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甜荞麦叶总黄酮镇痛抗炎作用的实验研究



全 文 :甜荞麦叶总黄酮镇痛抗炎作用的实验研究
Experimental Study on Total Flavones from Buckwheat Leaf in Fighting Pain and Inflammation
华北煤炭医学院附属医院
Affi liated Hospital of North China Coal Medical C ollege
(河北 唐山 063000)  
王元福
WANG Yuan-fu
华北煤炭医学院附属医院药理教研室
Affiliated Hospital of North China Coal Medical College  
陈晓玉
CHEN Xiao-yu  
韩淑英
HAN Shu-ying  
朱丽莎
ZHU Li-sha 
刘淑梅
LIU Shu-mei  
吕 华
LU Hua  
储金秀
CHU Jin-xiu
  摘要:为研究荞麦叶总黄酮(TFBL)的镇痛抗炎作用 , 用热板法和化学刺激法观察 TFBL 对小鼠的镇痛作用 ,
用二甲苯(Xylene)致小鼠耳水肿 , 醋酸诱发小鼠毛细血管通透性增高 , 棉球包埋致小鼠肉芽肿形成观察 TFBL的抗
炎作用。结果:TFBL 灌胃(ig.)0.15 g·kg-1·d-1和 0.3 g·kg-1·d-1能明显延长小鼠热刺激的痛阈值(P <0.01)和
明显减少醋酸刺激小鼠腹膜的扭体次数(P<0.01);与对照组相比 , TFBL均能明显减轻肉芽肿的形成 , 降低毛细
血管通透性的增高和抑制耳肿 , 其两个剂量的 TFBL 组抑制率分别为 18.9%和 30.9%、24.7%和 34.6%及
50.26%和 56.67%。显示 TFBL具有明显的镇痛抗炎作用 。
  关键词:荞麦;总黄酮;镇痛;抗炎
中图分类号:R 285.5  文献标识码:A  文章编号:1007-1334(2004)11-0054-02
[ 基金项目] 唐山市科委基金资助(NO.02146013A-16)
[ 作者简介]王元福(1951-), 男 , 副主任医师 , 主要从事中药
防治糖尿病及抗炎免疫研究工作。
  荞麦(fagopy rum)是一种适宜在低温环境下生长的短季
蓼科植物 ,富含有黄酮类化合物。荞麦分甜荞麦(俗称荞麦)
和苦荞麦 ,在我国北方甜荞麦广泛分布。荞麦具有很多药理
活性 ,如降糖 、降脂 、抗氧化及调节免疫功能等作用 , 具有很
高的药用价值。目前对苦荞麦研究报道较多[ 1] , 而对甜荞麦
研究报道较少 ,特别是对甜荞麦叶抗炎镇痛作用的研究目前
未见报道。笔者在前期工作的基础上[ 2] , 对甜荞麦叶乙醇提
取的总黄酮进行了抗炎镇痛作用的研究 ,报告如下。
  一 、材料
  1.药品与试剂 荞麦叶为甜荞麦种子收割后自然干燥
的叶(来自内蒙古库伦旗),用 10 倍量的 700 ml/ L乙醇回流
提取 3次 , 合并提取液 , 用旋转蒸发器回收乙醇并浓缩至原
液量的 1/2 ,提取液趁热过滤去除不溶性沉淀 , 加分离剂冷
却析出淡黄色结晶 ,离心 , 沉淀物 70℃烤干即为荞麦叶总黄
酮(TFBL)(经中国科学院药物研究所鉴定为黄酮类 , 总黄酮
含量为 98 g/ L)。氢化可的松(长白山制药), 批号 990108。
消炎痛(唐山制药厂),伊文思蓝(上海化学试剂采购站)。
  2.动物 实验用昆明小白鼠 , 体重 18 ~ 22 g , 雌雄兼
有 , 由华北煤炭医学院实验动物中心提供。
  3.仪器 电子天平(MP200A 型 , 上海第二天平仪器
厂), 722分光光度计(北京), 热板测痛仪(GJ-8402 型 , 宁海
白石电子医药仪器厂),离心沉淀机[ LX] -Ⅱ(上海医用分析
仪器厂)。
  4.数据处理 用计算机 instat软件进行 t检验 ,结果以
x±s表示。
  二 、 方法与结果
  1.TFBL 的镇痛作用
  (1)热板法[ 3]  用雌性小鼠 48 只(初筛痛阈 10~ 30 s)
随机分为 4 组 , 即对照组(生理盐水组), 消炎痛组 , TFBL 小
剂量和大剂量组。上述各组均灌胃给药 , 每日 1 次 , 连续 3
日。末次给药 40 min ,再测痛阈 , 痛阈值超过 60 s者以 60 s
计算。计算各组痛阈延长值=药后痛阈-药前痛阈和痛阈
提高百分率(TB)=(药后痛阈-药前痛阈)/药前痛阈×
100%。结果详见表 1。
表 1 TFB对小鼠痛阈的影响(热板法)( x±s , n=12)
组别 剂量(g·kg -1) 药前痛阈(s) 药后痛阈(s) 痛阈延长值(s) TB(%)
对照组 14.8±2.9 13.8±3.1 -(1.0±1.2)
消炎痛组 0.02 13.6±3.1 35.5±4.8 +(21.9±4.7)■■ 161.03
