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HPLC-PAD法测定市售六味地黄丸中熊果酸和齐墩果酸的含量
熊筱娟 , 　邹盛勤 , 　徐　明
(宜春学院生物工程研究所 ,江西省天然药物活性成分研究重点实验室 ,江西 宜春 336000)
收稿日期:2008-05-20
作者简介:熊筱娟(1957-),女 ,教授 ,从事天然药物及保健食品研究与开发 ,电话:0795-3201098。
关键词:六味地黄丸;熊果酸;齐墩果酸;HPLC
摘要:目的:通过测定不同厂家六味地黄丸(熟地黄 、山药 、山莱萸 、泽泻 、等)中熊果酸 、齐墩果酸的含量 , 探讨二者对控
制该药质量的影响。方法:取市售不同厂家的六味地黄丸 , 采用超声提取法提取试样 , 以 HPLC-PAD法测定其产品中熊
果酸 、齐墩果酸含量。色谱柱为 KromasilC18(4.6mm×250mm, 5μm),流动相:甲醇-水-磷酸(88∶12∶0.02),流速:1 mL/
min。结果:熊果酸进样量在 6.462 ～ 0.718μg, 齐墩果酸进样量在 3.132 ～ 0.348 μg时 ,呈良好的线性关系 , 平均加样回
收率分别为 99.73%和 97.59%, RSD分别为 1.5%和 1.7%;4个厂家产品其熊果酸 、齐墩果酸含量之间存在显著差异。
结论:本试验建立的方法简便 , 快速 ,可行。不同厂家的六味地黄丸产品 , 熊果酸 、齐墩果酸含量存在显著差异 , 但熊果
酸 、齐墩果酸两者的含量 ,其高低呈一致性。
中图分类号:R927.2　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1001-1528(2008)12-1789-03
DeterminationofursolicacidandoleanolicacidinLiuweiDihuangPilfrom
diferentmanufacturersbyHPLC-PAD
XIONGXiao-juan, 　ZOUSheng-qin, 　XUMing
(BioengineeringInstituteofYichunUniversity, KeyLaboratoryforResearchonActiveIngredientsinNaturalMedicinesofJiangxiProvince, Yichun336000 , China)
KEYWORDS:LiuweiDihuangPil;ursolicacid;oleanolicacid;HPLC
ABSTRACT:AIM:ToobservethecontentsofursolicacidandoleanolicacidinLiuweiDihuangPil(RadixReh-
manniaepraeparata, RhizomaDioscoreae, FructusCorni, RhizomaAlismatis, etc.)fromdiferentmanufacturersand
exploretheirefectsonqualityofLiuweiDihuangPil.METHODS:UrsolicacidandoleanolicacidinLiuweiDi-
huangPilweredeterminedbyHPLC-PADmethodusingKromasilC18 column(4.6 mm×250 mm, 5μm)aschro-
matographiccolumn, methanol-water-phosphate(88∶12∶0.02)asthemobilephaseattherateof1.0 mL/min.
RESULTS:6.462-0.718μgofursolicacidand3.132-0.348μgofoleanolicacidpresentedagoodlinearrela-
tionship.Theaveragerecovereswere99.73%and97.59%, RSDwere1.5% and1.7%, respectively.Therewere
significantdiferencesinthecontentsofursolicacidandoleanolicacidinLiuweiDihuangPilfromfourdiferent
manufacturers.CONCLUSION:Themethodissimple, rapidandfeasibletosetupdeterminationofursolicacid
andoleanolicacidinLiuweiDihuangPilbyHPLC-PAD.Althoughthecontentsofursolicacidandoleanolicacid
havesignificantdiferencesindiferentmanufactures, theresultsshowgoodconsistencyinthecontentvariationof
thetwoacids.
