全 文 ：1977年 Gruentzing等学者进行了世界上第一例经皮冠
状动脉成形术(PTCA), 开创了介入心脏病学的新纪元 , 成为
冠心病血管重建治疗的重要手段。然而 ,成形术后的再狭窄
率较高 , 影响了其术后的远期疗效。再狭窄的发生会造成不
良后果 [ 1, 2] , 并和死亡率显著相关 , 有 51%的再狭窄的患者
存在不稳定的临床情况 , 包括 15%的 ST抬高的心肌梗死 ,
全球每年有 250 000例再狭窄患者需要给予处理 , 因而再狭
窄又是一个严重的社会经济问题。
血脂高是引起冠心病的主要因素 ,也是引起再狭窄的重
要因素 , Kamishirado[ 3]等发现使用他汀可以降低再狭窄率。
中医认为冠心病和介入后再狭窄和气虚血瘀有显著相关
性 [ 4, 5] , 近年来研究发现痰浊与血脂相关性极大 [ 6] , 因此痰
浊成为介入后再狭窄的重要因素也日益受到重视 [ 7] 。 本研
究正是基于既往的研究 , 对新西兰大白兔腹主动脉内膜剥脱
致血管再狭窄模型进行化痰益气活血中药的干预 ,并与调脂
药进行比较 , 以期为介入后再狭窄的中西医结合治疗提供新
的方法。化痰益气活血方为中医常用协定方 , 以地龙为君 ,
瓜蒌皮 、枳实为臣 ,黄芪为佐 , 红景天为使 ,其方以化痰泄浊
为主要功用 , 佐以益气活血。方中地龙具有化痰利水功能 ,
含有地龙蛋白 , 是一种纤维蛋白溶解酶(地龙酵素), 具有溶
解血栓 、改善微循环等一系列新的作用 , 广泛用于防治心脑
血管疾病。方中瓜蒌皮有清热化痰 、宽中散结作用 , 用于痰
郁 、胸痹。方中枳实主要功效为化痰散痞开痹 , 用于痰滞气
阻 、胸痹结胸 、痰湿内阻等 , 中医广泛用于痰阻气滞。黄芪具
有健脾益气功效 , 现代研究发现黄芪可使冠状血管扩张 , 改
善血液循环。方中红景天有活血化瘀作用 ,现代研究发现红
景天可显著提高机体 SOD(超氧化物歧化酶)的活性 , 清除
自由基 , 抑制 LPO(过氧化脂质)的生成 , 具有抗氧化作用。
既往研究也发现枳实 、黄芪和含有地龙成分的补阳还五汤有
确切的抑制冠脉介入后再狭窄作用 [ 8] 。因此 , 从上述单药成
分的中医功效和现代药理作用的研究来看 ,上述药物的组合
从中医角度看有益气 、活血 、化痰作用 ,从西医药理研究看 ,
上述药物也有扩张冠脉 、清除自由基 、改善微循环以及抑制
血管再狭窄作用。本研究发现中药有提高高密度脂蛋白的
作用 ,而且大剂量效果更好 ,甚至超过了氟伐他汀组 , 差异有
显著性。高密度脂蛋白是对人体有益的 , 可抵消一个引起动
脉粥样硬化的危险因素 ,但现有的调脂药物如他汀药物和贝
特类药物也是以降低胆固醇和低密度脂蛋白 、降低甘油三酯
为主 ,对提高高密度脂蛋白方面效果并不好 , 本研究发现化
痰益气活血方对提高高密度脂蛋白有显著疗效 , 甚至超过了
氟伐他汀的疗效 ,结果很令人鼓舞。提示临床上对于血脂代
谢紊乱患者 ,尤其是高密度脂蛋白低的患者 , 如果联合使用
他汀类药物和本研究采用的方剂 , 可能达到更好的效果。
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绵马贯众中绵马贯众素大孔树脂纯化工艺研究
王海宁 1 , 谢印芝 2 , 樊飞跃1 , 刘培勋 1
(1.中国医学科学院 放射医学研究所 ,天津 300192;2.天津美伦医药集团 ,天津 300400)
收稿日期:2008-01-15
作者简介:王海宁(1985-),男 ,在读硕士 ,从事天然药物化学的研究 ,电话:13820274640, E-mail:hainingmessenger@hotmail.com。
