全 文 ：吸光光度法测定荞麦秸中总黄酮
项昭保 , 任绍光＊ , 石轶松 , 唐春红
(重庆大学 农业生物工程技术研究所 , 重庆 400044)
摘　要:乙醚浸泡除杂 ,甲醇索氏抽提 ,以芦丁为对照品 ,用吸光光度法测定了荞麦秸中总黄酮
的含量 。建立了芦丁浓度-吸光度关系的回归方程式 C∧ =0.1397A -0.00256 , r =0.9995。此法操
作简单易行 ,结果稳定可靠。
关键词:吸光光度法;总黄酮;荞麦秸;芦丁标准物质
中图分类号:O657.31　　　文献标识码:A　　　文章编号:1001-4020(2002)09-0436-02
ABSORPTIOPHOTOM ET RIC DETERMINATION OF TOTAL FLAVONES
IN STEMS AND LEAVES OF BUCKWHEAT
XIANG Zhao-bao , REN Shao-guang , SHI Yi-song , TANG Chun-hong
(Research Institute of Agrobiological Engineering and Technology , Chongqing University , Chongqing 400044 , China)
Abstract:I t was reported that flavones in stems and leaves o f buckwheat were determined by absorptiopho-
tometry.The sample w as soaked in ether to remove the co existing impurities.The sample w as then extracted with
methanol in a Soxhlet′s ex tracto r.An aliquo t of the ex tract was taken and reacted with aluminum(Ⅲ)under the specified
experimental condition to fo rm complexes of flavones w ith aluminum(Ⅲ)ion and the absorbance of the ethanol solution
w as measured at 500nm against the reagent blank.Rutin standard was used as standard in the preparation of calibration
curve.The following regression equa tion proved the linearity of the calibration curve:C(g·L-1)=0.1397 A -0.00256
(r=0.9995).I t was found that the content of to tal flavones in buckw heat str aw attained a value as high as 6.16%.
Hence its comprehensive utiliza tion would be very profitable.
Keywords:Absorptiophotometry;To tal flavones;Stems and leaves of buckw heat;Standard reference material of
rutin
　　黄酮类化合物以前主要是指基本母核为 2苯基
色原酮的化合物 ,现在则泛指两个苯环通过中央三
碳链相互联结而成的一系列化合物 。黄酮类化合物
或以与糖结合成甙的形式 ,或以游离甙元的形式广
泛存在于植物界中。文献[ 1]表明 ,此类物质的生理
活性多种多样 ,有降低血管脆性及异常的通透性 、降
血脂 、降血压 、抑制血小板聚集及血栓形成 、抗肝脏
毒 、抗炎 、抗菌 、抗病毒 、解痉等作用 。
荞麦(Fagopy rum esculentum M oench)又名净肠
草 、鹿蹄草 、流注草 、蓼科植物 ,全国各地都有分布和
栽培 ,是一种营养丰富的杂粮 。荞麦秸是荞麦的茎
和叶 ,含有芸香甙 、槲皮素 、荭草素 、异荭草素 、牡荆
素 、肥皂草素 、矢车菊素 、花白甙等黄酮类化合物 。
收稿日期:2001-12-21
＊通讯联系人
虽然荞麦秸中含有如此丰富的黄酮类化合物 ,但有
关其中黄酮类化合物的提取 ,含量测定的方法尚未
见报道。本法对荞麦秸中总黄酮的含量进行了测
定 ,方法简单 、方便 ,结果准确 。
1　试验部分
1.1　仪器与试剂
752紫外分光光度计(上海分析仪器厂)
索氏提取装置(自制)
芦丁标准溶液:0.400g·L-1 ,称取芦丁标样
200.0mg ,用30%乙醇溶解 ,并完全转入 500ml容量
瓶中 ,用 30%乙醇定容 ,摇匀 ,即得。
亚硝酸钠溶液:50g·L-1
硝酸铝溶液:100g·L-1
氢氧化钠溶液:40g·L-1
