全 文 ：中药新药与临床药理 2011年 11月第 22卷第 6期
fit16 E:\输出 \排版 \中药新药 \2011年 \5期 刘晓星 new16\9-18\AS110800127
收稿日期：2011-07-14
作者简介：钟燕珠，女，副主任中药师，主要从事中药调配及中药材真伪鉴别、品质评价的研究。Email：duduzyz@sohu.com。
基金项目：广州中医药大学科研创新基金课题（08CX85）。
牛大力为豆科植物美丽崖豆藤 Millettia speciosa
Champ.的干燥根，又名大力牛、山莲藕、地藕等，
具有补虚润肺、强筋活络的功效，常用于治疗肺虚
咳嗽、咳血、肾虚腰膝酸痛、遗精、白带、风湿痹
痛、跌打损伤等病症[1]。牛大力在广东、广西地区的
骨科处方中应用尤其广泛，还是壮腰健肾丸、强力
健身胶囊等中成药的原料药，也是岭南地区著名的
药食两用药材，具有广阔的开发应用前景。牛大力
的主要成分为生物碱[2]。为考察牛大力中总生物碱的
含量，本文建立了酸性染料比色法测定牛大力中总
生物碱含量的方法，为牛大力药材质量标准的制定
和进一步开发研究奠定了基础。
1 仪器与试药
1.1 仪器 Agilent 8453E 型紫外分光光度计（美国安
捷伦科技公司）；SG8200HE 型超声清洗仪（上海冠特
超声仪器有限公司）；Sartorius BP211D 型分析天平
（德国赛多利斯公司，1/10万）；PHS-2C 型精密酸度
计。
1.2 试药 盐酸麻黄碱（中国药品生物制品检定所，
批号：171241-201007）。牛大力 （广东康美药业有
限公司，产地广东，批号：100100501，101206951，
110107421， 110605631， 110712171， 110813152），
经广州中医药大学喻良文副教授鉴定为豆科植物美
丽崖豆藤 Millettia speciosa Champ.的干燥根。pH =
酸性染料比色法测定牛大力中总生物碱的含量
钟燕珠 1，麦润萍 2，郭顺群 2（1. 广东省中医院药学部，广州 510120；2. 广州中医药大学中药学院 2007级本科
生，广州 510006）
摘要：目的 建立牛大力总生物碱的测定方法，测定牛大力总生物碱的含量。方法 采用酸性染料比色法测
定，并对线性范围、加样回收率、精密度、专属性、稳定性等项目进行了方法学考察。结果 测定方法线性范
围 8.1～121.5 μg，相关系数为 0.999 8，平均加样回收率为 98.2 %，具有良好的精密度。结论 该含量测定方
法操作简单，灵敏度高，准确性好，重现性好，可用于测定牛大力中总生物碱的含量。
关键词：牛大力；酸性染料比色法；总生物碱
中图分类号：R284.1 文献标志码：A 文章编号：1003-9783（2011）06-0685-03
Determination of Total Alkaloids in Radix Millettia Speciosa by Acid Dye Colorimetry
ZHONG Yanzhu1，MAI Runping2，GUO Shunqun2（1. Department of Pharmacy，Guangdong Provincial Hospital of
Traditional Chinese Medicine，Guangzhou 510120，China；2. Undergraduates of Grade 2007，School of Chinese
Materia Medica，Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510006，China）
Abstract：Objective To establish the determination method of total alkaloids in Radix Millettia Speciosa. Methods
Acid dye colorimetry was applied， and methodological parameters of linear range， average recovery， precision，
specificity and stability were examined. Results The method has a good precision and stability. The linear range of a－
conitine type alkaloids was 8.1~121.5 μg（r=0 ．999 8），and the average recovery was 98.2 ％ . Conclusion The
method is simple，highly sensitive，accurate and reproducible，and it can be used for determination of total alkaloids
in Radix Millettia Speciosa.
