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China Pharmaceuticals
2014年 10月 5日 第 23卷第 19期
Vol． 23，No． 19，October 5，2014
＊国家自然科学基金，项目编号: 81260659。
肝纤维化是许多肝慢性病共同的病理特征，肝损伤修复过程
中细胞外基质(ECM)激活、合成分泌、降解失控导致 ECM在细胞
间过度沉积，改变了肝组织结构。许多因素参与了这一过程，基质
金属蛋白酶 (MMPs )与基质金属蛋白酶抑制因子 ( TIMPs )是其中
之一。MMPs 可降解所有 ECM 成分，TIMPs 可与 MMPs 结合形成
复合物、抑制降解活性，二者调节失衡不能有效降解 ECM，是肝
纤维化的病理基础之一。调节 MMPs与 TIMPs表达水平是防治肝
纤维化与其他纤维化疾病的有效途径 [1 ]。本试验中通过 CCl4诱导
致大鼠肝纤维化，观察蒙古山萝卜酸对肝纤维化过程中肝组织基
质金属蛋白酶 － 1(MMP － 1)、基质金属蛋白酶抑制因子 － 1
(TIMP － 1)蛋白的表达及其变化特点和趋势，从蛋白质表达水平
进一步探讨蒙古山萝卜酸在肝纤维化过程中的作用和意义。
1 材料与方法
1．1 动物、试药与仪器
Wistar 大鼠，50 只，雌雄各半，3 周龄，体重 100 ～ 120 g，由内
蒙古大学动物中心提供，在室温 20 ～ 24 ℃、相对湿度 70%环境
下饲养，普通饲料和自由饮水。蒙古山萝卜酸(浅黄色，水溶)由课
题组提供; 秋水仙碱片(西双版纳药业有限责任公司，批号为
120707);MMP － 1 和 TIMP － 1 试剂盒均购于南京建成生物技术
有限公司;CCl4、花生油 (市售 )。DG3022 型酶联免疫检测仪(中国
人民解放军第四军医大学)。
1．2 试验方法
将 50只大鼠置自由饮水的环境中适应性喂养 1周，记录体重。
将大鼠分为对照组、模型组、阳性对照组(秋水仙碱 1． 5 mg / kg)
和试验药物高剂量组、低剂量组(蒙古山萝卜酸 240 mg / kg 及
30 mg / kg )，每组 10 只。除对照组外，其余大鼠于皮下注射含
25% CCl4 的花生油 1 mL / kg，每隔 4 d注射 1次，共计 30 次。所有
大鼠在整个试验期间均喂标准食料，自由饮水。第 4 次注射后开
始灌胃给药阳性对照药、高剂量和低剂量蒙古山萝卜酸，1次 /日。
第 30 次注射后，给药结束后，动物禁食 12 h，麻醉，腹主动脉放血
蒙古山萝卜酸对实验性肝纤维化大鼠血清基质金属蛋白
酶 －1及其抑制因子表达水平的影响＊
杨宏昕 1，董珉翔 2，米裕青 3，白音夫 3
(1． 内蒙古自治区人民医院，内蒙古 呼和浩特 010017; 2． 内蒙古自治区医科大学，内蒙古 呼和浩特 010110;
3． 内蒙古自治区中医药研究所，内蒙古 呼和浩特 010020)
摘要:目的 探讨蒙古山萝卜酸对肝纤维化大鼠血清基质金属蛋白酶原 － 1(MMP － 1)与基质金属蛋白酶抑制因子( TIMP － 1)表达水平
的影响。方法 将 50 只大鼠 (雌雄各半 )分为对照组、模型组、阳性对照组(秋水仙碱 1． 5 mg / kg)以及试验药物高剂量组、低剂量组(蒙
古山萝卜酸 240 mg / kg和 30 mg / kg) ，每组 10 只。除对照组外，皮下注射给药，含 25% CCl4 的花生油 1 mL / kg，每隔 4 d注射 1 次，共计
30次。第 4 次注射后，阳性对照组及试验药物高、低剂量组开始灌胃给药，1 次 / d。分次与 30 次注射后，麻醉剖腹，腹主动脉采血，分离
血清，ELISA法测定。结果 对照组血清 MMP － 1 及 TIMP － 1 有少量表达;模型组 MMP － 1 表达水平明显降低，TIMP － 1 表达水平显著
升高 ( P ＜ 0． 05 ) ;阳性药对照组 MMP － 1 没有明显改变，TIMP － 1表达水平显著降低 ( P ＜ 0． 05 ) ;试验药物高剂量组 MMP － 1 表达水平
明显上升、TIMP － 1 表达水平显著降低 ( P ＜ 0． 05 ) ;试验药物低剂量组 MMP － 1 及 TIMP － 1 无明显变化。结论 蒙古山萝卜酸参与大鼠
抗肝纤维化 MMP － 1 / TIMP － 1表达水平失衡的调节作用，是防治肝纤维化作用机理之一。
关键词:肝纤维化;免疫组化;基质金属蛋白酶 － 1;基质金属蛋白酶抑制因子 － 1
中图分类号:Ｒ285． 5;Ｒ282． 71 文献标识码:A 文章编号:1006 － 4931 (2014 )19 － 0037 － 02
Effect of Mongolia Scabious Acid on Serum MMP － 1 and TIMP － 1 Expression Levels in
Experimental Liver Fibrosis Ｒats
Yang Hongxin1， Dong Minxiang2， Mi Yuqing3， Bai Yinfu3
