全 文 ：量略高 , 故本方法采用了超声提
取 , 超声 提取时 间为 10min ,
20min , 30min 结果以超声处理
30min , 测得含量为最高。本方
法具有简便 、快速 、 准确 、分离
效果好等特点 , 可作为该品种的
含量测定方法 。
(收稿日期:2005年 3月 28日)
同步荧光法测定三月泡叶中总黄酮含量的研究
张仁学　陈熙佳　陈　刚　彭　艳　卓尚振
(张家界市药检所 , 河南　张家界　427000)
摘　要　目的:根据黄酮类化合物能与 Al3+形成稳定的荧光络合物 , 建立了同步荧光法测定三月泡中总黄
酮含量的新方法。方法:用80%乙醇加热回流提取三月泡叶中总黄酮 , 以芦丁为标样 , 选择 Δλ为 40nm , 采用同
步荧光光度扫描测定三月泡叶中总黄酮含量 , 并进行加标回收实验验证方法的准确性。结果:本方法检出限为
1.27×10-9 mol/L , 线性范围在 0 ～ 3.3087×10-5mol/ L之间 , 线性回归方程:y=4971x+2.0895 , 相关系数 R=
0.9989 , 平均回收率 108.7μg/ml , 相对标准差 (RSD)0.26%。本方法操作简便 、 快速 、 准确 , 具有良好的分析
应用前景。
关键词　荧光光度法　总黄酮　三月泡叶　测定
　　三月泡 (Rubus corchorifolius
L.f)又称树莓 、 山莓 、 龙船
泡 、 牛奶泡 、四月泡 、悬钩子〔1〕
等 , 属蔷薇科蔷薇亚科悬钩子属
植物 , 三月泡的根叶入药 , 有活
血散於 、 止血 、解毒之功效〔2〕;
果实入药 , 有益肾的功能;茎叶
煎水可洗疮伤;叶片采食可治疗
腹泻等。黄酮类化合物是三月泡
中活性成分之一 , 具有降血糖 、
降血脂 、 抗心律失常 、抗氧化高
效性与低毒性 、 抗衰老等生理活 图 1　激发及发射光谱
1.激发光谱　2.发射光谱
图 2　Δλ的选择图谱
1.Δλ=10　2.Δλ=20　3.Δλ=30　4.Δλ=50
5.Δλ=60　6.Δλ=70　7.Δλ=40
性〔3〕 , 因此 , 我们从三月泡中提
取分离出总黄酮 , 并测定其含
量 , 以利于对三月泡的开发利
用。
近年来 , 有关总黄酮含量的
检测通常采用紫外分光光度
(UV)法 、 高效液相色谱法〔4〕 。
在实际生产和科研过程中 , 后者
测定精密高度 , 但仪器价格昂
贵 , 常用于黄酮单体的定量分
析 , 前者操作简便 , 成本低 , 广
泛用于植物总黄酮的测定〔5-12〕 。
分光光度 (UV)法的实验原理
是根据黄酮类物质与铝离子形成
稳定的络合物 , 并产生特征吸光
谱而进行测定。为了提高测定的
选择性和灵敏度 , 我们采用了同
步荧光法 , 简化光谱 , 减少瑞利
散射和拉曼散射的干扰 , 使谱峰
变窄〔13-16〕 , 使检测结果清晰 、
238 中国民族民间医药杂志 2005年总第 75期
准确 。
1　材料与设备
RF-5000 型荧光分光光度
计 (日本岛津)、 万分之一电子
天平 、索氏提取器 , 芦丁标准品
(中国药品生物制品检定所), 杜
仲叶 2004年 7月采自吉首大学
张家界校区校园内 , 经 60℃烘
干24 小时 , 粉碎 , 备用 , 其它
试剂均为分析纯 。
2　原理和方法
2.1　原理
紫外分光光度 (UV)法的
原理是根据黄酮类物质与铝离子
形成稳定的络合物 , 并产生特征
吸光谱而进行测定。由于三月泡
叶中天然成分复杂 , 为了减小光
谱的重叠现象 , 提高测定的选择
性和灵敏度 , 我们采用了同步荧
光分析法测定三月泡叶中总黄酮
含量 , 并进行了回收实验 。
2.2　方法
2.2.1　样品工作溶液的制备
称取三月泡粉碎叶样品
500g , 用 80%的乙醇液 5000ml
进行超声波提取 , 提取 20min
后 , 于室温 、 避光 下浸提约
22h。然后分两次进行加热回流
