全 文 ：观察也显示有诱导凋亡的趋势。因此 , 可以推断 , 诱导细胞凋
亡可能是 GBEP 对胃癌的抗肿瘤作用机制之一 , bax 基因可能
参与了 GBEP 对凋亡影响的调控机制。有关 GBEP 影响其它癌
基因与抑癌基因的研究 ,尚在进行。
　　致谢:流式细胞术相关实验在中国科学院上海生命科学研究院生物
化学与细胞生物学研究所细胞与分子识别中心孟绿蓉老师和吴直江主
任协助完成。
参考文献
1　许爱华 ,陈华圣 ,褚　澄 ,等.银杏外种皮多糖对人癌细胞株的抑制作
用及与阿霉素的协同效应.中国新药杂志 , 2000;9(11)∶753～ 755
2　翟　范 ,陈华圣.银杏外种皮多糖制剂治疗中晚期癌症 84例.辽宁中
医杂志 , 2002;29(9)∶564
3　许爱华 ,褚云飞 ,陈华圣 ,等.银杏外种皮多糖对胃癌的临床及超微结
构研究.中国新药杂志 , 2002;11(9)∶724～ 726
4　Kerr JF , Wyllin AH , Currie AR.Apoptosis:a basic biological phe-
nomenon wi th w ide-ranging implicat ions in ti ssue kinetics.Br J Cancer ,
1972;26∶239
5　Gary K , Adiana HF ,S cott K , et al.Potent iation of apoptosis by t reatment
with phenomenon wi th the protein kinase C-specific inhibi tor safingol in
Mitomycin t reated gastric cancer cells.J Nat l Cancer Inst , 1995;87(18)∶
1394～ 1398
6　Christopher G , Lester J , Nancy R , et al.Siquence-dependent ant itumor
act ivith of pacli toxel(t axo)and cisplatin in vivo.In t J Cancer , 1995;62(5)∶
599～ 601
7　Tamura A , Yuik.Age dependent reduction of Bcl-2 expression in periph-
eral T cells of lprandgldm utantmice.J Immunol , 1995;155(1)∶499～ 507
8　Qiao Q , Wu JS , Zhang J , Ma QJ , Lai DN.Expression and signif icance
of apoptosis related gene bcl2 , bax in human ? large intest ine adenocarcino-
ma.Shijie Huaren Xiaohua Zazhi 1999;7∶936～ 938
9　Dixon D , Flake GP , Moore AB, He H , Haseman JK , Risinger JI ,
Lancaster JM , Berchuck A , Barrett JC , Robboy SJ.Cell prolif erat ion and
apoptosis in human uterine leiomyomas and myomet ria.Virchow s Arch
2002;441∶53～ 62
10　许爱华 ,贾筱琴 ,陈华圣 ,等.银杏外种皮多糖抑制小鼠肝癌及诱导
肝癌细胞凋亡的研究。中药新药与临床药理 , 2001;12(5)∶753～ 755
Influence of ginkgo biloba exocarp polysaccharides(GBEP)on
apoptosis and expression of inducing apoptosis gene in human gastriccancer SGC-7901 Cell
Xu Aihua , Chen Huasheng , Sun Buchan , Gu Yulan
(Medical co llege of Yangzhou University , Yangzhou　225001)
　　Objective:To study the Influence of ginkgo biloba exocarp poly saccharides(GBEP)on apoptosis and expression of inducing apoptosis
gene in human gastriccancer SGC-7901.Method:Using techniques of cell culture and flow cy tometry in vitro , to measured the rate of
apoptosis and positive sign of bax gene protein of human gastriccancer SGC-7901 cells.Result:GBEP(40 ～ 160μg/ ml , 24h～ 72h)may in-
duce apoptosis and exhibited dose and time effect on SGC-7901 cells.At the same time , GBEP (40 ～ 160μg/ ml , 48h)also increased the
expression of bax gene of SGC-7901 cells.Conclusion:One of antitumo r action mechanisms o f GBEP might be it induced tumor cells
apoptosis .one of action mechanisms of GBEP that induced tumor cells to apoptosis has some rela tionship with the changes of the bax gene.
