全 文 ：三叶青对迟发型变态反应的影响
倪荷芳1＊ ,夏卫军2 　(1南京中医药大学科技处;2南京中医药大学第一临床医学院 ,江苏 南京　210046)
摘要:目的　观察三叶青对迟发型变态反应的影响。方法　以 2 , 4 , 6-三硝基氯苯诱导小鼠接触性皮炎及二甲苯诱导耳
肿胀 ,测量诱导相和效应相小鼠的耳廓厚度;以绵羊红细胞诱导小鼠足肿胀 ,测量诱导相和效应相小鼠足肿厚度。结果
　三叶青可抑制 2 , 4 , 6-三硝基氯苯及绵羊红细胞诱导相肿胀反应 ,对二甲苯所致的耳廓肿胀无抑制作用。结论　三叶
青主要作用于 T淋巴细胞的活化 、增殖 、分化及效应细胞形成的过程等 , 而对抗原特异性 T 细胞的效应过程及其以后的
炎症过程影响较小。
关键词:三叶青;迟发型变态反应;抗炎
中图号:R282.710.5　　　文献标识码:A　　　文章编号:1000-5005(2007)04-0241-03
　　三叶青的基源为葡萄科崖爬藤属植物三叶崖
爬藤 Tetrastigmahem sleyanum Dielset Gilg 。三叶青
以块根或全草入药 , 具有清热解毒 、祛风化痰 、活
血止痛的功能 , 用于治疗各种火毒炽盛之内 、外
科疾病之高热惊厥 、肺炎 、哮喘 、肝炎 、风湿 、月经
不调 、咽痛 、瘰疬等症 , 具有很好的疗效。已有报
道指出三叶青提取物有抗病毒作用[ 1]和明显的消
炎镇痛[ 2 ,3]及保肝作用[ 4] 。但其作用机理尚不明
了。本研究从免疫学角度初步探讨其抗炎解毒的
机理 。
1　实验材料
1.1　药品与试剂
三叶青(Radix Tetrastigmae)为葡萄科植物三
叶崖爬藤(Tetrastigmahem sleyanum Dielset Gilg)的
干燥块根。地塞米松磷酸钠注射液(dexametha-
sone , 江苏省江阴制药厂);2 , 4 , 6-三硝基氯苯
(picryl chloride , PCl , Nacalai tesque Inc , Kyoto ,
Japan);橄榄油(olive oil , 上海化学试剂站分装 ,
上海);绵羊红细胞(sheep red blood cell , SRBC , 江
苏省南京江宁卫生防疫站);二甲苯(xylene , 江苏
省南京化学试剂厂);液晶显示螺旋测微器(0.001
mm , Mitutoyo Co., Tokyo , Japan)。
1.2　实验动物
昆明种雌性小鼠 ,体质量 18 ～ 22 g ,由上海斯
莱克实验动物责任有限公司提供 ,生产许可证:
SCXK(沪)2003-0003;南京中医药大学实验动物使
用许可证:SCXK(苏)2002-0053。
2　方法与结果
2.1　方法
2.1.1　2 ,4 ,6-三硝基氯苯诱导的小鼠接触性皮
炎(PCl-CS)[ 5]
小鼠剃去腹毛 ,涂 1% PCl 的无水乙醇溶液
100μL致敏 ,5 d后用 1%PCl的橄榄油溶液 30μL
涂于右耳两面进行攻击 , 18 h后用螺旋测微器测
量左右两耳厚度 ,将两耳厚度差作为 DTH 反应的
强度 。
2.1.2　绵羊红细胞诱导的足肿胀(SRBC-DTH)[ 6]
在无菌的条件下将 SRBC 用生理盐水洗 3
次 ,洗涤完毕后配成 2.5×108/mL 的生理盐水溶
液 ,在小鼠左后足趾皮下注射该溶液 40μL致敏 ,
5 d后在右后足趾皮下注射浓度为 2.5×109/mL
SRBC 的生理盐水溶液 40 μL 进行攻击 , 22 h后用
螺旋测微器测两足趾厚度 ,将厚度差作为 DTH反
应的强度 。
收稿日期:2006-01-09;修稿日期:2007-02-10
基金项目:江苏省中医药局中医药科研项目(H05067)
作者简介:倪荷芳(1952-),女 ,江苏常州人 ,南京中医药大学研究员。 ＊通讯作者:025-85811065
—241—南京中医药大学学报 2007 年 7月第 23 卷第 4期JOURNALOF NANJINGTCMUNIVERSITY Vol.23 No.4 July.2007