提取 , 将乙醇液倒入离心机中离
心 , 取滤液进行浓缩 , 得浓缩液
750ml。从浓缩液中取出 100ml ,
用石油醚进行多次萃取。萃取液
再次用 95%的乙醇提取 , 使浓
度达到 75%。吸取滤液 0.5ml ,
置于 10ml容量瓶中 , 加入5%的
AlC13 溶液 3ml , pH=4的醋酸-
醋酸钠缓冲液 1ml , 用 60%的乙
醇定容 , 摇匀。
2.2.2　芦丁标准工作溶液的制
备
精密称取芦丁 10.1mg , 用
60%的乙醇溶解 , 定容为 50ml ,
即配成浓度为 0.202mg/ml的标
准溶液 。准确吸取标准溶液 0 ,
0.2 , 0.4 , 0.6 , 0.8 , 1.0ml 分
别置于 10ml容量瓶中 , 加入5%
的AlCl3溶液3ml , pH=4的醋酸
-醋酸钠缓冲液 1ml , 用 60%的
乙醇定容 , 摇匀 , 即配成标准工
作溶液 。
2.3　荧光测定
在激发和发射光谱狭缝均为
3nm , Δλ=40nm的条件下进行同
步荧光扫描 , 测定标准工作溶液
中总黄酮的荧光强度 , 以荧光强
度对相应的浓度绘制标准工作曲
线 , 然后在上述相同的条件下测
定样品中总黄酮的荧光强度 , 再
用回归方程求取含量 。
3　结果与讨论
3.1　荧光化合物的激发及发射
光谱
选择光谱狭缝为 3nm , 对芦
丁标准工作溶液的激发及发射光
谱进行扫描 , 激发及发射光谱见
图 1 , 激发及发谢光谱的峰值分
别在 440nm和 480nm 。
3.2　Δλ的选择
根据总黄酮的激发和发射光
谱峰值 , 分别选择不同 Δλ=10 ,
20 , 30 , 40 , 50 , 60 , 70nm , 测
定芦丁标液的同步荧光光谱 。
Δλ为 40nm时 , 同步荧光峰的荧
光强度最大 。如图 2所示。
3.3　测定条件的选择
3.3.1　三氯化铝的加入量
黄酮类化合物与铝离子可生
成稳定的荧光络合物 , 考察了
A lCl3的用量 , 用5%的A ICI3 溶
液加入 1 ～ 3ml 为宜。本实验选
择 A lCl3的加入量为 3ml。
3.3.2　pH 值的影响
分别取 1ml标准溶液及 1ml
5%的 AlCl3 溶液于 10ml 容量瓶
中 , 再分别加入 1ml pH 值为 2 ,
4 , 6 , 8 , 10 的缓冲溶液 , 用
80%的乙醇定容 。实验表明 , 加
入 pH =6 缓冲溶液时 , 荧光强
度最大。为此 , 本实验选择不加
缓冲溶液 。
3.3.3　溶剂的影响
实验考察了不同浓度的乙醇
溶液对荧光强度的影响。实验表
明 , 80%乙醇溶液荧光强度最大。
3.3.4　静置时间的影响
按实验方法配制的溶液静置
不同的时间测定荧光强度 , 每隔
20min测定 1 次 , 观察溶液的荧
光强度随时间变化情况 。实验结
果表明 , 溶液在静置 40min后荧
光强度变化较小 , 并在 2h 内基
本保持稳定。本实验选择溶液静
置 40min进行荧光测定。
3.4　工作曲线及方法的检出限
实验 结果 表明 , 在 0 ～
3.3087×10-5mol/L 范围内芦丁
具有良好的线性关系 , 其线性回
归方程为 y=4971x +2.0895 , 式
中:y 表示荧光强度 , x 表示芦
丁的 浓 度 。 相 关 系 数 R =
0.9989 , 说明荧光强度与相应的
浓度线性显著相关 。对空白对照
液进行 6次平行测定 , 根据公式
CL=3S/K 计算 , 此方法的检出
限为 1.27×10-9mol/L。
3.5　样品测定及回收率实验
按实验方法测定了三月泡中
总黄酮的含量 , 并对样品溶液进
行平行测定 (n=5), 其结果见
表 1。
　　为了验证实验的准确性 , 在
样品溶液中加入芦丁对照品后计
算回收率 , 其结果见表 2 。由表
2可知 , 荧光分析法测定三月泡
中总黄酮含量的平均回收率在