Key world　ginkgo;poly saccharides;apoptosis;bax gene
木姜子根多糖抗肿瘤作用研究
倪　峰　周春权　邱颂平1 　林静瑜　姚　欣
(福建省中医药研究院　福州　350003 , 1 　福建中医学院方药教研室)
　　提　要　目的:研究木姜子根多糖(MDT)的在体抑瘤活性及体外对瘤细胞的直接作用。方法:用 U14细胞观察体内抗肿瘤作
用;用台盼蓝排染法及 M TT 法观察 MDT 及其含药血清对 HL60、ECV-304、PC-3 和 Lncap 细胞生长的直接影响。结果:MDT 能抑
制肿瘤生长 ,并显著增强 CTX 的抗癌作用;MDT 对 H L60 细胞有直接的阻抑作用 , 但含药血清的效果不显著。 结论:MDT 有一定
的抗肿瘤效果。
　　关键词　木姜子根多糖;抗肿瘤;含药血清
　　生物反应调节剂(BRM)已成为肿瘤治疗的重要模式 ,中药
多糖是一类重要的 BRM 。木姜子(Litsea pungens Hemsl)根是
福建民间的习用滋补药膳 , 多糖是主要有效部位。木姜子根多
糖有较强的免疫调节作用 ,能显著改善免疫功能低下模型小鼠
的免疫指标[ 1] ,对 S180实体瘤小鼠有一定的抑瘤作用[ 2] 。本文
考察木姜子根多糖的在体抑瘤实验及体外抗癌细胞作用。
1　材料与方法
1.1　试验药物　木姜子根多糖(MDT):木姜子根原药材购自
福州药材站 ,经鉴定为正品 , 本实验室按常规方法提取总多糖 ,
经硫酸-苯酚法测定其含量为 85%, 临用时用生理盐水配制。
1.2　动物　昆明种小鼠 ,雌性 ,体重 19 ～ 22g , 福建医科大学实
13中药药理与临床 2003;19(3)
DOI :10.13412/j.cnki .zyy l.2003.03.008
验动物中心提供 ,合格证号:医动字第 23-006 号。
1.3　试剂　环磷酰胺(CTX):上海华联制药有限公司 , 批号
001005;小牛和胎牛血清:Hyclone 产品;M TT:Amerison 产品;
RPMI1640:Gibco产品。
1.4　细胞及瘤株　人脐静脉内皮细胞株(ECV-304), 宫颈癌
U14瘤株 ,人早幼粒细胞白血病(HL60)细胞 ,人前列腺癌细胞株
PC-3 和 Lncap均由福建医科大学药理研究室提供。
1.5　方法
1.5.1　在体抑瘤实验　小鼠 70 只随机分组。 取 U14瘤块与
PBS 按 1:10比例(W/W)磨成匀浆 , 每只小鼠腋下皮下注射 0.
2ml。 CTX及多糖+CTX于第 1 天和第 3 天 ig CTX 20mg/kg;
其他各给药组均按相应剂量每日腹腔注射共 10 天 , 末次给药
4h 后处死小鼠 , 剥取瘤块称重 ,计算抑瘤率。
1.5.2　含药血清制备　M DT 150mg/ kg 每日 ip 0.1ml/ 10g , 连
续 10 天;对照组给予同体积生理盐水腹腔注射。两组动物在给
药的第 1 天和第 3天均 ig CTX 20mg/ kg。最后一次给药后 4h ,
摘眼球取血 ,无菌分离血清 , 经 56℃30 分钟灭活处理后 , -20℃
保存备用。
1.5.3　台盼蓝排染法　(1)HL60 细胞用含 10%小牛血清的
1640 培养液于 37℃ 5%CO2 条件下培养 , 每 2 天传代 1 次 。实
验时接种于 96 孔培养板 , 每孔含 2×104 细胞。 同时加多糖作
用 48 小时后 , 加等量的台盼蓝染液 , 计数台盼蓝拒染的活细胞
数。(2)含药血清实验:H L60 细胞的培养 , 传代同(1)法。分别
取 20μl的对照血清和含药血清加入 180μl的培养液中 , 使含药
血清浓度为 10%。与 HL60细胞作用 48h 后 , 加等量的台盼蓝
染液 ,计数拒染的活细胞数。
1.5.4　MTT 法　(1)人脐静脉内皮细胞 ECV-304 用含 10%胎
牛血清的 1640 培养液培养(37℃ 5%CO 2 条件下), 每 2 天传代
1次。试验时用含 2%胎牛血清的 1640 培养液稀释 ,胰酶消化 ,
离心沉淀的细胞 , 接种于 96 孔培养板 24 小时后 , 加 10%含药
血清或对照血清作用 48 小时。 在终止药物作用前 4 小时加
MTT50μl(MTT 用 D-Hanks 溶解成 1mg/ ml)。继续培养 4 小
时 ,吸去上清 , 加 200μl DMSO 震荡 5 分钟 , 于酶标仪在 510nm
处测光密度。(2)人前列腺癌细胞 PC-3 和 Lncap 用含 10%胎
牛血清的 F-12 培养液培养 ,其他方法同(1)。
2　结果
2.1 　木姜子根多糖对宫颈癌 U 14细胞生长的影响　多糖
