全 文 ：青果总黄酮的急性毒性及镇痛作用研究
杨桂林，何 颖，董小娟，胡祥宇，袁叶飞* (泸州医学院，四川泸州 64600)
摘要 ［目的］研究青果总黄酮的急性毒性及镇痛作用。［方法］青果总黄酮以最大浓度及最大给药体积的药液对试验组小鼠灌胃给
药，对照组给予等体积的溶媒，连续观察 7 d;通过小鼠醋酸扭体法和小鼠热板法，观察青果总黄酮对小鼠的镇痛作用。［结果］给药组与
对照组小鼠均未死亡;对照组及给药组小鼠体质量平均增长分别为 28． 0%和 25． 0%，无明显差异(P ＞ 0． 05);未见任何急性毒性反应;
小鼠灌胃青果总黄酮的最大耐受量为 11． 46 g /kg，相当于成人临床日用量的 115倍;青果总黄酮能减少醋酸致小鼠的扭体次数，提高小
鼠热板致痛阈值。［结论］青果总黄酮急性毒性很小，具有良好的镇痛作用。
关键词 青果总黄酮;急性毒性;镇痛作用
中图分类号 R284． 3 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2012)05 －02674 －02
Study on Acute Toxicity and Analgesic Effect of Total Flavonoids from FRUCTUS CANARII
YANG Gui-lin et al (Luzhou Medical College，Luzhou，Sichuan 646000)
Abstract ［Objective］To observe the acute toxicity and analgesic effect of total flavonoids from FRUCTUS CANARII． ［Method］Mice in ex-
perimental medicine group were intragastrically administered total flavonoids from FRUCTUS CANARII，with the thickest concentration and the
largest volume permitted． Mice in control group were administered the equal volume of solvent． The acute toxicity reaction of mice was ob-
served in the successive 7 days． The analgesic effect of total flavonoids from FRUCTUS CANARII was observed by using the writhing assay and
the hot-plate method in mice． ［Result］After 7 days，all mice in the experimental medicine and control groups survived． The weight of mice
in the two groups respectively increased by 28． 0% and 25． 0% (P ＞ 0． 05)，no acute toxicity was observed in both groups． The maximal tol-
erant dose (MTD)of total flavonoids from FRUCTUS CANARII by ig in mice was 11． 46 g /kg，which was about 115 times of adult clinical
daily dose． Total flavonoids from FRUCTUS CANARII reduced the times of writhing induced by intraperitoneal injection of acetic acid in mice，
improved pain threshold in hot-plate． ［Conclusion］ Total flavonoids from FRUCTUS CANARII have little acute toxicity and good analgesic
effect in mice．
Key words Total flavonoids from FRUCTUS CANARII;Acute toxicity;Analgesic effect
基金项目 泸洲市科技局项目《合江青果开发及应用研究》(编号:泸市
科函［2008］23 号)。
作者简介 杨桂林(1986 － ) ，女，云南宣威人，硕士，从事中药化学成分