关键词:绵马贯众;绵马贯众素;大孔吸附树脂;分离纯化
中图分类号:R284.2 文献标识码:B 文章编号:1001-1528(2008)10-1539-03
绵马贯众为鳞毛蕨科植物粗茎鳞毛蕨(Dryopteriscras- sirhizomaNakai)的干燥根茎及叶柄残基。具有清热解毒 、驱
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虫 、抗肿瘤 、抗疟 、抗病毒等功效 [ 1] 。临床上用于治疗风热感
冒 , 湿热斑疹 、吐血 、便血及崩漏等疾病 [ 2] 。有文献报道 , 绵
马贯众素为绵马贯众抗疟活性 [ 3 , 4]及抗肿瘤活性 [ 5 , 6]的主要
有效成分。叶利民 [ 7]等从药材中分离得到了绵马贯众素单
体 , 并建立了用 HPLC测定其中绵马贯众素含量的方法。目
前 , 还未见有关于其提取纯化工艺的相关报道。本实验旨在
优选出一种适合分离绵马贯众中绵马贯众素的大孔树脂 , 并
对优选出的大孔树脂分离绵马贯众时的工艺条件和参数进
行研究。
1 仪器 、材料
LC-10Avp高效液相色谱仪(日本岛津), SPD-10Avp紫
外可见光检测器 , N2000色谱工作站;ZD-2型调速多用振荡
器(天津欧诺仪器仪表有限公司);FW100型高速万能粉碎
机(天津市泰斯特仪器有限公司);MP200B型电子天平(上
海精科天平仪器厂);绵马贯众素对照品(四川大学分析测
试中心提供 , 纯度 98%)。绵马贯众(购与河北安国 ,经天津
中医药大学中药鉴定教研室张丽娟副教授鉴定为鳞毛蕨科
植物粗茎鳞毛蕨(DryopteriscrassirhizomaNakai)的根茎。
2 方法与结果
2.1 含量测定方法
2.1.1 色谱条件 [ 7] DiamonsilC18(4.6 mm×150 mm, 5
μm);柱温:35℃;流动相:乙腈-氯仿-异丙醇-0.3%磷酸-
0.1%十二烷基硫酸钠(50∶10∶35∶10∶5);流速:1.0 mL/min;
检测波长:286 nm。 绵马贯众素对照品及样品色谱图见图
1。
A
B
图 1 绵马贯众素对照品(A)及样品(B)HPLC图谱
2.1.2 线性关系的考察 精密称取绵马贯众素对照品适
量 , 用氯仿制成浓度 0.247mg/mL的对照品溶液。分别进样
2、4、 6、8、10μL, 按上述色谱条件测定。以所得绵马贯众素
的峰面积 Y对进样量 X(μg)进行线性回归 , 回归方程为:Y
=1 000 000X+10 093, r=0.999 9。 结果表明 , 绵马贯众素
进样量在 0.494 ～ 2.47 μg范围内线性关系良好。
2.2 绵马贯众素上样液的制备 称取适量绵马贯众 , 粉碎 ,
过 50目筛。加入 20倍量 80%乙醇 , 1 mol/LNaOH溶液调
节 pH值为 7 ～ 8。超声 30 min(超声功率 400W)。过滤 ,滤
液减压浓缩至稠膏 , 10倍量 15%的乙醇超声溶解 , 即得上样
液。
2.3 不同树脂对绵马贯众素的吸附量与解吸率 精确量取
一定体积经预处理的树脂装入磨口塞三角瓶中 , 精确加入上
样液 ,在 25℃于恒温振荡器上中速振摇 3 h之后将树脂滤
出 ,测定滤液中绵马贯众素浓度。将吸附平衡的树脂马上放
入磨口塞三角瓶中 ,精确加入 70%乙醇 ,于 25℃振摇 3 h,然
后再将树脂滤出 ,测定洗脱液中的绵马贯众素浓度。再加入
95%乙醇 ,于 25℃振摇 3 h, 然后再将树脂滤出 , 测定洗脱液
中的绵马贯众素浓度。静态吸附量和解吸率按下述公式计
算。结果(表 1)表明 , DM130型吸附量较大 ,且解吸率较高。