Keywords：Radix Millettia Speciosa；Acid dye colorimetry；Total alkaloids
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Traditional Chinese Drug Research ＆ Clinical Pharmacology，2011 November，Vol．22 No．6
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3.6的邻苯二甲酸盐缓冲液，混合磷酸盐缓冲液（pH
值分别为5.20，5.60，6.00，6.40，6.86，7.20，7.60）。
溴甲酚绿溶液：取约 0.1 g溴甲酚绿粉末，置 100 mL
容量瓶中，加入 20 mL 乙醇，振摇使溶解，加蒸馏
水至刻度，摇匀，即得。溴麝香草酚蓝溶液：取约
0.1 g溴麝香草酚蓝粉末，置 100 mL容量瓶中，加入
20 mL乙醇，振摇使溶解，加蒸馏水至刻度，摇匀，
即得。其他试剂均为分析纯。蒸馏水（自制）。
2 方法与结果
2.1 酸性染料比色法条件的选择
2.1.1 对照品溶液的制备 取盐酸麻黄碱对照品约
4.0 mg，精密称定，置 50 mL容量瓶中，加甲醇至刻
度，摇匀，作为对照品储备液；精密吸取对照品储
备液 10.0 mL，移入 100 mL 容量瓶中，加甲醇至刻
度，摇匀，即得对照品溶液，所得对照品溶液浓度
为 8.10 μg/mL。
2.1.2 供试品溶液的制备 取牛大力药材粉末约 1.0
g，精密称定，置 100 mL 磨口三角瓶中，精密加入
提取溶剂（氯仿 ∶ 甲醇 ∶ 氨水 = 15 ∶ 5 ∶ 1）50 mL，称
重，冷浸过夜 12 h，超声 40 min，放至室温，称重，
补足原重量，用定量滤纸过滤，精密吸取续滤液
35.0 mL，挥干溶剂，用 2 % H2SO4溶液 10.0 mL 溶
解残渣，用定量滤纸过滤，用 2 % H2SO4溶液 2.0 mL
洗涤残渣和滤纸，再用 10.0 mL以上的 pH 5.6 的缓冲
液清洗残渣和滤纸，将滤液调 pH值至 5.6，用 pH 5.6
的缓冲溶液定容为 50 mL溶液备用。
2.1.3 测定波长的选择 精密吸取盐酸麻黄碱对照品
溶液 5.0 mL 2 份，挥干甲醇，残渣分别精密加入邻
苯二甲酸氢钾盐酸 pH 3.6缓冲液 5.0 mL和混合磷酸
盐 pH6.8 缓冲液 5.0 mL，再分别精密加入溴甲酚绿
酸性染料溶液和溴麝香草酚蓝酸性染料溶液各 5.0
mL，摇匀，精密加入氯仿 4 mL，振摇 2 min，静置 5
min，分出下层，反复萃取 3次，合并氯仿萃取液，
加入 0.4 g无水硫酸钠脱水，另取 1.0 mL蒸馏水如法
操作后作为空白对照。分别进行 350～550 nm扫描，
结果测得选用溴甲酚绿酸性染料配制的样品溶液最
大吸收波长为 415 nm；选用溴麝香草酚蓝酸性染料
配制的样品溶液最大吸收波长为 413 nm。精密吸取
供试品溶液 1.0 mL 2 份，如法操作，结果与对照品
所测一致。
2.1.4 酸性染料种类和用量的选择 精密吸取盐酸麻
黄碱对照品溶液 5.0 mL 10 份，挥干甲醇，其中 5 份
用 pH3.6缓冲液 5.0 mL溶解残渣，分别精密加入溴
甲酚绿酸性染料溶液 3.0，4.0，4.5，5.0，6.0，7.0
mL；另 5 份分别用 pH6.8 缓冲液 5.0 mL 溶解残渣，
然后分别精密加入溴麝香草酚蓝酸性染料溶液
1.0， 1.5， 2.0， 3.0， 5.0 mL，摇匀，其余步骤按
“2.1.2”项下方法操作，测定溶液分别在“2.1.3”项
