全 文 ：HPLC法同时测定不同产地、采收期、部位广东紫珠中的熊果酸和齐
墩果酸
房海灵1，2， 聂 韡1， 卢艳花2， 朱培林1*
(1． 江西省林业科学院，江西 南昌 330032;2． 华东理工大学，上海 200237)
收稿日期:2014-12-10
基金项目:江西省科技支撑计划项目 (20111BBG70030-4);江西省博士后科研择优资助项目 (2012 年) ;江西省财政林业专项
(2011511201);国家青年科学基金项目 (81102799)
作者简介:房海灵 (1983—) ，女，博士，副研究员，从事药用植物资源与质量评价研究。Tel: (0791)83833803，E-mail:fanghail-
ing2013@ 163． com
* 通信作者:朱培林 (1964—) ，男，研究员，从事药用植物规范化栽培及质量控制研究。Tel: (0791)83833803，E-mail:yczpl@ 126．
com
摘要:目的 建立同时测定广东紫珠中熊果酸和齐墩果酸含有量的 HPLC法，并对不同产地、采收期、部位中的这两
种成分进行比较。方法 采用 ZOBAX Eclipse XDB-C18色谱柱 (4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ;甲醇-0. 1%磷酸水溶液
(90 ∶ 10)为流动相;体积流量 1 mL /min;检测波长 210 nm;柱温 25 ℃。结果 熊果酸、齐墩果酸线性范围分别为
0. 052 4 ～ 1. 048 μg (r = 0. 999 8)、0. 055 ～ 1. 107 μg (r = 0. 999 8)，平均加样回收率分别为 99. 9%、100. 7%，ＲSD分
别为 0. 8%、1. 1%。结论 广东紫珠中熊果酸和齐墩果酸的含有量以江西萍乡芦溪产者最高。随着生长期延长，两者
含有量呈先升高后降低的趋势，并在 9 月份最高。而且，在不同部位中，其分布规律均为果实 ＞叶 ＞茎 ＞根。
关键词:广东紫珠;熊果酸;齐墩果酸;产地;采收期;部位;HPLC
中图分类号:Ｒ284. 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2015)10-2229-04
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2015. 10. 028
Simultaneous determination of ursolic acid and oleanolic acid in Callicarpa kwan-
gtungensis Chun． in different growing areas，picking times and parts by HPLC
FANG Hai-ling1，2， NIE Wei1， LU Yan-hua2， ZHU Pei-lin1*
(1． Jiangxi Academy of Forestry，Nanchang 330032，China;2． East China University of Science and Technology，Shanghai 200237，China)
ABSTＲACT:AIM To establish a method for simultaneously determining the contents of ursolic acid and olean-
olic acid in Callicarpa kwangtungensis Chun． by HPLC and compare these two constituents in different growing are-
as，picking times and parts． METHODS The analysis was performed on ZOBAX Eclipse XDB-C18 column (4. 6
mm ×250 mm，5 μm)，mobile phase was methanol-0. 1% phosphoric acid aqueous solution (90 ∶ 10) ，flow rate
was 1. 0 mL /min，detection wavelength was set at 210 nm，and column temperature was maintained at 25 ℃ ． ＲE-