故本实验选用 DM130型树脂 。
Q=(Co-C0)×VA/W;R=(C1 ×V1+C2 ×V2)/[ (Co-Cs)
×V1]
式中:Q为吸附量(mg/g);R为解吸率(%);Co为初始浓度
(mg/L);C0为剩余浓度(mg/L);C1为 70%乙醇洗脱液浓度
(mg/L);V1为 70%乙醇洗脱液体积(L);C2为 95%乙醇洗
脱液浓度(mg/L);V2为 95%乙醇洗脱液体积(L);W为树
脂干重(g)。
表 1 不同树脂对绵马贯众素的吸附量与解吸率
树脂
型号
吸附量
/(mg/g)
70%乙醇
解析率 /%
95%乙醇
解吸率 /%
总解吸
率 /%
AB-8 25.17 13.1 31.0 44.1
YWD07D1 10.04 49.1 22.7 71.8
D72 13.47 73.7 14.3 88.0
D152 13.62 50.8 11.5 62.3
D4020 19.93 27.8 30.5 58.3
NKA-9 13.15 48.8 12.5 61.3
NKA-Ⅱ 8.45 56.1 23.0 79.1
ADS-7 25.29 15.7 11.2 26.9
D101 22.21 20.4 43.9 64.3
DM130 28.65 31.3 40.9 72.2
D312 14.32 20.1 47.1 67.2
2.4 上样液质量浓度考察 各取 30 mL树脂装柱 , 将不同
质量浓度的绵马贯众素溶液分别通过大孔吸附树脂柱 , 进行
动态吸附。检测流出液 ,待流出液绵马贯众素含量达到上样
液 5%时 , 停止上样 , 记录上样量 , 计算绵马贯众素吸附量。
结果见表 2。
由表 2可以看出 , 在低质量浓度范围内 , 随着上样液质
量浓度的增加 ,吸附率显著增加 ,所以吸附操作中 , 在保持上
样液澄清的前提下 ,可选择较高质量浓度的溶液上柱。然而
当绵马贯众素质量浓度超过 0.683mg/mL后 ,溶液逐渐显现
浑浊 ,不宜再增加。故确定上样液质量浓度为 0.683 mg/
mL。
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表 2 上样液质量浓度对吸附量影响
上样液质量浓度 /(mg/mL) 树脂吸附量 /(mg/mL)
0.182 2.912
0.347 4.164
0.515 4.893
0.683 5.464
0.853 5.971
2.5 动态吸附曲线的考察 取 30 mL树脂装柱 , 将 2.4项
中确定的最佳质量浓度的绵马贯众素溶液通过大孔吸附树
脂柱 , 进行动态吸附。每 1BV取样检查绵马贯众素含量 , 绘
制吸附曲线。 结果见图 2。 可以看出 , 当上样量超过 9BV
时 , 流出液中绵马贯众素含量明显增大 , 超过上样液中含量
的 5%。故最大上样量确定为 9BV。
图 2 动态吸附曲线
2.6 不同乙醇浓度对绵马贯众素洗脱率的考察 按照上述
实验确定的最大上样量(270 mL), 将贯众药材提取液通过
已处理的树脂柱 30mL,水洗至流出液基本无色后 ,依次以 5
倍柱体积 10%、 30%、50%、70%乙醇分次洗脱 , 收集各段洗
脱液 , 每 30 mL一份 , 测定其中绵马贯众素的含量 , 结果如图
3所示 ,当乙醇体积分数达到 30%时 , 洗脱率不到 5%, 随着
乙醇体积分数的继续增加 , 洗脱率增加幅度明显增大 , 到
95%时 , 洗脱率超过 80%。因此 ,可以分别用水及 30%乙醇
洗去杂质 , 95%乙醇作为洗脱及回收绵马贯众素。
图 3 乙醇浓度对绵马贯众素洗脱率的考察
2.7 水洗量的考察 用不同柱体积的水洗脱已吸附充分的
