全 文 ：HPLC法测定肾茶中熊果酸与齐墩果酸
蓝晓玉
(广西柳州食品药品检验所，广西 柳州 545006)
收稿日期:2012-12-04
作者简介:蓝晓玉 (1967—) ，女，主管药师，主要从事药品检验及药品质量标准研究。Tel: (0772)2825417
摘要:目的 建立肾茶药材中主要活性成分熊果酸与齐墩果酸定量方法。方法 采用 HPLC 法，色谱柱为 ZORBAX
SB-Aq C18 (4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ;流动相为甲醇-乙腈-0. 05%醋酸铵溶液 (45 ∶ 30 ∶ 25) ，体积流量 1. 0 mL /min;
检测波长 215 nm。结果 熊果酸与齐墩果酸在 0. 26 ～ 4. 1 μg 与 0. 25 ～ 4. 1 μg 范围内均有良好的线性关系 (r =
1. 000 0)。平均回收率 (n = 6)分别为 96. 85% (RSD为 0. 72%)和 98. 39% (RSD 为 1. 00%)。结论 该方法简便、
快捷、准确，可为肾茶药材的质量控制提供参考。
关键词:肾茶;熊果酸;齐墩果酸;高效液相色谱法
中图分类号:R284. 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2013)06-1260-03
doi:10． 3969 / j． issn． 1001-1528． 2013． 06． 035
Determination of ursolic acid and oleanolic acid in Clerodendranthus spicatus
Thunb． by HPLC
LAN Xiao-yu
(Guangxi Liuzhou Institute for Drug Control，Liuzhou 545006，China)
KEY WORDS:Clerodendron spicatus Thunb．;ursolic acid;oleanolic acid;HPLC
肾茶为唇形科植物肾茶 Clerodendron spicatus
Thunb． 的全草，又名猫须草、猫须公。分布于福
建、台湾、海南、广西、云南西双版纳等地;味
甘、微苦，性凉。化学成分为三萜类、甾醇类、黄
酮类、挥发油及其他成分。三萜类的熊果酸与齐墩
果酸是主要活性成分，具清热利湿，通淋排石作
用［1-2］，民间多用于治急性或慢性肾炎、膀胱炎、
尿路结石等［3-9］。目前采用 HPLC 法对肾茶药材中
活性成分熊果酸与齐墩果酸的定量方法未见文献报
道。本实验建立了 HPLC法同时测定该药中熊果酸
与齐墩果酸的量，结果表明该方法简便、快捷、准
确，可为该药材的质量控制提供参考。
1 仪器与试药
岛津 LC—20AT高效液相色谱仪，紫外可见波
长检测器;岛津 UV—2550 紫外可见分光光度计;
梅特勒 XS205 电子分析天平。
肾茶药材为自采或购买，所有样品经本所李玲
副主任中药师鉴定，均为唇形科植物肾茶 Cleroden-
dron spicatus Thunb． 正品。熊果酸对照品 (批号
110742-200516)、齐墩果酸对照品 (批号 110709-
200304)购自中国药品生物制品检定所。甲醇、
乙腈均为色谱纯，美国 Fisher公司;超纯水为实验
室自制。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 ZORBAX SB-Aq C18 色谱柱
(250 mm ×4. 6 mm，5 μm) ，柱温 35 ℃;甲醇-乙
腈-0. 05%醋酸铵溶液 (45 ∶ 30 ∶ 25)为流动相，
体积流量 1. 0 mL /min;检测波长 215 nm;进样量
10 μL。
2. 2 对照品混合溶液的制备 分别精密称取熊果
酸对照品 10. 29 mg 与齐墩果酸对照品 10. 19 mg，
置同一 25 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容，摇匀，
得熊果酸与齐墩果酸对照品混合贮备液。
2. 3 供试品溶液的制备 精密称取肾茶药材粉末
(编号 SS2) (过 3 号筛)0. 5 g，加 20 mL 乙醇浸
泡过夜，超声 (50 Hz，300 W)提取 30 min，过
滤，滤渣加入乙醇 20 mL，重复提取一次，用少量
乙醇洗涤滤渣及滤纸，合并滤液，蒸干，用甲醇溶
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解并定容至 5 mL，摇匀，即得。
2. 4 线性关系试验 精密量取 2. 2 项下对照品混
合贮备液 2、1、0. 5、0. 25、0. 125 mL，分别置于
2 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得到
不同质量浓度的对照品混合溶液。精密吸取不同质
量浓度的对照品混合溶液各 10 μL，按上述色谱条
件，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，测定
峰面积，以色谱峰面积为 Y 纵坐标，熊果酸与齐
墩果酸的质量浓度为 X 横坐标，进行线性回归分
析，得熊果酸和齐墩果酸回归方程分别为 Y = 340
119X － 15 068 (r = 1. 000 0) ，Y = 337 469X － 5 611
(r = 1. 000 0) ，线性范围分别为 0. 26 ～ 4. 1 μg 与
0. 25 ～ 4. 1 μg。
2. 5 精密度试验 精密取对照品混合溶液 10 μL，
连续进样 6 次，分别测定峰面积值，计算出熊果酸
与齐墩果酸的 RSD分别为 1. 8%和 1. 4%，表明仪
器性能良好。