TFBL小剂量组 0.15 14.6±2.6 22.8±4.3 +(8.2±4.1)■■** 56.16
TEBL大剂量组 0.30 13.9±3.2 25.3±5.0 +(11.4±4.4)■■** 82.01
  注:与对照组比较 , ■■P <0.01;与消炎痛组比较 , **P<0.01。
  (2)扭体法[ 3] 小鼠 48 只 , 雌雄各半 , 分组与给药同热
板法 ,末次给药 40 min , 每鼠腹腔注射 0.6%醋酸溶液 0.2
ml ,记录 20 min 内小鼠扭体次数 , 并计算镇痛百分率=(实
验组无扭体动物数-对照组无扭体动物数)/实验组动物数
第38卷第 11 期
2004年 11月
上 海 中 医 药 杂 志
 
SHANGHAI JOURNA L OF TRADITIONAL CHINESE MEDICIN E
VOL.38 NO.11
NOV., 2004
DOI :10.16305/j.1007-1334.2004.11.025
×100%。结果显示 , 两个剂量 TFBL 可明显减少小鼠扭体
次数(P <0.01), 其镇痛抑制率大小剂量分别为 47.8%和
52.6%, 消炎痛组为 71.4%。
  2.抗炎作用[ 4]
  (1)TFBL对小鼠棉球肉芽肿的影响 小鼠分组同上。
另取棉球每个 10 mg , 高压消毒 , 80℃烘干 。每鼠右腋下皮肤
无菌切口 0.5 cm ,塞入一个棉球缝合。之后即按上述方法开
始给药 ,其中阳性对照药为氢化可的松 , 按 4 mg·kg -1·d-1
腹腔注射 ,上述各处理因素各每日 1 次 , 连续 10 天。末次给
药2 h 后 , 打开原切口 , 将棉球及周围结缔组织一起取出 ,
80℃干燥, 称重, 减去原棉球重得肉芽肿重 , 计算药物对肉芽
肿的抑制率。结果显示 , TFBL均能抑制肉芽肿的形成 , 大剂
量 TFBL组肉牙肿重量为 48.2±17.4(P<0.05), 小剂量为
56.5±19.1(P>0.05),氢化可的松为 30.9±10.3(P<0.01),
而对照组为 69.7±19.5。与对照组比较 ,大小剂量 TFBL 和
氢化可的松的抑制率分别为 18.9%、30.9%和 55.7%。
  (2)TFBL 对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响[ 4]  小鼠
雌雄各半 , 分组给药同镇痛实验 。于末次给药 40 min , 小鼠
尾静脉注射 0.5%伊文思蓝 0.05 ml·10 kg-1 , 5 min 后小鼠
腹腔注射 0.7%醋酸 0.1 ml·10 g -1 , 再过 0.5 h 后处死 , 用
10 ml生理盐水冲洗腹腔 ,轻揉腹部 ,用注射器吸出腹腔内液
体 , 200 r·min-1离心 10 min , 取上清液在 590 nm 处测吸光度
值(OD)。结果详见表 2。由表可见不同剂量 TFBL 均能明
显抑制醋酸所致毛细血管透性的增加(P <0.01), 大剂量组
效果更好 ,其抑制率分别为 24.7%和 34.6%。
表 2 TFBL对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响
组别 剂量(g·kg -1) OD 抑制率(%)
对照组 0.081±0.016
消炎痛组 0.02 0.038±0.015■■ 53.1
TFBL小剂量组 0.15 0.061±0.015■■ 24.7
TEBL大剂量组 0.30 0.053±0.013■■ 34.6
  注:与对照组比较 , ■■P <0.01。
  (3)TFBL对小鼠耳肿胀程度的影响 小鼠雌雄兼有 ,
分组给药同镇痛实验 , 于末次给药后用二甲苯溶液 , 于小鼠
右耳壳前后面均匀涂抹致炎 , 左耳为对照 , 4 h 后处死小鼠 ,
沿耳廊基线剪下双耳 ,每鼠用直径 8 mm 打孔器分别在同一
部位打下圆耳片 ,用电子天平称左右耳重。以左右耳重量值
为肿胀程度 ,计算抑制率。结果:TFBL大剂量 、小剂量 、消炎
痛及对照各组小鼠耳肿胀程度分别为 3.41±2.43 、3.95 ±
2.48、2.20±1.08 及 7.87±4.31 ,与对照组比较各给药组均
能明显抑制二甲苯所致耳肿胀(P<0.01)。 TFBL 大剂量抑
制率为 50.26%, 小剂量为 56.67%, 消炎痛为 71.26%。
  三 、讨论
  《中药大全》记载[ 6] :“荞麦全草含芸香苷 , 槲皮素 , 咖啡
酸等黄酮类物质。具有降低毛细血管通透性 , 抗炎 、抗过敏 、
镇咳 、解痉 、降糖 、降脂 、强心等方面作用。”本实验证明 TFBL
小剂量组和大剂量组对热刺激和化学刺激所致的痛感觉均
有明显的镇痛作用 , 并且对二甲苯刺激耳水肿的急性炎症 、
异物刺激的慢性炎症及小鼠腹腔毛细血管渗出均有抑制作
