全 文 ：产地和季节对柿叶中总黄酮 、芦丁和齐墩果酸含量的影响
原江锋 , 杨建雄 , 张志琪 , 黄亚亚
(陕西师范大学 药用植物资源与天然药物化学教育部重点实验室 ,陕西 西安 710062)
收稿日期:2005-11-10
基金项目:国家自然科学基金资助项目(20175012);教育部科技重点项目(01156)
作者简介:原江锋(1978～ ),女 ,山西长治人 ,在读博士 ,主要从事天然药物及中药药理研究 ,电话:029-85303939, E-m ial:yuan jf@ stu. snnu.
edu. cn。
关键词:柿叶;总黄酮;芦丁;齐墩果酸;含量测定
摘要:目的:探索柿叶的最佳采集时间。方法:采用分光光度法进行不同产地 、季节柿叶的总黄酮含量的变化;采用 RP-
HPLC法进行不同产地 、季节柿叶芦丁 、齐墩果酸含量的变化。结果:7月和 10月采收的柿叶中总黄酮 、芦丁和齐墩果酸
的含量较高。结论:10月(采收柿子果实后)采收的柿叶有可能作为制备黄酮类 、芦丁和齐墩果酸的原料使用。
中图分类号:R283 文献标识码:A 文章编号:1001-1528(2006)12-1757-03
柿树是陕西省普遍栽培的经济作物。柿(D iospyros kaki
L. .f )为双子叶柿树科柿树属中常见的栽培植物。柿叶中含
有芦丁 、黄酮苷 、齐墩果酸 、熊果酸 、β-胡萝卜素 、生物态碘 、
必需氨基酸等多种营养物质和生理活性物质 [ 1 ～ 3] 。国内外
研究表明 , 以柿叶为原料制取的柿叶制剂 、柿叶茶 、柿叶提取
物及柿叶黄酮苷具有清热解毒 、清血利尿 、抑菌 、止血 、降血
脂 、降低胆固醇 、抑制肿瘤生长等多方面的生理功能 [ 4 ～ 6] 。
目前我国柿叶的粗提物主要作为出口原料而被开发 , 随
着对外贸易的快速增长及临床应用范围的扩展 ,人们对柿叶
的需求量日益增大 , 但对不同生长条件和不同生长季节的柿
叶中黄酮类化合物 、齐墩果酸含量变化规律还尚未见报道。
本文采用比色测定方法和反向高效液相色谱方法 ,测定陕西
关中地区和秦巴山区两个地区 5月到 11月不同月份采集的
柿叶中总黄酮 、芦丁 、齐墩果酸的含量 ,为选择柿叶的最佳采
收时间提供实验依据 。
1 材料 、仪器和试剂
H ITACH I高效液相色谱仪;TU-1800紫外可见分光光度
计。芦丁(中国药品生物制品检定所), 齐墩果酸为 S igm a提
供 , 在色谱条件下都呈现单一色谱峰。甲醇 、乙腈为色谱纯 ,
其余试剂均为分析纯 。柿叶于自 2004年 5月至 11月 , 每月
10日分别从陕西省秦巴山区和关中地区两地采集 , 由陕西
师范大学田先华教授鉴定。
2 色谱条件
2. 1 液相色谱条件
色谱柱:Krom asil 5Uc C18(100 A 250 mm ×4. 6 mm);测
定芦丁含量的流动相:甲醇-水 (49∶51), 流速 1 m L /m in, 检
测波长 365 nm;测定齐墩果酸含量的流动相:乙腈-甲醇-水
(70∶16∶14), 流速 0. 8 mL /m in, 检测波长 215 nm。在上述条
件下芦丁 、齐墩果酸色谱峰保留时间分别约为 17. 5 m in、3. 1
m in, 与其他峰分离完全。
2. 2 样品的处理
2. 2. 1 测量总黄酮 、芦丁样品的处理 称取经粉碎后的干
燥柿叶 5 g以 70 乙醇提取 3次 、提取温度为 80°C,溶剂用
量依次为 100 mL、80 m L、60 mL,提取时间为 2, 2, 1 h。冷却
后减压浓缩提取液并转至 100 mL量瓶中 , 用乙醇摇匀定容 ,
获得待测样品溶液 [ 7] 。
2. 2. 2 测量齐墩果酸样品的处理 精密称取干燥至恒重并
过 60目筛的柿叶 1 g,置索氏提取器中 , 加 100 mL 95 乙醇
提取至无色(10 h), 减压蒸去乙醇 , 残渣用甲醇溶解定容至
50 m L, 0. 45 μm 过滤 ,获得待测样品溶液Ⅱ 。
2. 3 柿叶总黄酮的测定
2. 3. 1 标准液配制 准确称取于 120°C下干燥至恒重的芦
丁标品 40. 0 m g, 用 70 乙醇溶解 ,定容至 50 mL,得浓度为
0. 4 mg /mL的芦丁标准液。
2. 3. 2 标准曲线绘制 准确吸取芦丁标准液 0. 2, 0. 4, 0. 6,
0. 8, 1. 0 mL于 10 m L量瓶中 , 用 30 乙醇补足 5 m L, 加入
5 NaNO2 溶液 0. 3 m L, 摇匀 , 放置 5 m in 后加入 10
A l(NO 3)3 ,溶液 0. 3 m L, 摇匀 , 放置 6 m in后加入 4 NaOH
溶液 2 m L,摇匀 , 用 30 乙醇定溶至 10 mL, 10 m in后于 510
nm处测定吸光度 A值 ,得芦丁量 y(m g)与吸光度 A间的回
归方程为:y=0. 002 4+0. 862 1A(r=0. 989 0)。
2. 4 柿叶芦丁 、齐墩果酸的测定
2. 4. 1 线性关系的考察 精密称取芦丁对照品 7. 1 m g加