150mg/ kg 的抑瘤效果最好 , 并能显著增强环磷酰胺的抗癌作
用 ,结果见表 1。
　　表 1　 MDT 对 U 14细胞生长的影响( x ±s )
组别 剂量(mg/ kg)
鼠数
(只)
平均体重(g)
开始 结束
平均瘤重
(g)
抑瘤率
(%)
对照 10 20.1±1.0 27.3±2.2 1.57±0.47
CTX 20 10 20.2±1.0 26.5±2.4 0.69±0.22＊＊ 56
MDT 100 10 20.1±1.0 28.0±2.0 1.45±0.47 8
MDT 150 10 20.5±1.2 25.8±1.3 0.96±0.32 38.8
MDT 200 10 20.3±1.0 26.9±2.0 1.37±0.33 12.7
MDT+CTX 150+20 10 20.1±1.0 25.7±1.8 0.44±0.24■＊＊ 72
MDT+CTX 200+20 10 20.1±1.0 24.3±1.2 0.81±0.17＊＊ 48.4
　　与对照组比较 ＊＊P<0.01;与 CTX组比较 ■P<0.05
2.2　木姜子根多糖对 HL60 细胞生长的直接作用　用台盼蓝
排染法观察 MDT 对癌细胞生长的抑制作用 , 随着药物浓度的
增加 ,抑制强度也加大 , 结果见表 2。
　　表 2　MDT 对 HL60细胞生长的抑制作用( x ±s )
药物 剂量(μg/ml) 活细胞数×104 抑制率(%)
MDT 200 12.0±2.0 77.9
100 18.3±2.5 66.3
50 51.0±4.6 6.1
25 56.7±5.5
0 54.3±6.0
2.3　木姜子根多糖含药血清对 HL60 细胞生长的作用　用台
盼蓝排染法观察MDT 含药血清对 HL60 细胞生长的影响 , 含药
血清对癌细胞的抑制率略高于对照血清 ,结果见表 3。
　　表 3　MDT 含药血清对HL60细胞生长的影响( x ±s )
药物 组别 活细胞数×104 抑制率(%)
MDT 对照血清 81.5±8.9 43.0
含药血清 71.8±12 49.8
对照 无血清　 143.0±6.0
2.4　木姜子根多糖的含药血清对 ECV-304 、PC-3 和 Lncap 细
胞生长的影响　用 M TT 法观察 MDT 的含药血清对三种细胞
生长的直接作用 , 结果含药血清与对照血清的作用差别不大 ,
结果见表 4。
　　表 4　MDT 的含药血清对 ECV-304 、PC-3和 Lncap生长的影响( x
±s )
细胞株 组别 光密度
ECV-304 对照血清 0.150±0.01
含药血清 0.175±0.02
对照 无血清　 0.340±0.02
PC-3 对照血清 0.145±0.01
含药血清 0.142±0.03
对照 无血清　 0.310±0.01
Lncap 对照血清 0.250±0.02
含药血清 0.200±0.03
对照 无血清　 0.440±0.033
3　讨论
　　在体抑瘤实验表明木姜子根多糖对肿瘤有一定的抑制作
用 ,能显著增强环磷酰胺的抗癌作用 ,然而 MDT 的作用没有明
显的量效关系 ,这与文献报道的其它多糖的免疫调节作用有最
适剂量的现象十分相似[ 3] 。
　　本文 MDT 含药血清的体外实验效果不显著可能与多种因
素有关。(1)本实验采用 56℃30min 灭活补体的方法处理所采
14 中药药理与临床 2003;19(3)
集的血清 ,这种处理方法有可能使具有药理活性的内生性有效
成分如补体 、抗体 、细胞因子 、激素 、酶 、多肽 、蛋白质等有效物质
失活而失去或减少其原有的疗效[ 4] 。(2)MDT 在体内是否以
通过血液起作用而达到抗肿瘤疗效尚需进一步探讨。 据报道 ,
并非所有的中药全部通过血液起作用。 根据药动学在体内分
布有脏器特异性的试验药物 , 其血清药理学方法也许不适
用[ 5] 。(3)血清药理学方法通常以口服给药方式来制备含药血
清 ,但在中药的现代化研究中 , 各种新剂型不断出现 , 为了便于
不同剂型药物的药理研究 ,可以采用注射给药 、皮肤给药 、粘膜
给药和呼吸道给药等不同途径与方法来制备含药血清[ 6] 。 由
于目前市场上所开发的多糖产品大多为注射液 , 故本实验采用
腹腔注射的给药途径来进行血清药理学的研究。 即使是静脉
注射也都存在着药物与血液中诸多成分产生相互作用的可能
性。(4)含药血清的采血时间至今未有一个标准的规范 , 大多数
认为应在 30min～ 6h 之间为妥[ 7] 。刘氏等[ 8]以“李氏 5 号方”
药物血清促进 PC12 细胞增殖等指标 , 探讨了制备含药血清的
采血时间与效应之间的关系。结果显示在药后 24、48 、72h 采血
点均表现为对 PC12 细胞有促生长作用 , 而以 24h 尤为显著。