2. 6 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于 0、
2、4、8、16 h进样测定，其 RSD 分别为 2. 0%和
1. 7%，表明该供试品溶液稳定性良好。
2. 7 系统适用性试验 精密量取供试品溶液与对
照品混合溶液各 10 μL，按上述色谱条件，分别注
入高效液相色谱仪，记录色谱图，结果见图 1，熊
果酸与齐墩果酸峰达到基线分离，分离度大于
1. 5，二者理论塔板数大于 3 000。
1． 熊果酸 2． 齐墩果酸
1． ursolic acid 2． oleanolic acid
图 1 溶剂空白 (A)，对照品 (B)和供试品 (C)色谱图
Fig. 1 HPLC chromatograms of blank solvent (A)，reference substances (B)and sample (C)
2. 8 重复性试验 精密称取同一样品 6 份，按
2. 3 项下方法制备供试品溶液，按 2. 1 项色谱条件
进行测定，结果样品中熊果酸与齐墩果酸量的均值
为 0. 097% (RSD 为 1. 2%)和 0. 059% (RSD
为 1. 4%)。
2. 9 加样回收试验 精密称取已测知熊果酸与齐
墩果酸剂量的样品 (编号 SS2)约 0. 25 g 共 6 份，
分别加入 205. 80 μg /mL熊果酸 1. 25 mL和 203. 80
μg /mL齐墩果酸 0. 70 mL，按供试品溶液的制备方
法及色谱条件项下操作，计算回收率，结果肾茶药
材中熊果酸与齐墩果酸的平均回收率 (n = 6)
96. 85% (RSD 为 0. 7%)和 98. 40% (RSD 为
1. 0%)。结果见表 1。
2. 10 样品测定 取不同产地的肾茶药材 0. 5 g，
按 2. 3 项下方法制备供试品溶液，按 2. 1 项 色谱
条件进行测定，按外标法分别计算样品中熊果酸与
齐墩果酸的量，结果见表 2。
3 讨论
参照文献［10-11］分别尝试用甲醇索氏提取、
先用乙醚索氏提取除去杂质再用甲醇索氏提取、
表 1 加样回收试验结果
Tab. 1 Results of recovery tests
成分
取样量 /
g
原有量 /
mg
加入量 /
mg
测得量 /
mg
回收率 /
%
RSD /
%
熊果酸 0. 220 4 0. 293 1 0. 257 2 0. 543 5 97. 36 0. 7
0. 220 6 0. 293 4 0. 257 2 0. 545 2 97. 90
0. 220 4 0. 293 1 0. 257 2 0. 540 9 96. 35
0. 220 3 0. 293 0 0. 257 2 0. 540 3 96. 15
0. 220 4 0. 293 1 0. 257 2 0. 541 9 96. 73
0. 220 4 0. 293 1 0. 257 2 0. 541 6 96. 62
齐墩果酸 0. 220 4 0. 127 8 0. 142 7 0. 268 6 98. 67 1. 0
0. 220 6 0. 127 9 0. 142 7 0. 267 1 97. 55
0. 220 4 0. 127 8 0. 142 7 0. 267 6 97. 97
0. 220 3 0. 127 8 0. 142 7 0. 266 6 97. 27
0. 220 4 0. 127 8 0. 142 7 0. 269 9 99. 58
0. 220 4 0. 127 8 0. 142 7 0. 269 5 99. 30
25%盐酸-甲醇 (1 ∶ 4)回流提取、乙醇超声提取
等方式，结果发现乙醇超声提取效果较好，且易
操作。
经查阅文献，熊果酸与齐墩果酸的测定有采用
蒸发光散射检测器也有采用紫外检测器的，考虑到
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表 2 样品测定结果 (n =5)
Tab. 2 Determination results (n =5)
编号 产地
质量分数平均值
熊果酸 /% 齐墩果酸 /%
SG1 南宁市扶绥县 0. 170 0. 043
SG2 广西防城港 0. 139 0. 036
SG3 柳州市柳江县 0. 172 0. 040
SG4 玉林市 0. 148 0. 035
SG5 桂林市 0. 151 0. 033
SG6 百色市 0. 186 0. 044
SS1 广西中医学院药用植物园内 0. 097 0. 059
SS2 广西药用植物园内 0. 133 0. 058
SS3 广西柳州医专一附院内 0. 234 0. 053
SS4 柳州市柳城县 0. 246 0. 071
相对于蒸发光散射检测器，紫外检测器的专属性及
灵敏度更高，故本方法采用紫外检测器。考察熊果
酸与齐墩果酸的紫外吸收图谱，二者在 200 ～ 300
nm范围内均无明显最大吸收，参考文献选定 215
nm为测定波长。在流动相考察中，选用甲醇-水系
统时，峰形差，分离不好;选择甲醇-0. 5% 醋酸
铵、甲醇-0. 2%磷酸、甲醇-0. 2%醋酸系统时基线
波动严重，噪声过大;选用甲醇-0. 05%醋酸铵系
统时，峰高较低，峰形不够尖锐;选择乙腈-
0. 05%醋酸铵系统时，峰形虽有明显改善，但分离
度达不到要求，采用甲醇-乙腈-0. 05% 醋酸铵
(45 ∶ 30 ∶ 25)三相系统作为流动相时，分离度及
峰形均能满足实验要求。
有文献报道了用 RP-HPLC 法测定肾茶药材中
迷迭香酸［12-13］、用薄层扫描法测定肾茶中熊果酸
［14-15］，本实验建立了目前在药品质量控制中运
用最广泛的 HPLC法同时测定肾茶药材中主要活性
成分熊果酸与齐墩果酸，结果表明该方法简便、快
捷、准确，可为该药材的质量控制提供参考。
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