树脂柱 30mL,同时测定各部分洗脱液中固形物含量 , 结果
得知 , 5BV水洗脱以后 ,洗出液固形物含量已经很少 ,且洗出
液接近无色 , 所以洗脱用量确定为 5BV。
2.8 30%乙醇洗脱用量的考察 用不同柱体积的 30%乙
醇继续洗脱 2.7项中的树脂柱 , 同时测定各洗脱液中绵马贯
众素含量及固形物重量 ,结果见表 3。
可以看出 , 5BV以后 ,洗出液固形物含量已经很少 , 但绵
马贯众素损失还是挺大 ,所以洗脱用量确定为 5BV。
2.9 95%乙醇洗脱用量的考察 用不同柱体积的 30%乙
表 3 30%乙醇洗脱用量的考察
30%乙醇用量 绵马贯众素含量 /mg/mL 固形物重量 /mg
1BV(0～ 30 mL) 0.027 8 95.3
2BV(30～ 60 mL) 0.038 5 116.4
3BV(60～ 90 mL) 0.064 7 134.7
4BV(90～ 120 mL) 0.043 7 107.8
5BV(120～ 150 mL) 0.048 7 91.9
6BV(150～ 180 mL) 0.038 2 18.5
醇继续洗脱 2.7、2.8项中的树脂柱 , 同时测定各部分洗脱液
中绵马贯众素含量。结果如图 4所示 , 当洗脱剂用量达到
6BV时 ,洗脱液中绵马贯众素含量已经很少 , 可认为树脂上
的绵马贯众素已基本洗脱完全。
图 4 95%乙醇洗脱用量的考察
2.10 精制程度考察 根据上述结果 , 按最佳条件 , 精密吸
取绵马贯众素样品液 240 mL上柱 , 依次用 150mL水及 30%
乙醇洗去杂质 , 150 mL95%乙醇洗脱绵马贯众素。收集
95%乙醇洗脱液 ,平行 3份。测定 150 mL95%乙醇洗脱液
中绵马贯众素量 , 上柱前样品液与 95%乙醇洗脱液分别水
浴蒸干 ,烘干至恒重 , 测定总固形物重量 , 结果见表 4。
表 4 精制程度考察结果
项目 实验 1 实验 2 实验 3 平均值
上柱前药液的总
固形物量 /g 5.09 5.08 5.04 5.07
上柱前药液中绵马
贯众素含量 /% 4.50 4.51 4.55 4.52
95%乙醇洗脱液的
总固形物量 /g 0.67 0.7 0.69 0.687
绵马贯众素
转移率 /% 76.3 80.1 77.9 78.1
95%乙醇洗脱液中绵
马贯众素含量 /% 26.1 26.2 25.9 26.07
精制度 /倍 5.80 5.81 5.69 5.77
3 讨论
3.1 绵马贯众上样液制备时 , 因为绵马贯众素偏于脂溶性 ,
在水中溶解度小 ,高浓度乙醇作溶媒提取率高 , 然而回收乙
醇过程中绵马贯众素易形成沉淀 , 若将沉淀滤去上样会降低
绵马贯众素的转移率 , 损失较大;但大孔树脂绝大部分只用
于水溶性成分的分离纯化 ,采用较高浓度乙醇上样绵马贯众
素吸附量会大大减少。故本工艺采用浓缩至稠膏后再用
15%乙醇溶解的方法 ,既保证了绵马贯众素的转移率 , 又保
证了通过树脂时有较大的吸附量。较好解决了脂溶性成分
用大孔树脂分离纯化的技术问题。
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3.2 树脂的极性(功能基)和空间结构(孔径 、比表面 、孔
容)是影响吸附性能的重要因素。从表 1可见 , 弱极性或非
极性的聚苯乙烯型树脂对绵马贯众素吸附量较大 , 如树脂
DM130、D101等。可能由于绵马贯众素极性较小 , 对上述两
种树脂具有较大亲和力的缘故。另外 ,在某些情况下吸附作
用力强 , 解吸起来就会困难 ,如 ADS-7树脂吸附量大但解吸
率较低 , 不适用于纯化。