DOI :10.14148/j.issn.1672-0482.2007.04.012
2.1.3　小鼠免疫器官重量及脏器指数的测定
小鼠末次给药后 2 h断头处死 ,取脾脏及胸
腺称湿质量 ,以器官的质量量除以小鼠的体质量
作为每种器官的脏器指数 。
2.1.4　二甲苯诱导的耳肿胀[ 6]
连续 6 d给小鼠灌服三叶青的醇提物或肌注
地塞米松 ,最后一次给药后 2 h ,在小鼠右耳涂 30
μL 二甲苯致炎 ,2 h后测两耳的厚度 ,将其厚度差
作为炎症反应的强度 。
2.1.5　统计分析
所有数据用 x ±s表示 ,统计采用方差分析 ,
对方差分析有显著差异者 , 2组之间用 Student s
t-test ,2组以上用 Dunnett s test(q检验法)比较组
间差异。
2.2　结果
2.2.1　三叶青对PCl-CS诱导相和效应相的影响
造小鼠PCl-CS模型 ,从小鼠致敏当天起连续
6 d经口分别给予生药 2 、4 、8 g/kg(诱导相给药),
或者于小鼠攻击后 0 h 、5 h 及 10 h连续 3次经口
给予三叶青生药 2 、4 、8 g/kg(效应相给药),对照
组经口给予蒸馏水 ,阳性对照组肌注地塞米松 10
mg/kg 。三叶青于诱导相给药 ,4及 8 g/kg 组显著
抑制了耳肿胀 ,而各剂量组于效应相给药 ,则无明
显影响。阳性药地塞米松不论诱导相还是效应相
均显著地抑制了耳肿胀。结果见表 1。
2.2.2　三叶青对 PCl-CS 模型小鼠免疫器官质量
的影响
取诱导相给予三叶青生药 2 、4 、8 g/kg PCl-CS
模型小鼠 , 6 d 后测定小鼠脾脏及胸腺的脏器指
数。地塞米松对免疫器官有极显著的抑制作用 ,
特别是胸腺全部萎缩;而三叶青给药组的脾脏及
胸腺指数与对照组相比则无明显差异。结果见表
2。
2.2.3　三叶青对 SRBC-DTH诱导相和效应相的
影响
造小鼠 SRBC-DTH 模型 ,从小鼠致敏当天起
连续 6 d经口给予三叶青生药2 、4 、8 g/kg(诱导相
给药),或者于小鼠攻击后 0 h 、5 h及 10 h连续 3
次经口给予三叶青生药 2 、4 、8 g/kg(效应相给
药),对照组经口给予蒸馏水 ,阳性对照组肌注地
塞米松 10 mg/kg 。结果表明 ,三叶青于诱导相给
药 ,4及 8 g/kg组显著抑制了足肿胀 ,而各剂量组
于效应相给药 ,则无明显影响。阳性药地塞米松
不论诱导相还是效应相均显著地抑制了足肿胀。
结果见表 3。
2.2.4　三叶青对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响
小鼠连续 6 d经口给予三叶青生药 2 、4 、8 g/
kg ,同时设模型组及阳性药地塞米松 10 mg/kg
组 ,末次给药后 2 h 致炎。三叶青对二甲苯诱导
的耳肿胀均无明显影响(P >0.05),阳性药地塞
米松则强烈地抑制了小鼠的耳廓肿胀(P <
0.01)。结果见表4 。
表 1　三叶青对 PCl-CS诱导相和效应相耳肿胀的影响( x±s , n=10)
组别 剂量/ g·kg-1
诱导相
耳肿厚度
×10-3/mm
抑制率
(%)
效应相
耳肿厚度
×10-3/mm
抑制率
(%)
模型组 0 97.3±29.6 0 93.5±30.3 0
三叶青小剂量组 2 77.1±24.5 20.6 85.9±29.2 8.1
三叶青中剂量组 4 66.2±28.2＊ 32.0 84.2±18.1 9.9
三叶青大剂量组 8 52.7±14.3＊＊ 46.3 80.0±21.4 14.4
地塞米松组 0.01 32.4±11.5＊＊ 66.4 20.3±8.2＊＊ 78.3
　　　　　　　注:与空白对照组相比 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01。
表 2　三叶青对 PCl-CS模型小鼠免疫器官质量的影响( x±s , n=10)
组别 剂量/ g·kg-1 质量/mg脾 胸腺
