沸水浸泡至温凉时 , 洗患
处数分钟;每次洗后取奇白消软膏(由珍珠 、冰片 、朱砂 、黄连等纯中
药组成)涂患处 ,轻轻按摩数分钟。双参四白胶囊(由丹参 、人参 、白
芍 、当归等纯中药组成)2次 天 ,每次 3～ 6粒 ,饭后服下。同时 ,加服
维生素AD胶丸 ,维生素E胶丸 ,维生素B6,对有阴道炎症的患者 ,给
予祛炎灵(哈尔滨制药厂生产),每晚 1粒送入阴道深处 ,经期停用。
3个月为 1个疗程 , 1个疗程后评定疗效。
3　结果
3.1　疗效标准　痊愈:自觉症状消失 ,病变区皮肤 、黏膜颜色 、弹性
及病理变化恢复正常 ,随访 1年以上无复发;显效:自觉症状消除或
偶尔有痒感 ,白色区部位缩小;变为粉红色或褐色 ,角化萎缩明显减
轻 ,弹性基本恢复;好转:病区瘙痒症状减轻 ,病区缩小;颜色弹性均
好转;无效:症状和体征与以前比较没有减轻。
3.2　治疗结果　198 例患者中 , 痊愈 147 例(74%), 显效 28 例
(14%),好转 21例(11%),无效 2例(占 1%),总有效率 99%。
4　讨论　女性外阴白色病变为妇科常见病 ,是外阴局部皮肤 、黏膜
营养障碍而致的组织变性及色素改变。中医认为本病多为肝郁 ,郁
久化热 ,因肝病而及脾 ,致脾失健运 , 肾气不健 , 肾为生殖发育之源 ,
其气通于阴 ,由肝热下乘而阴痒 ,水湿下注而阴肿 ,病久阴血耗竭 ,
肌肤失养出现外阴干枯变硬 、萎缩等症, 局部组织营养障碍而致使
细胞变性 ,色素脱失。
本疗法遵照中医“急则治其标 ,缓则治其本”的医理 ,通过止痒
消白散和奇白消软膏外涂 ,先解除其痒 、痛 、皲裂 、炎症等急疾 ,同时
软坚化瘀 、退白生肌。内服双参四白胶囊疏肝 、健脾 、补肾 、清热解
毒 、祛风利湿 、活血化瘀 , 并补充微量元素 ,使症状缓解 ,病变消除 ,
功能恢复。
(修回:2009-07-11)
·387·中国中医药科技 2009年 9 月第 16卷第 5 期 Sep.2009 Vol.16 No.5