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　　六味地黄丸由熟地黄 、山药 、山茱萸 、泽泻 、茯
苓 、丹皮六味中药组成 ,为中医滋补肝肾的经典方
剂 ,被 《中国药典》收载 [ 1] 。山茱萸是本方的臣药 ,
含有熊果酸 、齐墩果酸 、山茱萸苷 、苹果酸 、没食子酸
等 [ 2] 。熊果酸具有降脂 、保肝 、抗癌免疫调节等作
用 [ 3] 。齐墩果酸有较强的抑菌 、强心 、利尿和保肝
作用[ 3] 。目前六味地黄丸的现行质量标准采用双
波长扫描法测定山茱萸中熊果酸的含量 ,操作复杂 ,
重复性差。近年亦有采用 HPLC法测定六味地黄丸
中熊果酸含量的报道 [ 3-7] ,但色谱条件各不相同 ,试
药处理繁琐 。本试验对市售不同厂家生产的六味地
黄丸产品 ,采取超声提取法提取样品中的熊果酸和
齐墩果酸 ,以 HPLC-PAD法对两者含量进行检测 ,
旨在探讨熊果酸 、齐墩果酸二者对控制六味地黄丸
质量的关系及影响 ,现将结果报道如下。
1　仪器与试药
1.1　仪器　高效液相色谱仪 (Waters);2996光电
二极管矩阵检测器(PAD);柱温箱:Waters中文色谱
工作站;UPWS-S-I-10T高纯水机(杭州永洁达膜分
离设备厂);超声波清洗器(上海科导超声仪器有限
公司)。
1.2　试药　甲醇(色谱纯 ,上海陆忠试剂厂);乙醇
(分析纯 ,江西同盟试剂厂);水为高纯水;熊果酸对
照品 (中 国 药 品 生 物 制 品 检 定 所 , 批 号:
1107422200314);齐墩果酸对照品(中国药品生物
制品检定所 ,批号:1107092200304);北京同仁堂六
味地黄丸(批号:Z19993068);河南宛西仲景六味地
黄丸(批号:Z41022128);修正六味地黄丸 (批号:
Z22023388);江西药都樟树制药六味地黄丸(批号:
Z19983158)。
2　方法与结果
2.1　检测波长的选择　精密称取熊果酸 、齐墩果酸
标准品适量 ,加甲醇 10 mL溶解 ,于 200 nm～ 350
nm之间扫描 ,结果在 201 nm处有最大吸收 ,因甲醇
在 201nm左右有很强的吸收 ,影响 PAD检测光谱 ,
故选 210 nm为最大吸收 。
2.2　色谱条件　色谱柱:KrommasilC18(4.6 mm×
250mm, 5μm);甲醇-水-磷酸(88∶12∶0.02)为流动
相 ,流速:1 mL/min,柱温:30℃,压力:8 111 kPa,熊
果酸与齐墩果酸分离度为 1.726,符合色谱定量分
析要求;对称因子:熊果酸 1.027,齐墩果酸 1.005。
理论塔板数:熊果酸 11 405,齐墩果酸 11 951。对照
品和样品中熊果酸 、齐墩果酸的色谱图见图 1、2。
图 1　对照品熊果酸 、齐墩果酸的 HPLC色谱图
1.齐墩果酸 2.熊果酸
图 2　六味地黄丸样品的 HPLC色谱图
1.齐墩果酸 2.熊果酸
2.3　线性关系　精密称取熊果酸对照品 3.59 mg,
齐墩果酸对照品 1.74 mg,加甲醇 10 mL溶解 ,制成
熊果酸浓度为 0.359 mg/mL, 齐墩果酸浓度为
0.174mg/mL的对照品溶液 ,分别精密吸取对照品
溶液 2 , 6, 10, 14, 18 μL,分别进样分析 ,按上述色谱
条件测定峰面积 ,以峰面积平均值 (uv.s)为纵坐
标 ,以进样量(μg)为横坐标进行线性回归 ,熊果酸
回归方程为 Y=6.67 ×105X+3.25 ×103 , R=
0.998 48;齐墩果酸回归方程为 Y=8.10×105X+
3.30×103 , R=0.999 0 ,表明当熊果酸进样量在
6.462 ～ 0.718μg,齐墩果酸进样量在 3.132 ～ 0.348
μg时呈良好线性关系 。
2.4　供试品溶液制备　分别称取同仁堂 ,河南宛
西 ,修正药业 ,江西樟树制药六味地黄丸 20 ～ 30粒 ,
研碎 ,各取 2.0g。分别加入 50mL95%乙醇溶解 ,
置超声震荡 60 min,过滤 ,滤液转移至 50 mL量瓶 ,
用 95%乙醇定容至刻度 ,作为供试品溶液 。
2.5　精密度实验　精密吸取熊果酸和齐墩果酸的
对照品混合液 15 μL,重复进样 5次 ,熊果酸峰面积