及中药药理研究，E-mail:197796284@ qq． com。* 通讯作
者，副教授，博士，E-mail:yuan_yefei@ 126． com。
收稿日期 2011-10-24
青果(FRUCTUS CANARII)为橄榄科(Burseraceae)橄榄
属(Canarium)植物橄榄的(Canarium album Raeusch．)的干
燥成熟果实，又名橄榄，为我国常用的一种中药材，被《中国
药典》收载。其性味甘、酸、涩、温、平，无毒，归肺胃 2 经，具
有清热、利咽、祛痰、生津、健脾和解毒等功效，常用于咽喉肿
痛、咳嗽、烦渴和鱼鳖中毒等［1 －2］。青果中含多酚类、三萜
类、黄酮类和香豆素类等化学成分［3］。前期试验首次采用乙
醇加热回流提取及聚酰胺柱色谱分离方法得到了青果总黄
酮;通过比色法测定，总黄酮含量达到 52%(以芦丁计)。目
前，关于青果总黄酮的急性毒性及镇痛作用的研究鲜有报
道。因此，试验对青果总黄酮的急性毒性及其镇痛作用进行
研究，旨在为临床应用青果总黄酮治疗咽喉肿痛等疾病提供
试验依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 研究对象。青果总黄酮，总黄酮含量 52%，自制。
1． 1． 2 试验动物。昆明种小鼠，体重(20 ± 2)g，雌雄各半，
由泸州医学院动物试验中心提供，生产许可证号:SCXK(川)
2008-17，使用许可证号:SCXK(川)2008-065。
1． 1． 3 主要仪器。YLS-6A智能热板仪，购自山东医学科学
院设备站。CP224S 电子天平，由常州诺基仪器有限公司
生产。
1． 1． 4 主要试剂。吐温-80(批号 0809028) ，购自成都金山
化学试剂有限公司;冰醋酸(批号 20100412) ，购自成都市科
龙化工试剂厂;生理盐水(批号 M11011117) ，购自四川科伦
药业股份有限公司;阿司匹林肠溶片(批号 081101) ，购自湖
南新汇制药有限公司。
1． 2 方法
1． 2． 1 溶液的配置。取青果总黄酮，总黄酮含量 52%，临用
时以 5%吐温 － 80 分别配成浓度分别为 143． 2、2． 7、1． 3 和
0． 7 mg /ml的溶液;吐温 － 80 以生理盐水配置成浓度为 5%
的溶液;冰醋酸以生理盐水配制成浓度为 0． 6%的溶液;阿司
匹林肠溶片以浓度 5%吐温-80 配成配成浓度为 1． 3 mg /ml
的溶液。
1． 2． 2 急性毒性试验［4］。取体重(20 ±2)g的 20只小鼠，雌
雄各半，分成 2组，每组 10只，分为给药组和空白组 2 组，自
由摄食饮水。禁食不禁水 16 h后，称重，编号。给药组每次
以青果总黄酮按最大给药浓度(143． 2 mg /ml)和最大给药体
积(40 ml /kg)对小鼠进行灌胃处理，空白组每次以浓度 5%
的吐温-80按 40 ml /kg灌胃。一日内连续 2 次给药，每次间
隔 6 h。给药后立即观察动物反应，包括饮食、活动、排泄、精
神状态等情况，连续观察 7 d，详细记录动物反应情况。
1． 2． 3 镇痛试验。
1． 2． 3． 1 小鼠扭体试验［4 －5］。取 50只雄性小鼠，体重(20 ±
2)g，随机分为 5 组，即浓度 5%吐温 － 80 空白对照组、阿司
匹林阳性组(40 mg /kg)、青果总黄酮高(80 mg /kg)、中(40
mg /kg)和低组(20 mg /kg) ，每组 10 只。给药组每天分别按
高、中、低 3个剂量灌胃青果总黄酮，阳性药组灌胃阿司匹林
责任编辑 石金友 责任校对 李岩安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2012，40(5):2674 － 2675，2678
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2012.05.106
肠溶片(40 mg /kg) ，空白对照组灌胃等容积浓度 5%吐温-
80，每天给药 1次，连续 7 d。末次给药 30 min后，每只小鼠
腹腔注射 0． 2 ml浓度 0． 6%冰醋酸，观察小鼠在 15 min内出
现的扭体次数，以腹部内凹、躯干与后肢伸张、臀部高起为 1
次扭体指标。
1． 2． 3． 2 小鼠热板试验［4 －5］。取 50只雌性小鼠，体重(20 ±
2)g，置于恒温(55 ±0． 5 ℃)的热板上，以舔后足为“疼痛”反
应指标，依次测量各小鼠的痛阈值。取预选合格的小鼠 50
只，重新测痛阈 1 次，将 2 次痛阈的平均值作为该鼠给药前
的痛阈值。选取痛阈值在 5 ～ 30 s 之间的小鼠，随机分为 5
组，浓度 5%吐温 － 80 空白对照组、阿司匹林阳性组(40