SULTS The linear ranges of ursolic acid and oleanolic acid were within 0. 052 4 － 1. 048 μg (r = 0. 999 8)and
0. 055 － 1. 107 μg (r = 0. 999 8) ，and the average recoveries (n = 5)were 99. 9% and 100. 7% with the ＲSDs of
0. 8% and 1. 1%，respectively． CONCLUSION The C． kwangtungensis sample from Luxi (Pingxiang City，
Jiangxi Province)has the highest contents of ursolic acid and oleanolic acid． As growth time prolongs，the contents
of these two constituents increase at first and then decrease． In addition，the distribution law of them is fruit ＞ leaf
＞ stem ＞ root．
KEY WOＲDS:Callicarpa kwangtungensis Chun．;ursolic acid;oleanolic acid;growing areas;picking times;
parts;HPLC
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广东紫珠 Callicarpa kwangtungensis Chun． 为马
鞭草科紫珠属多年生落叶灌木植物［1］，以干燥茎
枝和叶入药，在我国用药历史相对较短，以 “万
年青”之名始载于清代 《植物名实图考》［2］，被
《中国药典》2010 年版收载［3］，具有收敛止血、散
瘀、清热解毒之功效，临床上常用于治疗宫颈糜烂
出血、阴道炎、宫颈炎等症［4］。研究表明，广东
紫珠的主要化学成分为黄酮、苯乙醇苷、萜类及挥
发油等［5-8］，其中三萜类化合物 (如熊果酸、齐墩
果酸等)具有抗炎、抗菌、抗肿瘤、抗氧化和降
血糖等药理作用［9］，属于活性物质，与该植物的
主要功效相符，因而有必要对其进行质量控制。目
前，国内对该药材质量的研究主要集中在苯乙醇苷
类化合物含有量的测定方面［10-11］，鲜有三萜类化
合物测定的相关报道［12］。本实验采用 HPLC 法，
对不同产地、采收期、部位广东紫珠中熊果酸和齐
墩果酸的含有量进行测定，为全面控制其质量奠定
基础。
1 仪器与试药
Waters 2695 HPLC 色谱仪，包括真空脱气机、
自动进样器、柱温箱、Waters 2468 紫外光检测器、
Empower色谱工作站 (美国 Waters 公司)。熊果酸
(批号 110742-200518，纯度 95%)、齐墩果酸 (批
号 110709-200505，纯度 95%)对照品 (中国食品
药品检定研究院)。各批次药材经江西省林业科学
院森林药材与食品研究所朱培林研究员鉴定，均为
广东紫珠 C． kwangtungensis的地上部分。甲醇为色
谱纯 (德国 Merck 公司);水为超纯水 (自制) ;
其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 ZOBAX Eclipse XDB-C18色谱柱
(4. 6 mm ×250 mm，5 μm) ;流动相为甲醇-0. 1%磷
酸水溶液 (9010) ;体积流量 1 mL /min;检测波
长 210 nm;柱温 25 ℃;进样量 20 μL。理论塔板数
按熊果酸峰计算，不低于 5 000。在此色谱条件下，
样品中熊果酸和齐墩果酸能达到基线分离，见图 1。
1． 齐墩果酸 2． 熊果酸
1． oleanolic acid 2． ursolic acid
图 1 对照品和供试品的 HPLC色谱图
Fig． 1 HPLC chromatograms of reference substances and samples
2. 2 样品制备
2. 2. 1 对照品溶液的制备 分别精密称取熊果酸、
齐墩果酸对照品适量，加甲醇溶解，制成对照品母
液。再分别吸取母液适量，置于同一量瓶中，加甲
醇定容，得到质量浓度分别为 52. 40、55. 36
μg /mL的混合对照品溶液，经 0. 45 μm微孔滤膜滤
过，即得。
2. 2. 2 供试品溶液的制备 精密称取干燥至恒定
质量的广东紫珠粉末 (过 100 目筛)1 g，置于具