相对标准偏差(RSD)为 0.2%,齐墩果酸的峰面积
为 0.6%,表明进样方法和仪器精密度良好 。
2.6　重复性实验　精密称取同一批号北京同仁堂
六味地黄丸样品 5份 ,按 2.3项条件制备样品溶液 ,
精密吸取 15 μL,进样分析 ,熊果酸峰面积的 RSD为
1.2%(n=5),齐墩果酸峰面积的 RSD为 0.9%(n
=5),方法重现性良好。
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2.7　加样回收率实验　精密称取已知熊果酸和齐
墩果酸含量的北京同仁堂六味地黄丸样品 ,分别加
入熊果酸和齐墩果酸对照品混合溶液适量 ,按供试
品溶液制备并测定 ,计算回收率 ,熊果酸和齐墩果酸
的平均加样回收率分别为 99.73%(RSD=1.5%)
和 97.59%(RSD=1.7%)。
2.8　样品含量的测定　取供试品在上述色谱条件
下进样 ,按外标法计算熊果酸与齐墩果酸平均含量 ,
结果见表 1。
表 1　 不同厂家六味地黄丸中熊果酸与齐墩果酸
含量比较(n=3)
厂家 熊果酸平均含量 /(mg/g)
RSD
/%
齐墩果酸平均
含量 /(mg/g)
RSD
/%
北京同仁堂 0.418 3 1.2 0.179 1 0.8
修正药业 0.246 7 1.3 0.099 4 1.1
江西樟树制药 0.149 8 1.0 0.082 0 1.7
河南宛西仲景牌 0.043 5 1.7 0.018 8 1.5
3　讨论
3.1　本试验测定六味地黄丸中熊果酸 、齐墩果酸含
量所采用样品制备与文献报道有所不同 [ 6, 7] 。采取
超声提取法提取样品中的熊果酸和齐墩果酸 ,常温
下 60 min即可实现 ,与文献报道的乙醇回流法相
比 ,具有不需加热 ,节省时间 、节省成本 、操作简便的
优点。
3.2　熊果酸与齐墩果酸同属五环三萜类化合物 ,为
同分异构体 ,结构极性相似 ,二者难以分离 。本试验
采用邹盛勤报道的 HPLC-PAD法[ 8] ,可将六味地黄
丸中熊果酸 、齐墩果酸二者有效分离 ,证实了该法简
便可行 。
3.3　本试验所测六味地黄丸样品选自市售 4个不
同厂家的产品。该检测结果表明各样品间熊果酸 、
齐墩果酸含量存在显著性差异。六味地黄丸中熊果
酸 、齐墩果酸主要来自臣药山茱萸 。因此 ,其产品中
二者含量的高低与其原料药材山茱萸所含熊果酸 、
齐墩果酸高低直接有关 。北京同仁堂为保证其六味
地黄丸的质量 , 其山茱萸均选自山茱萸 GAP基
地[ 9] ,保证了药材的优质。本试验测得同仁堂六味
地黄丸产品中熊果酸 、齐墩果酸含量明显高于其他
厂家产品 ,说明选择优质的原料药材是保证其产品
质量的关键。
3.4　从本试验所测六味地黄丸产品中齐墩果酸含
量可见 ,产品中熊果酸含量高 ,齐墩果酸亦高 ,反之
则相反 ,表明两者含量高低呈现一致性 。作者认为 ,
将检测六味地黄丸中齐墩果酸的含量 ,亦作为其产
品质量标准的一项考量指标 ,可值得探讨。
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HPLC测定六味地黄颗粒中马钱苷和丹皮酚含量
张翠英 1 , 　李忠保 2 , 　李振国1 , 　徐金玲 2
(1.河南省食品药品检验所 ,河南 郑州 450003;2.河南中医学院 ,河南 郑州 450003)
收稿日期:2007-09-04
作者简介:张翠英(1972-),女 ,博士 ,主管药师 ,从事药品食品的研究开发 ,电话:0371-63388295, E-mail:zhangcy727@yahoo.com.cn。
关键词:六味地黄颗粒;马钱苷;丹皮酚;HPLC
摘要:目的:建立六味地黄颗粒(熟地黄 ,山茱萸 , 牡丹皮 , 山药 , 等)中马钱苷和丹皮酚的 HPLC含量测定方法。方法:采
用 DIONEXAcclaim色谱柱 , 马钱苷以乙腈-水(15∶85)为流动相 , 检测波长为 236 nm;丹皮酚以甲醇-水(70∶30)为流动
相 , 检测波长为 274nm。结果:马钱苷和丹皮酚的线性范围分别为 2.34 ～ 234 μg/mL(r=0.999 99)、7.07 ～ 141.40 μg/
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