mg /kg)、青果总黄酮高(80 mg /kg)、中(40 mg /kg)和低组(20
mg /kg) ，每组 10 只。给药组分别按高、中、低 3 个剂量每天
灌胃青果总黄酮，阳性药组灌胃阿司匹林肠溶片(40
mg /kg) ，空白对照组灌胃等量的浓度 5%吐温 － 80，每天给
药 1次，连续 7 d。末次给药后于 30、60 和 90 min分别测定
各组小鼠的痛阈值，比较各组用药后不同时间平均痛阈值与
给药前痛阈值的差异，判断是否有镇痛作用。
1． 2． 4 统计方法。试验数据用(珋x ± s)表示，采用 spss11． 0
统计软件进行方差分析，若方差不齐，采用秩和检验。
2 结果与分析
2． 1 青果总黄酮急性毒性试验对小鼠体重的影响 小鼠灌
胃给药后，各组小鼠活动正常，动物外观行为、进食、四肢活
动、呼吸及大小便未见异常，亦未出现死亡。由表 1可知，7 d
后各组小鼠体重都明显增加，给药组及吐温 －80空白组体重
增长率分别为28． 0%和25． 0%，与给药前比较有极显著差异
(P ＜0． 01) ;试验前后用药组体重与空白组比较均无明显差
异(P ＞0． 05) ，小鼠对青果总黄酮的最大耐受量为 11． 46
g /kg，约相当于人临床用量的115倍，这充分表明青果总黄
表 1 青果总黄酮急性毒性试验对小鼠体重的影响(珔x ± s)
组别
给药量
g /kg
鼠数
只
体重∥g
始 末
体重增
长率∥%
吐温-80 等容积 10 21． 70 ±2． 16 27． 65 ±2． 75＊＊ 28． 0
给药组 11． 46 10 21． 50 ±1． 65 26． 73 ±1． 39＊＊ 25． 0
注:与给药前比较:＊＊P ＜0． 01。
酮急性毒性很小。
2． 2 扭体法测定青果总黄酮对小鼠的影响 由表 2 可知，
给药组高、中、低 3 个剂量组均能明显延长由于化学刺激而
引起小鼠疼痛扭体的时间，并呈一定的量效关系，与吐温-80
空白组比较，有极显著性差异(P ＜0． 01) ;与阿司匹林组比较
无显著差异(P ＞0． 05)。给药组高、中、低 3个剂量组能明显
减少化学刺激所致的小鼠扭体次数，并呈一定的量效关系，
与吐温 －80空白组比较，有显著或极显著性差异(P ＜ 0． 05
或 P ＜0． 01)。给药组高、中两个剂量组减少化学刺激所致
的小鼠扭体次数，与阿司匹林组比较无显著差异(P ＞ 0． 05) ，
但低剂量组减少化学刺激所致的小鼠扭体次数，与阿司匹林
组比较，有极显著差异(P ＜0． 01)。
2． 3 热板法测定青果总黄酮对小鼠痛阈的影响 由表 3 可
知，与给药前比较，给药组高、中 2 个剂量组能显著提高热刺
激小鼠给药后 30、60和 90 min的痛阈值(P ＜ 0． 05) ;给药组
低剂量对提高热刺激小鼠给药后 30、60 和 90 min 的痛阈值
无显著差异(P ＞ 0． 05)。与吐温 － 80 空白组比较，给药组
高、中 2个剂量组能极显著提高热刺激小鼠给药后 30 和 60
min的痛阈值(P ＜ 0． 01) ，显著提高热刺激小鼠给药后 90
min的痛阈值(P ＜ 0． 05) ;给药组低剂量组对提高热刺激小
鼠给药后 30、60和 90 min的痛阈值无显著差异(P ＞ 0． 05)。
与阿司匹林组比较，给药组高、中 2 个剂量组对提高热刺激
小鼠给药后 30、60 和 90 min 的痛阈值无明显差异(P ＞
0． 05) ;给药组低剂量组对热刺激小鼠 30、60 和 90 min的痛
阈值都较小，2者比较有显著差异(P ＜0． 05)。
表 2 青果总黄酮对醋酸致小鼠扭体反应的影响(珔x ± s)
组别
给药量
mg /kg
鼠数
只
扭体出现
时间∥s
扭体次数
吐温 －80 等容积 10 5． 48 ±0． 71 24． 70 ±6． 15
阿司匹林组 40 10 7． 30 ±0． 69＊＊ 14． 70 ±2． 16＊＊
给药组 80 10 7． 47 ±1． 34＊＊ 14． 00 ±4． 76＊＊
40 10 7． 41 ±0． 70＊＊ 14． 50 ±1． 96*
20 10 6． 85 ±0． 80＊＊ 18． 90 ±3． 98* ##
注:与吐温 － 80 空白组比较:。＊＊P ＜ 0． 01;给药组与阿司匹林组比
较:#P ＜0． 05，##P ＜0． 01。
表 3 青果总黄酮对小鼠痛阈的影响(珔x ± s)
组别
给药量
mg /kg
鼠数
只
给药前
痛阈值∥s
给药后痛阈值∥s
30 min处理 60 min处理 90min处理
吐温 －80 等容积 10 19． 39 ±3． 61 18． 90 ±3． 20 18． 83 ±4． 14 18． 69 ±3． 48