我们选择末次给药后 4h采血。这一时间是否为有效成分在血
液中的峰值 ,须进一步进行采血时间与效应的动态观察试验而
得知。本文中对照组血清与无血清的体外实验效果相差悬殊 ,
说明荷瘤动物的机体产生了许多对抗肿瘤的活性物质 , 正常机
体具有很强的自我保护机制。
参考文献
1　倪　峰 ,洪华炜 ,翁华春 ,等.木姜子根多糖对小鼠免疫功能的影响
.中药药理与临床 , 2001;17(5)∶15～ 16
2　倪　峰 ,林静瑜 ,周春权 ,等.木姜子根多糖对荷瘤小鼠作用的实验
研究.福建中医学院学报 , 2002;12(2)∶34～ 35
3　刘晓健.植物多糖抗肿瘤作用的研究进展.锦州医学院学报 , 2002;
23(1)∶58
4　吴水生 ,张小如 ,阮时宝.血清药理学研究中含药血清是否需灭活的
探讨.福建中医学院学报 , 2001;11(2)∶45
5　杨彦芳 ,王玉芹.中药复方血清药理学方法规范化探讨.中国中西
医结合杂志 , 2000;20(15)∶280
6　李振光 ,王净净.关于中药血清药理学方法的思考.中国中医药信
息杂志, 2002;9(2)∶5
7　杨　奎 ,周明眉 ,姜远平 ,等.中药血清药理学的方法学研究-反应体
系中含药血清加入量的研究.中药药理与临床 , 1998;14(6)∶43
8　刘国卿 ,李　锐 ,包金凤 ,等.李氏 5号方对神经元的促进增殖和对
烫伤的保护作用.中药药理与临床 , 1999;15(2)∶32
Experimental study on the anti-tumor effect of
polysaccharide from Litsea pungens Hemsl Root(木姜子根多糖)
Ni Feng , Zhou Chunquan , Qiu songping , e t al
(Fujian Institute of TCM&Pharmacy , Fuzhou　350003 , Fujian College of TCM)
　　Objective:To study the activity of anti- tumor o f from Litsea pungens Hemsl Root (木姜子根多糖 , MDT)in vivo and its direct effect
on tumo rous cells in vitro.Methods:The suspension of U 14 cells were inoculated to subaxillary of mice to observ e the antineoplastic effect of
M DT;The exclusion of trypan-blue and M TT methods were used in this test to observe the direct influence of MDT and MDT-bearing
serum on g rowth of HL60 、ECV-304、PC-3 and Lncap cells.Results:The MDT could inhibit the grow th of tumo r and clearly enhance the
effect of anti-cancer of CTX;it has some direct repression on HL60 cells , but the same effect of MDT-bearing serum were not found.Con-
clusion:The MDT has an effect of anti- tumo r.
Key words　Litsea pungens Hemsl Root (木姜子根);Polysaccharide;anti-tumor;drug-bearing serum
茯苓多糖抗炎作用研究
侯安继　彭施萍　项　荣
(武汉大学中南医院　武汉　430071)
　　提　要　目的:研究茯苓多糖的抗炎作用。方法:用二甲苯所致小鼠急性炎症和无菌棉球所致大鼠慢性炎症模型进行试验。
结果:茯苓多糖对棉球所致大鼠皮下肉芽肿形成有抑制作用 ,同时小剂量下也能抑制二甲苯所致的小鼠耳肿。结论:茯苓多糖具有
抑制急慢性炎症反应作用。
　　关键词　茯苓多糖;抗炎
　　茯苓多糖是从茯苓 Poria cocos (Schw.)中提取的有效成
分 ,Hamuro等曾证实其具有增强免疫和抗肿瘤作用[ 1] , 吕苏成
等发现茯苓多糖能增高老年患者 T 3 、T 4 和 T 4/ T3 比值[ 2] 。我
们进行了抗炎作用研究 ,现报告如下。
15中药药理与临床 2003;19(3)