3.3 绵马贯众药材中绵马贯众素含量较低 , 富集 、分离 、纯
化有一定困难。本实验应用大孔树脂法 ,纯化前总固型物中
绵马贯众素含量仅约为 4.5%,纯化后约达到 26%, 精制度
约为 5.77, 转移率约为 78%。其实验结果表明 , 大孔树脂吸
附法适用于绵马贯众素的分离 、纯化与富集。
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金莲花分散片的制备工艺研究
韩 笑 , 季淑梅＊
(燕山大学生物医学工程系 ,河北秦皇岛 066004)
收稿日期:2007-11-15
作者简介:韩 笑(1979-),女 ,硕士 ,研究方向:生物制药工程 ,电话:0335-8074715, E-mail:hanxiao 6685@163.com。
＊通讯作者:季淑梅 ,女 ,博士 ,教授 ,电话:0335-8074715, E-mail:jishumei110@yahoo.com.cn。
关键词:金莲花;分散片;正交设计
中图分类号:R944 文献标识码:B 文章编号:1001-1528(2008)10-1542-02
分散片是指遇水能迅速崩解并均匀分散的片剂 ,它是近
年来研究较多的一种速释固体剂型 ,与普通片剂相比 ,其具
有崩解时间短 、分散均匀 、药物溶出迅速 、吸收快 、生物利用
度高 、不良反应小等优点。分散片以其独特的性能近来备受
人们关注 , 开发的品种逐渐增多 , 但有关中药分散片的报道
不多 [ 1] 。
金莲花提取物的有效成分为黄酮类化合物 ,具有清热解
毒 , 滋阴降火 ,养阴清热和消炎灭菌的作用 ,其对急慢性上呼
吸道感染 、咽炎 、喉炎 、扁桃体炎等具有消炎预防和治疗作
用。目前 , 金莲花制剂在临床上应用越来越广泛 , 也取得了
较好的临床效果 , 但现有金莲花制剂中总黄酮含量不高 , 且
常见的金莲花制剂存在很多缺陷 , 如金莲花冲剂含糖 ,口感
差;金莲花片崩解时间多达 20 min、金莲花口服液药物稳定
性差 , 不利于长期保存。我们将金莲花提取物分离纯化 , 使
其总黄酮含量达到了 80%以上 , 然后将其制成金莲花分散
片。
1 仪器与材料
1.1 仪器 予华牌循环水式真空泵(巩义市予华仪器有限
责任公司);W201(B)恒温水浴锅(上海申顺生物科技有限
公司);R201型旋转蒸发仪(上海申顺生物科技有限公司);
ZBS-6G智能崩解试验仪(天津大学无线电厂);TDP-1.5型
单冲压片机(江苏泰州市金泰制药机械有限公司)。
1.2 材料 金莲花总黄酮(自制), 微晶纤维素(MCC), 交
联聚乙烯吡咯烷酮(PVPP), 微粉硅胶 , 硫酸钙(以上均为上
海运宏化工制剂辅料技术有限公司提供)。
2 试验方法
2.1 金莲花提取物的制备方法 取金莲花中药材 500 g,加
10倍量的 60%乙醇 ,回流提取 3次 , 每次 1.5 h。合并提取
液 ,过滤 , 滤液静置 24 h。过滤 , 将滤液减压浓缩 、回收乙醇
至无醇味 ,加入适量蒸馏水 ,静置 24 h,过滤。将滤液浓缩至
相对密度为 1.20 ～ 1.25(70 ～ 80 ℃),放冷至室温 , 缓缓加入
95%的乙醇使其含醇量达 85%, 静置 24 h, 过滤。将滤液减
压浓缩 、回收乙醇至无醇味时 ,经 AB-8大孔树脂柱洗脱 , 先
用水洗去杂质 ,再用 50%乙醇洗脱 , 收集乙醇洗脱液 , 浓缩 、
回收乙醇 ,至药液呈浸膏状 ,经干燥 , 研磨 ,制得金莲花细粉。
2.2 金莲花分散片的处方筛选 分散片的处方筛选中 , 辅
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