( 1． Neimenggu Autonomous Ｒegion People  s Hospital， Huhehaote， Neimenggu， China 010017; 2． Graduate Students， Grade 2011， Neimenggu Medical College， Huhehaote，
Neimenggu， China 010110; 3． Neimenggu Autonomous Ｒegion Ｒesearch Institute of Traditional Chinese Medicine， Huhehaote， Neimenggu， China 010020 )
Abstract:Objective To investigate the effect of Mongolia scabious acid (MSA) on the expression levels of serum matrix metalloproteinas-
es － 1(MMP － 1) and tissue inhibitor of metalloproteinases － 1 (TIMP － 1) in the experimental liver fibrosis rats．Methods 50 rats(male
and female half ) were divided into the control group，model group，positive control group (colchicine 1． 5 mg /kg) and high － and low －
dose groups of tested drug (MSA 240，30 mg /kg)，10 rats in each group，except the control group，25% CCl4 peanut oil1 mL /25 kg was
given by subcutaneous injection，once per 4 d with a total of 30 times． After 4 times of injection，the positive control group，high － and
low － dose groups of test drug began to give the test drug by intragastric administration，once daily． After the injection of 30 times，the
anesthetic laparotomy was performed and blood was collected from rat abdominal aorta for separating serum． Then the ELISA determination
was performed． Ｒesults Serum MMP － 1 and TIMP － 1 in the model group had a small amount of expression，the MMP － 1 expression level
in the model group was obviously decreased and the TIMP － 1 expression was significantly increased compared with the control group( P ＜
0． 05) ; the MMP － 1 expression level in the positive medication control group had no obvious change and the TIMP － 1 level was signifi-
cantly decreased; the MMP － 1 expression level in the high － dose group of test drug was significantly increased obviously and the expres-
sion level of TIMP － 1 was significantly reduced compared with the model group( P ＜ 0． 05) ; the low － dose group of test drug had no ef-
fects on the expression of MMP － 1 and TIMP － 1． Conclusion MSA participates in the anti － liver fibrosis regulating effect in imbalance
of MMP － 1 /TIMP － 1 expression level in rat，which is one of the mechanisms of prevention and treatment of liver fibrosis．