塞锥形瓶中，精密加入乙醇 40 mL，称定质量，冷
浸 4 h，超声 (150 W、40 kHz)40 min，放冷，乙
醇补足减失的质量，摇匀。过滤后，药渣按相同方
法重复提取 2 次，合并滤液，浓缩，乙醇定容至
40 mL，0. 45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
2. 3 线性关系考察 分别精密吸取混合对照品溶
液 1、4、8、16、20 μL，在“2. 1”项色谱条件下
测定，以进样量 (μg)为横坐标 (X) ，峰面积为
纵坐标 (Y)进行线性回归，得到熊果酸的标准曲
线回归方程为 Y = 436 428X － 18 545 (r = 0. 999 8);
齐墩果酸为 Y = 469 748X － 18 730 (r = 0. 999 8)。
结果表明，两者分别在 0. 052 4 ～ 1. 048、0. 055 ～
1. 107 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2. 4 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液 20
μL，重复进样 5 次，在“2. 1”项色谱条件下测定
各对照品峰面积。结果，熊果酸、齐墩果酸峰面积
ＲSD (n = 5)分别为 0. 3%、0. 6%，表明仪器精
密度良好。
2. 5 重复性试验 精密称取江西井冈山产广东紫
珠粉末 5 份，每份 1. 0 g，按“2. 2. 2”项下方法制
备供试品溶液，精密吸取 20 μL 进样，测定峰面
积。结果，熊果酸、齐墩果酸峰面积 ＲSD 分别为
0. 8%、0. 9%，表明该方法具有较好的重复性。
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2. 6 稳定性试验 精密称取江西井冈山产广东紫
珠粉末 1. 0 g，按 “2. 2. 2”项下方法制备供试品
溶液，分别在 0、2、4、8、12、24 h 进样，测定
峰面积。结果，熊果酸、齐墩果酸峰面积 ＲSD 分
别为 0. 8%、0. 7%，表明供试品溶液在 24 h 内稳
定性良好。
2. 7 加样回收率试验 分别称取各成分含有量已
知的江西井冈山产广东紫珠粉末 5 份，每份 0. 5 g，
精密加入含熊果酸 0. 43 mg、齐墩果酸 0. 265 mg的
乙醇溶液 40 mL，按 “2. 2. 2”项下方法制备供试
品溶液，在“2. 1”项色谱条件下测定峰面积，结
果见表 1。
表 1 加样回收试验结果
Tab. 1 Ｒesult of recovery tests
称样量
/ g
原有量
/mg
加入量
/mg
实测值
/mg
回收率
/%
平均回收率
/%(ＲSD /%)
熊果酸 0. 502 0. 858 0. 430 1. 287 99. 6 99. 9
0. 506 0. 865 0. 430 1. 294 99. 8 (0. 8)
0. 498 0. 852 0. 430 1. 287 101. 4
0. 501 0. 857 0. 430 1. 285 99. 7
0. 507 0. 867 0. 430 1. 294 99. 2
齐墩果酸 0. 502 0. 522 0. 265 0. 789 100. 9 100. 7
0. 506 0. 526 0. 265 0. 789 99. 2 (1. 1)
0. 498 0. 518 0. 265 0. 788 101. 9
0. 501 0. 521 0. 265 0. 790 101. 5
0. 507 0. 527 0. 265 0. 791 99. 8
注:供试品 20 μL进样量 (μg) =实测值 /40 mL × 20 μL，其
中熊果酸含有量为 0. 643 ～ 0. 647 μg，齐墩果酸含有量为 0. 394 ～
0. 396 μg，均在标准曲线线性范围内
2. 8 样品测定 分别取不同产地、采收期、部位
的广东紫珠粉末适量，按 “2. 2. 2”项下方法制备
供试品溶液，精密吸取 20 μL，注入 HPLC 色谱
仪，在“2. 1”项色谱条件下进样分析，测定峰面
积，用外标法进行计算，结果见表 2 ～ 4。
3 讨论
本实验考察了不同提取溶剂 (45%、70%、
100%乙醇，50%、100% 甲醇)以及水浴回流、
索氏、超声等不同提取方法，发现乙醇提取的效果
最佳。同时，还考察了以乙醇为提取溶剂，在不同
提取时间 (40、50、60 min)、料液比 (1 ∶ 30、