试剂均为分析纯
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第 38 卷　第 9 期
2002 年 9 月
理化检验-化学分册
PTCA(PART B:CHEMICAL ANALYSIS)
Vol.38　No.9
Sep.2002
1.2　标准曲线的制备[ 2 , 3]
分别取芦丁标准溶液 1 , 2 , 4 , 6 和 8ml于 25ml
容量瓶中 ,用 30%乙醇补充至约 12.5ml ,加入亚硝
酸钠溶液 0.6ml ,摇匀 ,放置 5min ,加入硝酸铝溶液
0.6ml ,摇匀 , 5min 后再加入氢氧化钠溶液 5ml ,混
匀 ,用 30%乙醇稀释至刻度 ,摇匀 ,放置 15min后 ,
在波长 500nm 处测定其吸光度 ,试剂空白为参比 ,
结果表明 ,在 0.016 ～ 0.128g·L-1浓度范围内 ,芦丁
浓度与其吸光度之间呈线性关系 ,用最小二乘法作
线性回归 ,得芦丁浓度(C)与吸光度(A)关系曲线
的回归方程式:C∧(g·L-1)=0.1397A -0.00256 ,相
关系数为 0.9995 。
1.3　样品测定
1.3.1　乙醚浸泡
称取经干燥 、粉碎的荞麦茎 5.0000g 和荞麦叶
2.0000g , 用滤纸包好 , 荞麦茎放入乙醚中浸泡
30min ,取出 ,用于抽提;荞麦叶用乙醚浸泡两次 ,时
间分别为 30和 20min ,取出 ,待抽提。
1.3.2　甲醇抽提
把浸泡后的荞麦秸放入索氏提取器中 , 80℃水
浴加热 ,甲醇抽提 8h ,回收甲醇 ,浓缩后将其完全转
入 100m l容量瓶中 ,用甲醇定容 ,摇匀 ,待测定。
1.3.3　总黄酮含量的测定
分别取上述定容的提取液 1ml两份于 25ml容
量瓶中 ,按 1.2方法操作 ,并按标准曲线计算总黄酮
的含量。
2　结果与讨论
2.1　试验条件的选择
2.1.1　显色稳定性
比色溶液显色后 ,在 4h 内吸光度的变化小于
5%,说明黄酮类化合物与铝盐生成的络合物显色是
稳定的。
2.1.2　试剂用量的选择
所加入的亚硝酸钠 、硝酸铝和氢氧化钠溶液分
别在 0.5 ～ 0.7ml , 0.5 ～ 0.7ml和 4 ～ 6ml时 ,吸光
度基本不变。
2.1.3　去杂试剂的选择
因大多数糖类不干扰测定 ,荞麦秸尤其是荞麦
叶 ,干扰测定的杂质主要为脂溶性物质 ,如叶绿素
等 ,叶绿素等脂溶性物质除得越充分 ,黄酮溶解的越
少 ,说明除杂效果越好 ,比较了石油醚 、乙醚和丙酮
三种常用除脂试剂 ,石油醚除杂效果差 ,丙酮对黄酮
有一定的溶解性 ,只有乙醚除杂效果好 ,并且不溶解
黄酮 。
2.1.4　抽提溶剂的选择
提取黄酮类化合物 ,一般常以水 、乙酸乙酯 、乙
醇或甲醇等为溶剂 ,但对于不同的原料或因成分的
差异 ,提取效果差别很大 。比较了这几种常用溶剂 ,
水提取不完全 ,而且杂质较多;乙酸乙酯虽提出的杂
质少 ,但黄酮提取不完全;乙醇提取完全 ,但杂质很
多;只有甲醇提取完全 ,而且提出的杂质很少。
2.2　干扰试验
在芦丁标准溶液中分别加入 20倍于芦丁含量
的葡萄糖 、蔗糖 、麦芽糖 ,测定结果表明 ,这些组分不
干扰黄酮的比色测定。
2.3　相关系数的显著性检验
无效假设:芦丁浓度与吸光度无相关性。计算
t r 值:tr = r ×[ (n -2)/(1-r2)] 1/2=54.75 ,因
为自由度 d f =n -2=5-2=3 , t 0.01=5.48 , tr >
t 0.01 ,故 p<0.01 ,所以无效假设不成立 ,本法中芦
丁浓度与吸光度有非常显著的相关性 。
2.4　精密度与回收率试验
为检验本法的精密度和准确度 ,分别对荞麦秸
进行了精密度和加标回收率试验 ,结果见表 1 。
表 1　荞麦秸总黄酮含量测定的精密度和
回收率试验(n=5)
样品 测定值 加入量(m/mg)
测定总值 回收率
(%)
RSD
(%)
荞麦叶 123.22 10.0 133.85 106.3 0.97
20.0 141.83 93.1
荞麦茎 39.00 5.0 44.56 111.2 0.46
10.0 48.15 91.5
通过对浸泡溶剂 、抽提溶剂和显色剂用量的选
择 ,确定了测定荞麦秸中总黄酮含量的方法 ,本法操
作简单 、易行 ,结果稳定 、可靠 。通过本法测得荞麦
干叶中黄酮含量高达 6.16%,说明荞麦的综合利用
很有必要 ,大有可为。
参考文献:
[ 1] 　江苏新医学院编.中药大词典[ M ] .上海:上海科学技
术出版社 , 1995.1595～ 1596.
[ 2] 　陈运中.苦荞麦黄酮含量的测定[ J] .食品科学 , 1998 ,
19(3):54.
[ 3] 　元晓梅 , 刘贤贵 , 胡正芝.比色法测定柑桔饮料及桔皮
制剂中总黄酮含量[ J] .食品与发酵工业 , 1996 , 22
(3):13.
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项昭保等:吸光光度法测定荞麦秸中总黄酮