用 ,显示 TFBL 具有良好的镇痛抗炎作用。其机制可能与
TFBL所含的主要成分芦丁和槲皮素有关。据报道 , 槲皮素
对 12-脂氧合酶的活性有很强的抑制作用 , 可影响花生四烯
酸的代谢过程。芦丁 、槲皮素镇痛机制还与钙离子拮抗有
关[ 7] 。笔者前期研究发现 TFBL 具有清除自由基 ,抗脂质过
氧化作用[ 8] ,可能也参与抗炎作用 , 有待深入研究。荞麦叶
资源丰富 ,其提取的 TFBL几乎无毒 , 值得进一步开发利用。
参考文献:
[ 1] 李裕 ,刘有智 ,霍红.苦荞麦中提取芦丁的工艺研究[ J] .华北工学
院学报, 2002 , 23(2):130.
[ 2] 朱丽莎 ,韩淑英 ,吕华, 等.荞麦种子提取物对糖尿病小鼠的降血
糖作用[ J] .中成药 , 2002 , 24(4):307.
[ 3] 张连元 ,杨林.生理科学实验教程[ M] .北京:人民军医出版社 ,
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[ 4] 李仪奎.中药药理实验方法学[ M] .上海:上海科学技术出版社 ,
1989.300-304.
[ 5] 韩淑英 ,吕华 ,朱丽莎, 等.荞麦种子总黄酮降血脂血糖及抗脂质
过氧化作用的研究[ J] .中国药理学通报 ,2001 , 17(6):694.
[ 6] 江苏新医学院.中药大辞典[ M] .上海:上海人民出版社 , 1977.
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[ 7] 龙金江,杨韬.芦丁的研究概况及展望[ J] .中国中医药信息杂志 ,
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[ 8] 韩淑英 ,朱丽莎 ,刘淑梅 ,等.荞麦叶总黄酮调血脂及抗脂质过氧
化作用[ J] .中国煤炭工业医学杂志 , 2002, 5(7):711.
编辑:季春来
收稿日期:2004-03-05
Abstract:
  The paper studied the ant ianalgesic and anti-inf lammatory ef-
fect s of the total f lavones f rom buckw heat leaf.To observe the an-
tianalgesic effect of total flavones , w e irritated the mice w ith heat
and chemical reagents;t o observe the anti-inflammatory ef fect , w e
made several inflammatory models , such as ear edema induced by
Xylene , elevat ion of capillary permeability by acet ic acid and granu-
lomatous inf lammat ion by filled cotton-w ool in mice body.Results:
Gast ric perfusion of total f lavones at the dosage of 0.15g/ kg -1·
d-1 or 0.3g/ kg -1·d-1 could p rolong the pain thresholds of mice
irriated by heat(P <0.01), and could greatly reduce the turning-
body f requency of mice w hose peritoneums w ere i rrit ated by acet ic
acid(P<0.01);compared w ith the cont rol group , total flavones
could obviously decrease evolut ion of granulation , low er elevation of
capi llary permeability , and inhibi t ear edema;the inhibitory rates of
the tw o groups w ere 18.9% and 30.9%, 24.7% and 34.6%,
50.26% and 56.67% respectively.It is proved that the total
f lavones can ef fectively ease pain and inflammation.
Key words:
  Buckw heat;total f lavones;ant ianalgesic;an ti-inflammation
55方药揽胜