阿司匹林 40 10 20． 21 ±3． 03 23． 18 ±2． 61* # 25． 77 ±2． 36＊＊## 31． 66 ±11． 57* #
给药组 80 10 20． 58 ±2． 45 24． 10 ±3． 30* ## 26． 74 ±4． 20* ## 31． 52 ±14． 69* #
40 10 20． 14 ±2． 17 23． 85 ±4． 71* ## 27． 69 ±8． 52* ## 30． 87 ±14． 14* #
20 10 20． 70 ±3． 27 21． 18 ±5． 31★ 22． 68 ±5． 19★ 23． 93 ±7． 27★
注:与给药前比较:* P ＜0． 05，＊＊P ＜0． 01;与吐温-80对照组比较:#P ＜0． 05，##P ＜0． 01;与阿司匹林组比较，★P ＜0． 05。
3 结论与讨论
急性毒性试验是在 1 d内单次或多次(2或 3次)对动物
给药后，在 7 ～14 d内连续观察动物所产生的毒性反应及死
亡情况。急性毒性试验中当受试药物测不出 LD50时，可以做
1次或 1 d内数次给药的最大给耐受量试验(MTD) ，来考察
动物的急性毒性情况。试验在青果总黄酮测不出 LD50的情
况下，为了评价其毒性，进行了 1 d给药 2次的最大耐受量试
验。结果表明，小鼠完全能耐受，未出现任何毒性反应，小鼠
对青果总黄酮的最大耐受量为 11． 46 g /kg，相当于成人临床
(下转第 2678页)
576240 卷 5 期 杨桂林等 青果总黄酮的急性毒性及镇痛作用研究
图 3 6个不同产地灰毡毛忍冬的红外光谱图谱
图 4 6个不同产地灰毡毛忍冬的红外光谱平均图谱
3 结论与讨论
(1)该试验获得了红腺忍冬与灰毡毛忍冬的红外光谱，
其中吸收峰的相似度值很高;而且，有些吸收峰是特征吸收
峰，可用于广西产地红腺忍冬与灰毡毛忍冬药材的鉴别。由
图 3与图 5可知，两者均含出现亚甲基(－ CH2)的特征吸收
峰 2 925与 2 854 cm －1;羧基或酯键(－ C = O)的特征吸收峰
1 735、1 153和 1 103 cm －1。在 1 735 cm －1峰位红腺忍冬的峰
较高，而灰毡毛忍冬的峰不明显，说明红腺忍冬中所含的量
略高;碳碳双键(－ C = C －)的特征吸收峰 1 633 cm －1，说明
他们具有抗氧化作用，与文献报道一致［6 －7］;亚硝基或芳香
族化合物的特征吸收峰在1 500 ～1 600 cm －1，在该范围内两
者的峰形有明显差别，说明两者成分有所差异;在 1500 ～
600 cm －1指纹区范围两者的峰形有明显差别，1319 cm －1的峰
高差异较为明显，指纹区的差异可用于两者间鉴别;在 921
cm －1处红腺忍冬的峰较灰毡毛忍冬峰为明显，说明红腺忍冬
中所含 － COOH的量比灰毡毛忍冬的要高。
(2)该试验采用平均标志图谱进行比较研究，并运用相
似度进行量化比较，可以消除一些由样品来源差异而对品种
鉴别结果产生影响的因素。相似度研究结果表明，相近地域
同一品种样品间的相似度较高。
(3)红外光谱(Infrared spectra，IR)是指红外线照射到
样品上所测得的吸收光谱。红外光谱是测定样品中所有分
子转动振动的吸收光谱叠加，能够整体体征检测样品中的各
种特性，常用于单一组分的检测。目前越来越多研究人员将
其用于中药材、中药提取物及其制剂的鉴别与质控分析等。
因此，试验将其用于广西产红腺忍冬与灰毡毛忍冬的比较研
究。该试验方法具有简单、快速、用量较小等优点，可为红腺
忍冬和灰毡毛忍冬的鉴别评价提供依据。
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681 －683．
(上接第 2675页)
日用量的 115倍，这充分表明青果总黄酮急性毒性很小。但
急性毒性试验仅 1 次或数次给药，观察时间较短，故还应结
合长期毒性试验的毒性表现及多种检查结果综合分析评价
其毒性。
疼痛是许多疾病的一种常见症状，是由一些强烈的伤害
性刺激通过传入神经，至脊髓通过丘脑而传入大脑皮质所引
起的一种感觉。一般认为在伤害性刺激的作用下组织释放
多种致痛因子，如 H+、K +、组织胺等，刺激痛受体，在游离神
经末梢产生痛觉传入冲动，冲动传至高级中枢引起疼痛。理
论上阻断该过程的任意环节，均可产生镇痛效应［6］。
扭体法和热板法是研究药物镇痛作用较为常用的方法，
简捷可靠。试验采用扭体法和热板法研究青果总黄酮的镇
痛作用。结果表明，青果总黄酮能明显抑制小鼠扭体反应，
能明显延长痛阈值，说明其具有明显的镇痛作用。但青果总
黄酮镇痛机制还需进一步研究。
参考文献
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