100.8%～ 113.7%之间 , 实验结
果较为准确 , 说明本方法可行。
4　结论
同步荧光光度法测定三月泡
叶总黄酮含量 , 检出限达到
1.27 ×10-9 mol/L。方法灵敏度
高 , 其准确性 、重现性 、线性关
239中国民族民间医药杂志 2005年总第 75期
表 1　三月泡中总黄酮含量及精密度
样品名称 测定含量 (mg/ g) 平均含量 (mg/g) RSD(%)
三月泡叶 1.179 1.180 1.183 1.178 1.185 1.181 0.26
表 2　样品回收率实验结果
样品编号 原含量(μg/ ml)
加入量
(μg/ ml)
测定值
(μg/ml)
回收率
(μg/ml)
1 5.488 4.040 9.608 100.8
2 5.505 4.040 1.085 113.7
3 5.496 4.040 1.064 111.6
系 、 稳定性均能达到科研和生产
的要求 , 操作简便 , 可推广用于
植物中总黄酮的测定 。
三月泡中成分复杂 , 采用同
步荧光分析法测定可避免散射干
涉 , 使结果更清晰 、 准确 。并且
实验中考察了 Δλ、 溶剂 、 pH
值 、 三氯化铝用量 、 放置时间对
荧光强度的影响 , 进一步提高了
测定结果的准确性。
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(收稿日期:2005年 5月 10日)
不同季节苦丁茶叶的微量元素和黄酮含量的测定
林　琼1 , 2　许　旋1 , ＊
(1　华南师范大学化学与环境学院 , 广东　广州　510631;2　佛山职工医学院 , 广东　佛山　511000)
摘　要　为了解不同季节中苦丁茶微量元素和黄酮的含量 , 以调节苦丁茶栽培时施肥措施。分别在 1 , 3 ,
5 , 7 , 9 , 11 月份采摘苦丁茶叶样品 , 用等离子体原子发射光谱法和分光光度法对这些不同季节苦丁茶的微量元
素和黄酮的含量分别进行了测定。得到的结果表明:不同季节的苦丁茶微量元素和黄酮含量存在着一定的差别 ,
这些差别除与苦丁茶的季节选择性吸收与富集元素外 , 还与所施加的含微量元素的肥料有关。
关键词　苦丁茶　大叶冬青　微量元素　黄酮
　　苦丁茶是我国南部及西南部
民间传统的药用植物 , 民间使用
历史悠久 , 饮用苦丁茶具有清热
解毒 、 杀菌消炎 、健胃消积 、 止
咳化痰 、 生津止渴 、 提神醒脑 、
明目益智和抗辐射 、 抗衰老 、 活
血脉 、调节血脂等功效〔1〕 。为了
更好地种植苦丁茶 , 我们曾对苦
丁茶的根 、茎 、叶和种植土壤的
240 中国民族民间医药杂志 2005年总第 75期
广东省科技计划项目 (2003C20405)。
ABSTRACTSOF ORIGINAL ARTICALS
The Chemical Constituents Review of
Decreasing Blood Glucose in Natural Products
Wang Qiu-xia , et al
(The Key Laboratory for Plant
Pathology of Yunnan Province)
ABSTRACT:We review the chemical constituents ,
pharmacology and clinic of decreasing blood glucose in
natural products , they are flavonoids , alkaloids ,
saponins , tannis , polysaccharide , terpenes , polypep-
tide , amino acid , unsaturated fatty acid , S-bond com-
pounds , coumarin and so on.