Key words: liver fibrosis; ELISA; MMP － 1; TIMP － 1
·药物研究·
Drug Ｒesearch
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2014年 10月 5日 第 23卷第 19期
Vol． 23，No． 19，October 5，2014
注:与对照组比较，＊ P ＜ 0． 05;与模型组比较，# P ＜ 0． 05。
表 1 各组大鼠血清中 MMP － 1与 TIMP － 1表达水平比较( n = 10，X ± s，OD )
组别
对照组
模型组
阳性药组
高剂量组
低剂量组
MMP － 1
0． 081 ± 0． 013
0． 046 ± 0． 0071＊
0． 098 ± 0． 012
0． 115 ± 0． 032#
0． 053 ± 0． 02
TIMP － 1
0． 035 ± 0． 0051
0． 104 ± 0． 021＊
0． 057 ± 0． 008#
0． 060 ± 0． 009#
0． 084 ± 0． 013
MMP － 1 / TIMP － 1
2． 31
0． 44
1． 72
1． 92
0． 63
处死，分离血清。按试 MMP － 1 及 TIMP － 1 试剂盒说明书操作，
ELISA法测定光密度(OD)。
1．3 统计学处理
采用 SPSS11． 0 软件进行统计学处理。数据以(X ± s)表示，
组内比较采用 t检验。P ＜ 0． 05为差异有统计学意义。
2 结果
结果见表 1。对照组 MMP － 1 与 TIMP － 1 表达水平较低，
MMP － 1 较 TIMP － 1 有较高的表达; 与对照组比较，模型组
TIMP －1表达水平显著升高，MMP －1表达水平显著降低( P＜0． 05);
与模型组比较，阳性药组 TIMP － 1 明显降低、MMP － 1 有升高趋
势 ( P ＞ 0． 05)，高剂量组 MMP － 1 明显升高、TIMP － 1 明显降低
( P ＜ 0． 05 )，低剂量组 MMP － 1 升高与 TIMP － 1 降低均不显著
( P ＞ 0． 05)。高剂量组 MMP － 1 表达水平比模型组增加 1． 5 倍，
接近对照组水平;TIMP － 1 表达水平则降低 0． 73 倍。试验表明，
高剂量试验药物可显著增加 MMP － 1、降低 TIMP － 1 的表达水
平，低剂量试验药对 MMP － 1 与 TIMP － 2 均无显著作用。
3 讨论
转化生长因子 β1 ( TGF － β1 )能刺激 HSC 合成多种 ECM，同
时又可抑制 ECM的降解。此外，TGF － β1 还通过抑制细胞外基质
降解、抑制肝细胞再生、诱导肝细胞凋亡等途径调节着肝纤维化
的进程。因此，肝纤维化的发生、发展与 TGF － β1 的表达上调密切
相关 [ 2 ]。TGF － β1 的突出作用是促进胶原与基质的合成，同时抑
制其降解;还可增加纤维连接蛋白( FN )及蛋白多糖 ( PG )的合成，
并促进 FN 和胶原在 ECM 中的沉积，通过促进组织抑制因子如
MMPs与 α2 －巨球蛋白等前纤维蛋白溶酶抑制物的分泌，减少胶
原的降解 [ 3 ]。此前的研究显示 [4 ]，蒙古山萝卜酸可明显减轻大鼠
肝纤维化程度及胶原纤维增生程度，明显减少肝组织中 TGF － β1
的含量(P ＜ 0． 05)，抑制 TGF － β1的表达。
本试验还发现 ，模型组中，MMP － 1 与 TIMP － 1 的表达均呈
负相关(P ＜ 0． 01);高剂量蒙古山萝卜酸组大鼠肝脏TIMP － 1 表
水平较模型组显著降低(P ＜ 0． 05)，MMP － 1 表达较模型组显著
增高(P ＜ 0． 05)。可以推测，MMP － 1 / TIMP － 1 的比值增大从而
激活了 MMP － 1 对基质胶原蛋白的活性，并通过减少 TGF － β1 合
成降低了 TIMP － 1 对 HSC 的活化与增殖，减少胶原合成，促进
ECM 的降解，起到了防治肝纤维化的作用。MMPs / TIMPs 途径是
蒙古山萝卜酸抗肝纤维化作用的主要机理。
作者简介:杨宏昕(1968 －)，女，大学本科，主任药师，研究方
向为临床药学;白音夫，男，主任药师，主要从事民族药物研究，本
文通讯作者，(电子信箱)Yaohua2@ sina． com。
参考文献:
[ 1 ] Ｒoeb B． Mechanism of fibrinolysis in chronic liver injury with speciale
mphasisMMPs and TIMPs [ J ] ． Gastroenterol，2007，45 (1 ) : 25 － 33．
[ 2 ] 王 敏 ． 转化生长因子 － b 在肝纤维化中的作用 [ J ] ． 中国实用医
药，2008，3( 9) : 135 － 136．