指数/mg·g-1
脾 胸腺
正常组 0 91.5±13.0 119.5±25.5 4.0±0.3 5.3±1.1
模型组 0 82.1±29.1 93.5±12.6 3.8±1.2 4.4±0.4
三叶青小剂量组 2 103.1±14.0 85.5±10.5 4.5±0.6 3.8±0.6
三叶青中剂量组 4 84.7±19.1 94.0±4.1 3.6±0.8 4.2±0.1
三叶青大剂量组 8 81.6±31.0 87.1±13.3 3.6±1.4 3.9±0.7
地塞米松组 0.01 18.5±6.0 34.9±6.4＊＊ 1.1±0.2＊ 2.0±0.2＊＊
　　　　　　　　　注:与模型组相比 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01。
—242— 南京中医药大学学报 2007年 7 月第 23卷第 4 期
表 3　三叶青对 SRBC-DTH 诱导相和效应相的影响( x±s , n=10)
组别 剂量/ g·kg-1
诱导相
足肿厚度
×10-3/mm
抑制率
(%)
效应相
足肿厚度
×10-3/mm
抑制率
(%)
模型组 0 401.7±32.6 0 342.2±17.8 0
三叶青小剂量组 2 248.5±2.6＊＊ 38.1 302.7±31.1 11.5
三叶青中剂量组 4 267.1±0.1＊＊ 33.5 311.7±88.3 8.9
三叶青大剂量组 8 391.8±12.2 2.5 312.0±27.5 8.8
地塞米松组 0.01 162.0±0.7＊＊ 59.7 109.9±0.1＊＊ 67.9
　　　　　　　注:与模型组相比 , ＊P<0.05 , ＊＊P<0.01。
表 4　三叶青对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响( x±s , n=10)
组别 剂量/ g·kg-1 耳肿厚度×10-3/ mm 抑制率(%)
模型组 0 115.5±20.8 0
三叶青小剂量组 2 95.6±37.4 17.2
三叶青中剂量组 4 121.3±47.7 -5.0
三叶青大剂量组 8 93.8±49.9 18.8
地塞米松组 0.01 60.5±24.8＊＊ 47.6
　　　　　　　　　　　注:与模型组相比 , ＊＊P<0.01。
3　讨论
迟发型变态反应(delayed-type hypersensitivity ,
DTH)是一种典型的由辅助性 T 细胞(Th)介导的
细胞免疫反应 ,主要表现为抗原攻击局部出现以
单核细胞及淋巴细胞浸润为主要特征的炎症反
应。它通常可划分为 2个时相:抗原攻击之前称
为诱导相 ,包括 T淋巴细胞的活化 、增殖 、分化 、效
应细胞形成的过程等;抗原攻击之后称为效应相 ,
包括抗原特异性 T细胞向炎症局部移动浸润并产
生多种细胞因子发挥效应功能及其以后的炎症过
程等 。
小鼠接触性皮炎(PCl-CS)是一种典型的 DTH
反应 ,本研究发现 ,三叶青对于 PCl-CS 诱导相给
药 ,三叶青均可显著减轻耳肿胀。阳性药地塞米
松不论是诱导相还是效应相均极显著地抑制了耳
肿胀 ,但与此同时其对免疫器官也显示出很强的
毒性 ,表现为极显著地降低胸腺和脾脏指数 ,并导
致绝大部分动物的胸腺萎缩 ,而三叶青对胸腺和
脾脏指数无明显影响 。PCl-CS是一种半抗原所致
的DTH反应 ,而 SRBC-DTH则是一种颗粒细胞抗
原引起的 DTH 反应 ,我们的结果表明 ,对于 2种
不同原因导致的 DTH 反应 ,三叶青对于诱导相给
药均能显著抑制 。这一结果提示 ,三叶青主要作
用于T 淋巴细胞的活化 、增殖 、分化及效应细胞形
成的过程等 ,而对抗原特异性 T 细胞的效应过程
及其以后的炎症过程影响较小 。
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(编辑:李伟东)
—243—倪荷芳 , 等:三叶青对迟发型变态反应的影响　第 4期