1 ∶ 40、1 ∶ 50)、温度 (50、60、70 ℃)、次数
(1、2、3 次)时的提取效果。结果表明，以乙醇
为提取溶剂、料液比 1 ∶ 40、在 60 ℃ 下超声
40 min、提取两次时，提取较完全，而且该方法稳
定、重复性好。
在流动相系统的选择方面，张光贤［15］报道了
采用 HPLC 法 (流动相为甲醇-1. 0% 冰醋酸水溶
表 2 不同产地广东紫珠的测定结果 (n =3)
Tab. 2 Determination result of C． kwangtungensis from dif-
ferent growing areas (n =3)
药材来源 熊果酸 /% 齐墩果酸 /%
江西南昌 0. 190 0. 075
江西芦溪 0. 329 0. 205
江西余江 0. 239 0. 148
江西铜鼓 0. 136 0. 154
江西武宁 0. 350 0. 196
江西安福 0. 181 0. 111
江西安远 0. 257 0. 103
江西赣州 0. 232 0. 104
江西宜春 0. 270 0. 119
江西井冈山 0. 171 0. 104
江西寻乌 0. 277 0. 183
江西铅山 0. 163 0. 089
江西萍乡湘东 0. 229 0. 099
湖南会同 0. 146 0. 081
广东南雄 0. 291 0. 094
广西桂林 0. 255 0. 119
贵州榕江 0. 128 0. 071
表 3 不同采收期广东紫珠的测定结果 (n =3)
Tab. 3 Determination result of C． kwangtungensis in dif-
ferent picking times (n =3)
采收日期 熊果酸 /% 齐墩果酸 /%
20120616 0. 292 0. 078
20120716 0. 301 0. 081
20120816 0. 313 0. 110
20120916 0. 342 0. 135
20121016 0. 251 0. 095
20121116 0. 112 0. 083
注:样品均采自江西萍乡芦溪同一种植基地
表 4 广东紫珠不同部位的测定结果 (n =3)
Tab. 4 Determination result of C． kwangtungensis in dif-
ferent parts (n =3)
部位 熊果酸 /% 齐墩果酸 /%
根 0. 095 0. 076
茎 0. 128 0. 103
叶 0. 354 0. 237
果 0. 577 0. 240
注:样品均在同一时期采自江西萍乡芦溪同一种植基地
液)进行定量测定，但分离度不理想。本实验考
察了甲醇-水、甲醇-0. 1%磷酸水溶液、乙腈-0. 1%
磷酸水溶液这 3 个系统，发现以甲醇-0. 1%磷酸水
溶液为流动相时，所得色谱峰峰形较好，分离效果
最佳。同时，还考察了该流动相的 3 个比例
(95 ∶ 5、90 ∶ 10、82 ∶ 18) ，发现当其比例为
90 ∶ 10时，在 20 min 内出峰，保留时间合适，分
离效果理想。因此，选择甲醇-0. 1% 磷酸水溶液
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(90 ∶ 10)作为流动相。
熊果酸与齐墩果酸为同分异构体，在天然植物
中往往共生互存，结构与性质极其相似，故分离测
定较为困难。早期研究采用薄层扫描色谱法测
定［13］，但是易受操作环境及手法等因素影响，导
致定量分析结果有所偏差。为此，本实验在文献
［12，14-15］的基础上，结合实际情况，建立了同
时测定广东紫珠中熊果酸和齐墩果酸含有量的方
法，为系统评价该植物的质量提供理论依据。通过
对 17 个产地药材中这两种成分含有量的分析，发
现均以熊果酸为高，约为齐墩果酸的 1. 5 ～ 2. 5 倍，
相差较大。因此，应注意提高药材内在性质的稳定
性，保证临床用药的安全性和有效性。
同时，本实验还测定了江西芦溪 6 月至 11 月
广东紫珠中熊果酸和齐墩果酸的含有量。结果表
明，在该植物生长发育的不同阶段，两者存在显著
性差异，其含有量的动态积累存在一个由高到低的
趋势，并且在 9 月份最高。另外，又比较了该药材
不同部位中两者的含有量，发现在果实中最高，而
在根中最低。因此，该方法可应用于工业化生产
中，并根据不同的生产目的对植物原料进行采收，
具有重要的现实意义和参考价值。
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