(Original article on page 190)
Determination of Amino Acids in
Wanglaga-3 Decoction(Ⅲ)
WU Qiu-shi , et al
(Mongolian Medicine College of Inner Mongolia
University for Nationalities)
ABSTRACT:In this paper , the contents of free amino
acids in Wanglaga -3 Decoction(Ⅲ), was analysed.
The total content of the sixteen kinds of free amino acids
was 8.002mg/100mg.The content of GLU is the highest
which was 0.742mg/100mg and MET content was the
lowest which only amout 0.095mg/100mg.There were 7
kinds of essential amino acids whose total content was 3
6.19% in Wanglaga-3 decoction(Ⅲ).
(Original article on page 233)
Determination of Total Flavanoid in
Leaves of Rubus Corchorifolius
L.f by Spectrofluorimetry
ZHANGRen-xue , et al
(Zhangjiajie Institute for Drug Control)
ABSTRACT:Objective:on the basis of reaction of total
flavanoid with Alumimum ion to form synchronous fluores-
cent materal , the new method of determining total fla-
vanoid in leaves of Rubus corchorifolius L.f was estab-
lished.Method:Using 80% ethanol by continuous them-
ral reflux to extract the Rubus corchorifolius L.f leaves ,
taking rutin as standard sample , selecting ■λ=40nm
and scanning by sychronous fluorometry , determing the
content of total flavanoid , then inspecting the accuracy by
recovery test.Result:the detecting limit was 1.27×10
-9mo1/L , the range of linearity with concentration of
rutin was between 0 ～ 3.3087 ×10-5mo1/L , linearity
relationship y =4971x +2.0895 , r =0.9989 , RSD=
0.84%.The method is simple , rapid , accurate and has
bright future on analysis application.
(Original article on page 238)
Determination on Trace Elements
and Flavone of Kuding Tea
Leaves in the Different Seasons
LIN Qiong , et al
(Chemistry and Environment College of South
China Normal University)
ABSTRACT:The contents of trace elements and flavone
of Kuding tea leaves in the different seasons were respec-
tively determined by inductivelycoupled plasma spectrom-
etry and spectrophotometry.The results showed that the
contents of trace elements and flavone of leaves in the dif-
ferent season have some difference.The content of
flavone of leaves in winter season is lowest.It is neces-
sary to adjust the contents of trace elements and flavone of
Kuding tea by paying an attention to different seasons.
(Original article on page 240)
Microscopic Study on Lysimachia
Paridiformis Herb of Tujia Nationality
MI Chang-zhong , et al
(The Medical Research office of TuJia Nationality ,
Medical college of Jishou University)
ABSTRACT:Objective:A microscopic study on Lysi-
machia pardiformi S Franch was carried out , the result
can provide a scientific basis for its development , utiliza-
tion and quality standard.Method:Both the macro and
microscopic characteristics of the drug were examined.
Result:The cross section of the cane shows that its sec-
ondborn structure was more mature and its thin cells con-
tain richly brown and yellow conglomerationg , The cross
section of its rhizome is mainly secondary structure some-
times newborn structure.Conclusion:A microscopic
study of its root , cane , leaf and flower could provide basis
for the identification of the plant.
(Original article on page 244)
248 中国民族民间医药杂志 2005年总第 75期