70 乙醇 10 mL制成 0. 071 mg /mL的对照品溶液 ,齐墩果酸
对照品 1. 7 mg加甲醇 10 m L制成 0. 17 m g /mL的对照品溶
液 ,摇匀 , 分别精密吸取上述两种溶液 2, 4, 6, 8, 10 μL, 分别
注入高效液相色谱仪 , 色谱分离图见图 1。记录峰面积 , 以
对照品峰面积(Y)对浓度(X)进行线性回归分析 ,求出芦丁
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的直线回归方程为:Y =251 476. 3X - 7 658. 4, R =0. 999 3;
求出齐墩果酸直线回归方程为 Y =167 382. 5X - 1 668. 7, R
=0. 999 7, 结果芦丁 、齐墩果酸分别在 0. 142 ～ 0. 71 μg、
0. 34 ～ 1. 70μg范围内与积分面积呈良好的线性关系。
2. 4. 2 精密度试验 精密吸取对照品混合溶液 5 μL, 重复
进样 5次 ,分别测量峰面积值 , 计算出芦丁的 RSD 为1. 87 ,
齐墩果酸的 RSD 为 1. 98 。说明精密度良好。
2. 4. 3 重复性实验 按照 “ 2. 2样品的处理”项下平行制备
5份相同供试液 ,各精密量取 5 μL进样 ,测量峰面积。计算
出芦丁 、齐墩果酸的 RSD为 1. 46 、1. 78 , 表明重现性良好。
2. 4. 4 稳定性实验 取柿叶样品溶液Ⅰ 和样品溶液Ⅱ , 在
0, 1, 2, 4, 8, 24, 48, 72 h分别进样 5 μL,经 8次进样测定 , 芦
丁 、齐墩果酸峰面积积分值的 RSD分别为 1. 97 和 2. 03 。
2. 4. 5 加样回收率实验 精密称取干燥恒重的柿叶 1 g共
10份 , 其中 5份各加入芦丁 2 mg,另 5份各加入齐墩果酸 2
m g,按各自样品测定方法测定 , 计算回收率。结果芦丁 、齐
墩果酸的平均回收率分别为 98. 6 、 101. 1 , RSD 分别为
2. 13 、1. 74 , n=5。
2. 4. 6 样品含量测定 精密吸取测量芦丁提取物样品溶液
20 μL,注入液相色谱仪 ,按上述测定芦丁的色谱条件测定;
精密吸取测量齐墩果酸提取物样品溶液 5 μL, 注入液相色
谱仪 , 按上述测定齐墩果酸的色谱条件测定。分离图见图
1。用外标法计算出样品中芦丁 、齐墩果酸的含量。将秦巴
山区和关中地区同一成分动态变化制成折线图 ,见图 2 ～ 4。
3 讨论
柿叶中总黄酮随月份的动态变化结果见图 2。可以看
出 , 关中地区和秦巴山区柿叶 6月份 、7月份和 10月份总黄
酮含量较高 , 8月份 、9月份和 11月份柿叶中黄酮的含量较
低。可能的原因是 , 8月份和 9月份较多的黄酮类被转移到
果实 , 10月份果实被采收后 , 柿叶中的黄酮含量又增高。 11
月份柿叶中黄酮的含量较低 ,可能是气温降低造成的。
6月份 、7月份和 10月份秦巴山区柿叶中总黄酮的含量
高于关中地区 , 可能的原因是秦巴山区昼夜的温差大 ,在植
物体内积累了较多的次生代谢物;而 8月和 9月份秦巴山区
柿叶中总黄酮的含量低于关中地区 ,推测是由于秦巴山区柿
叶中次生代谢物被转移到果实的量高于关中地区。秦巴山
区柿树果实中总黄酮含量是否高于关中地区 ,有待于进一步
研究。
柿叶中芦丁和齐墩果酸含量随月份的动态变化与总黄
酮含量的变化趋势类似 , 7月份和 10月份两地柿叶中的含
量较高。且秦巴山区柿叶芦丁和齐墩果酸的含量均略高于
关中地区 , 这一差别也可能与秦巴山区昼夜的温差大有关。
本研究发现 , 柿叶中齐墩果酸的含量相当高 , 据报道 ,齐墩果
酸有抗病毒 、消炎 、增强免疫和抑制免疫 (免疫双向调解作
用)、抑制血小板凝集 、降血脂 、降糖 、保肝 、护肾 、抗艾滋病毒
等生物活性 [ 8] 。看来 , 柿叶茶的保健价值可能与齐墩果酸的
含量高有关。故可以对柿叶药用开发 , 也可考虑将柿叶作为
提取齐墩果酸药物的一种植物材料。
A
B
C
D
图 1 HPLC图
A芦丁对照品 (16. 5 m in);B 样品溶液 I;C 齐墩果酸对照品
(3. 1 m in);D样品溶液Ⅱ;1芦丁;2齐墩果酸
图 2 不同产地 、不同季节柿叶中总黄酮含量的变化
我国柿树资源丰富 , 但柿叶很少被有效的利用。本文的
研究结果表明 ,在柿子果实被采收的 10月份 ,柿叶的黄酮类
化合物 ,特别是齐墩果酸含量很高。如果能在柿子果实被采
收后 ,尽快采收柿叶 , 用作提取黄酮类化合物或齐墩果酸的
原料 ,有可能产生良好的经济效益。从柿叶中提取黄酮类化
合物或齐墩果酸的工艺条件值得进一步研究。
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图 3 不同产地 、不同季节柿叶中芦丁含量的变化
图 4 不同产地 、不同季节柿叶中齐墩果酸含量的变化
参考文献:
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