[ 3 ] 张 愚，屈文东，柳利民，等 ． TGF － β1 在实验性肝硬化中的免疫组
化研究 [ J ] ． 大理学院学报，2005，4 (1 ) : 49．
[ 4 ] 常 亮，杨宏昕，赵小原，等 ． 蒙古山萝卜酸对大鼠肝损伤纤维化防治
作用的研究 [ J ]． 中国民族医药杂志，2012，18( 2) : 44 － 46．
(收稿日期:2014 － 04 － 10 )
大活络胶囊由红参、白术、乳香、没药、血竭、赤芍、肉桂、两头 尖、麝香、冰片、安息香、沉香、木香、丁香、香附等中药组方，具有
檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨
气相色谱法同时测定大活络胶囊多组分含量
尤立华，杨秉呼，叶 萌，侯 扬，杨燕宁，赵希贤
(北京市东城区药品检验所，北京 100027)
摘要:目的 建立可同时测定大活络胶囊中麝香酮、龙脑、异龙脑、丁香酚、苯甲酸含量的气相色谱 ( GC )法。方法 采用 HP － INNOWax
(30 m × 0． 53 mm，1 μm)毛细管色谱柱分离测定，FID检测器，进样口温度 230 ℃，检测器温度 240 ℃，用氮气作为载气，流速 2． 5 mL /min。
色谱柱采用梯度升温，开始温度 85 ℃，以 5 ℃ /min升温速率升至 185 ℃，以 20 ℃ /min升温速率升至 215 ℃，以 1 ℃ /min升温速率升
至 220 ℃。分流比为 15 ∶ 1，进样量 1 μL，外标法定量。结果 麝香酮、龙脑、异龙脑、丁香酚、苯甲酸在同一色谱条件下获得良好分离，且进
样量在测定范围内呈良好线性关系，回收率符合要求。结论 该方法简便、灵敏、准确，分离度、重复性好，可用大活络胶囊的质量控制。
关键词:大活络胶囊;气相色谱法;含量测定
中图分类号:Ｒ284． 1;Ｒ286． 0 文献标识码:A 文章编号:1006 － 4931 (2014 )19 － 0038 － 03
Simultaneous Determination of Various Components in Dahuoluo Capsule by GC
You Lihua， Yang Binghu， Ye Meng， Hou Yang， Yang Yanning， Zhao Xixian
( Dongcheng District Institute for Drug Control， Beijing， China 100027 )
Abstract: Objective To establish the simultaneous determination method of muscone，borneol， isoborneol， eugenol and benzoic acid in
Dahuoluo Capsule by GC． Methods The GC system consisted of capillary column HP － INNOWax (30 m × 0． 53 mm × 1 μm) ; FID as the
detector． The inlet temperature was 230 ℃ ． The detect temperature was 240 ℃ ． Nitrogen was used as carrying gas (2． 5 mL /min ) ． The
column temperature was programmed from 85 ℃ to 185 ℃ at 5 ℃ /min，then to 215 ℃ at 20 ℃ /min，to 220 ℃ at 1 ℃ /min． The split
ratio was 15 ∶ 1; the injection volume was 1 μL． The external standard method was employed． Ｒesults Muscone， borneol， isoborneol，
eugenol and benzoic acid in Dahuoluo Capsule were separated well under the same chromatographic condition． Muscone，borneol，isobor-
neol， eugenol and benzoic acid showed the good linear relationship in the determination range． The recovery rate conformed to the
requirements． Conclusion This method is simple，sensitive and accurate with good separation and reproducibility．
Key words:Dahuoluo Capsule; GC; content determination
·药物鉴定·
Drug Identification