结果所得的测定波长测定。结果表明，溴麝香草酚
蓝空白溶液在 413 nm处吸光值较小，而溴甲酚绿空白
溶液在 415 nm的吸光值较大，所以选用溴麝香草酚
蓝酸性染料。同时，溴麝香草酚蓝酸性染料 2.0 mL
用量下，空白溶液吸光值较小，样品溶液吸光值则较
大，所以，用溴麝香草酚蓝酸性染料 2.0 mL作为本
实验酸性染料的用量。精密吸取供试品溶液 1.0 mL
10 份，如法操作，结果与对照品所测一致。
2.1.5 缓冲液 pH值的选择 pH值对盐酸麻黄碱与溴
麝香草酚蓝染料形成络合物的稳定性影响较大，必
须选择最佳的 pH值作为显色条件，分别配成 pH值
为 5.20，5.60，6.00，6.40，6.86，7.20，7.60 的混合
磷酸盐缓冲液。精密吸取盐酸麻黄碱对照品溶液 5.0
mL，其余步骤按“2.1.3”项下方法操作，测定液分
别在 413 nm 测定，结果表明，缓冲液 pH值为 5.60
时，测定液有最大吸光度，所以，实验选用 pH5.60
为显色的 pH值。精密吸取供试品溶液 1.0 mL，如法
操作，结果与对照品所测一致。
2.1.6 缓冲液用量的选择 精密吸取盐酸麻黄碱对照
品溶液 5.0 mL，挥干甲醇，残渣用 pH5.6 缓冲液各
种体积溶解，其余步骤按“2.1.3”项下方法操作，
测定液分别在 413 nm测定，结果表明，缓冲液用量
为 5.0 mL时吸光度最大，所以，实验选用缓冲液用
量为 5.0 mL。精密吸取供试品溶液 1.0 mL，如法操
作，结果与对照品所测一致。
2.1.7 提净实验和氯仿萃取方法的选择 精密吸取盐
酸麻黄碱对照品溶液 5.0 mL，挥干甲醇，残渣用
pH5.6的缓冲液 5.0 mL 溶解，置于分液漏斗中，再
精密加入溴麝香草酚蓝酸性染料溶液 2.0 mL，用
12.0 mL氯仿萃取 3次，每次 4 mL的氯仿萃取样品，
在 413 nm 测定氯仿萃取液吸光度为 0.6544；再用
4.0 mL氯仿萃取样品，第四次氯仿萃取液吸光度仅
为-0.0522，表明用氯仿 4 mL/次，3 次萃取后，样品
生物碱酸性染料离子对基本提取完全。所以，实验
中选用该萃取方法。精密吸取供试品溶液 1.0 mL，
如法操作，经过 3 次萃取后，基本提取完全。
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中药新药与临床药理 2011年 11月第 22卷第 6期
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2.2 酸性染料比色法测定牛大力中总生物碱含量的方
法学考察
2.2.1 精密度试验 精密吸取盐酸麻黄碱对照品溶液
5.0 mL，按“2.1.3”项下方法操作测定，平行测定 6
次，所测得吸收值的 RSD=1.65 %，表明仪器精密度
良好。
2.2.2 稳定性试验 取精密度试验样品液，每隔 30
min测一次吸收值，结果见表 1。测定液在 4 h内吸
收值的 RSD=1.89 %，结果表明测定液在 4 h内稳定
性较好。
表 1 稳定性试验结果
Table 1 Results of stability test
2.2.3 线性关系考察 分别精密吸取盐酸麻黄碱对照
品溶液 1.0，3.0，5.0，10.0，15.0 mL，按“2.1.3”
项下方法操作，测定液分别在 413 nm测定，以盐酸
麻黄碱量为纵坐标，以吸光度值为横坐标作标准曲
线，得回归方程 Y=0.010 4X+0.211 8，r=0.999 8，线
性范围为 8.1～121.5 μg。
2.2.4 重复性试验 取同一批号牛大力药材细粉，按
“2.1.2”项下方法平行制备 6 份供试品，按“2.1.3”
项下方法操作，分别在 413 nm测定，结果平均含量
为 0.27 %，RSD = 1.52 %。
2.2.5 加样回收率试验 取已测定含量的牛大力样品
6 份，每份 0.1 g，精密称定，分别精密加入 81.01
μg/mL的盐酸麻黄碱对照品储备液 2.0 mL，按“2.1.2”
和“2.1.3”项下方法操作，分别在 413 nm测定。得
加样回收率平均值为 98.2 %，RSD=3.50 %。
2.3 样品测定 取不同批号的牛大力药材细粉 6 份，
每份约 1.0 g，精密称定，按 2.1.2 项下方法制备，
取 1 mL 样品制备液置于分液漏斗中，按“2.1.3”
项下方法操作，测定液分别在 413 nm测定，结果见
表 2。
3 讨论
紫外分光光度法、高效液相色谱法等对一种或
几种单体生物碱含量测定灵敏、准确，对总生物碱
含量测定结果不理想。酸性染料比色法应用生物碱
与氢离子结合成的阳离子和某些酸性染料解离的阴
离子定量地结合成有机络合物，并在一定波长处测
定该溶液有色离子对的吸收度，通过吸收度计算出
总生物碱含量，对含生物碱数目多、结构复杂的中
药材或其提取物，所测定的结果较为准确，近年来
应用较多[3]。牛大力生物碱的成分与结构类型尚未见
报道，也未能获得符合含量测定用的牛大力生物碱
对照品。参考相关文献，本文选用廉价、易得的盐
酸麻黄碱作为测定总生物碱的对照品[4]。
本文对测定牛大力总生物碱含量的检测波长、
酸性染料的种类、酸性染料的用量、水相 pH值、缓
冲液用量、萃取次数等实验条件进行了优化筛选。
确定最佳实验条件为：溴麝香草酚蓝为显色的酸性
染料，用量 2.0 mL，检测波长 413 nm，显色的水相
pH 值 5.6，缓冲液用量 5.0 mL，为氯仿萃取 3 次，
每次 4 mL，加入 0.4 g无水硫酸钠脱水。测得供试牛
大力药材总生物碱的含量为 0.272 %。本文建立的方
法操作简便易行、方法可靠、重现性好，可用于测定
牛大力总生物碱含量测定的方法。
参考文献：
[1] 国家中医药管理局《中华本草》编委会． 中华本草（第四册）[M]． 上
海：上海科学技术出版社，1999：571-572．
[2] 广东省食品药品监督管理局． 广东省中药材标准（第一册）[M]． 广
州：广东科技出版社，2004：40-41．
[3] 刘喜纲，刘翠哲，常金花． 应用酸性染料比色法测定总生物碱的
含量[J]． 中国药房，2007，18（11）：875-876．
[4] 徐玲玲，王凌． 酸性染料比色法测定百部养肺膏中总生物碱的含
量[J]． 上海医药，2008，29（7）：326-327．
（编辑：宋威）
测定时间 / h
0
0.5
1
1.5
2
2.5
3
3.5
4
吸光度 A
0.6819
0.6803
0.6731
0.6659
0.6576
0.6724
0.6635
0.6589
0.6417
平均吸光度
0.6661
RSD/%
1.89
样品批号
100100501
101206951
110107421
110605631
110712171
110813152
样品取样量/g
1.0056
1.0052
1.0028
1.0039
1.0047
1.0033
生物碱含量/%
0.2731
0.2686
0.2750
0.2696
0.2752
0.2722
平均生物碱含量/%
0.272
RSD/%
1.00
表 2 样品含量测定结果
Table 2 Results of content determination
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