全 文 ：* 基金项目:广西科学研究与技术开发计划项目(桂科攻 0322024-5E);
广西研究生教育创新计划资助(2006105981007D14)
作者单位:广西医科大学药理学教研室，南宁 530021
作者简介:张士军(1974 －) ，男，安徽望江人，副教授，博士，主要从
事肝炎和肝纤维化药物研究。
通讯作者:黄仁彬
文章编号:1001-0580(2010)11-1394-02 中图分类号:R 575. 5 文献标志码:A 【实验研究】
复方六月青对肝纤维化大鼠血清学指标影响*
张士军，李勇文，张志伟，陈兆霓，林兴，黄仁彬
摘 要:目的 探讨复方六月青(CLYQ)对肝纤维化大鼠血清学指标影响。方法 采用四氯化碳(CCl4)诱导大
鼠肝纤维化模型，酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测 CLYQ对肝纤维化大鼠血清学指标超氧化物歧化酶(SOD)、丙二
醛(MDA)、羟脯氨酸(Hyp)、透明质酸(HA)和金属蛋白酶组织抑制因子 － 1(TIMP － 1)的变化。结果 与模型对照组
比较，高剂量 CLYQ组大鼠血清 SOD 活力(142． 59 ± 9． 80)U/mL 明显升高(P ＜ 0． 01) ;高剂量 CLYQ 组大鼠血清
MDA、Hyp、HA 和 TIMP-1 含量分别为(2. 28 ± 0. 43)nmol /mL、(6. 53 ± 0． 77)μg /mL、(111. 16 ± 23. 89)ng /mL 和
(2180. 69 ± 278. 02)pg /mL，明显低于对照组(P ＜ 0. 01) ;并呈现剂量效应关系。结论 CLYQ通过抑制脂质过氧化和
降低胶原合成，发挥抗肝纤维化作用。
关键词:复方六月青;肝纤维化;酶联免疫吸附实验
Effect of compound Liuyueqing on serological indexes in hepatic fibrosis rats ZHANG Shi-jun，LI Yong-wen，
ZHANG Zhi-wei，et al． Department of Pharmacology，Guangxi Medical University(Nanning 530021，China)
Abstract:Objective To study the effect of compound Liuyueqing(CLYQ)on serological indexes in hepatic fibrosis
rats．Methods Hepatic fibrosis model of Sprague-Dawley rats were induced by CCl4． The serum superoxide dismutase
(SOD) ，malondialdehyde(MDA) ，hydroxyproline(Hyp) ，hyaluronic acid(HA) ，and tissue inhibitor of metalloproteinase-1
(TIMP-1)were detected with enzyme linked immunoabsorbent assay(ELISA)． Results Compared with the model control
group，the activity of SOD in the serum was increased significantly in all CLYQ groups(P ＜ 0. 01)and the serological SOD
activity was 142. 59 ± 9. 80 U /mL in the high dose CLYQ group． The contents of MDA，Hyp，HA and TIMP-1 in the ser-
um decreased significantly in all CLYQ groups(P ＜ 0. 01 or P ＜ 0. 05)． The serological MDA，Hyp，HA and TIMP-1 con-
tents was 2. 28 ± 0. 43nmol /mL，6. 53 ± 0. 77 μg /mL，111. 16 ± 23. 89ng /mL，and 2 180. 69 ± 278. 02 pg /mL in the high
dose CLYQ group，respectively，with dose-effect relationship． Conclusion CLYQ can suppress lipid peroxidation and re-
duce the collagen synthesis． Hence CLYQ has obvious anti-hepatic fibrosis effect．
Key words:compound Liuyueqing;hepatic fibrosis;ELISA
六月青系爵床科(Acanthaceae)肖鸡笼属植物肖鸡笼(顶
花马兰)的干燥地上部分〔1〕，为广西民间草药。六月青乙醇
提取物对鸭乙型肝炎病毒具有抑制作用〔2 － 3〕。它与白花蛇舌
草、栀子花根等组成复方六月青(CLYQ，又称复方六月雪)。
CLYQ 是根据长期临床观察而拟定的治疗急慢性乙型肝炎验
方，用于治疗急性黄疸性肝炎的湿热黄疸等。研究发现，
CLYQ 有效地抑制 HepG 2． 2． 15 细胞 HBV DNA 复制〔4〕。本
实验采用四氯化碳(CCl4)诱导大鼠肝纤维化模型，观察
CLYQ 对肝纤维化大鼠血清学指标影响，为 CLYQ 用于肝纤
维化治疗提供实验依据。
1 材料与方法
1. 1 实验动物 SPF级 SD 大鼠(广西医科大学实验动物中
心) ，雄性，体重(230 ± 30)g;试验动物生产许可证:SCXKG桂
2003-0003，试验动物使用许可证:SYKG桂 2003-0005。
1. 2 试剂与仪器 CLYQ(广西医科大学药理学教研室)采
用醇水双提的最佳工艺提取〔5〕;秋水仙碱(云南昊邦制药有
限公司) ，批号:20061109。超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛
(MDA)、羟脯氨酸(Hyp) (南京建成生物工程研究所) ;透明
质酸(HA) (美国 Adlitteram Diagnostic Laboratories 公司) ;金
属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1) (武汉博士德生物工程有
限公司)。Mode 1450 自动酶标仪(美国 Bio-Rad公司) ;DU －
640 紫外 －可见分光光度计(美国 Beckman 公司)。
1. 3 大鼠肝纤维化动物模型建立 将大鼠按体重随机分为
2 组:正常对照组及肝纤维化模型组。肝纤维化模型组 100
只，背部皮下注射 CCl4 造模，剂量 0. 3 mL /100 g，每周 2 次。
正常对照组 10 只，采用生理盐水背部皮下注射等量花生油溶
液，每周 2 次。
1. 4 实验分组及用药 将病理检查确认肝纤维化形成 SD
大鼠 60 只，随机分为 5 组。正常对照与模型对照组:等量的
生理盐水;阳性对照组:秋水仙碱，0． 2 mg /kg;CLYQ高、中、低
剂量组:30. 0、15. 0、7. 5 g /kg，每日 1 次空腹灌胃，连续给药 4
周。末次给药 24 h后，戊巴比妥钠麻醉，腹主动脉采血，分离
血清，于-20℃保存备用。
1. 5 血清 SOD、MDA、Hyp、HA 和 TIMP － 1 检测 分别采用
黄嘌呤氧化酶法测定 SOD活力，硫代巴比妥酸法测定 MDA 含
量，样本碱水解法测定 Hyp含量，酶联免疫吸附实验(ELISA)法
检测 HA和 TIMP-1含量，严格按照试剂盒说明书进行。
1. 6 统计分析 应用 SPSS 13. 0 统计软件进行分析，采用 t
检验进行组间比较，P ＜ 0. 05 为差异有统计学意义
2 结 果
2. 1 CLYQ对肝纤维化大鼠血清 SOD 和 MDA 影响(表 1)
与模型对照组比较，CLYQ 各剂量组均可使肝纤维化大鼠血
清 SOD 活力升高(P ＜ 0. 01) ，MDA 含量明显降低(P ＜
0. 01) ，并呈现量效反应关系。
4931 中国公共卫生 2010 年 11 月第 26 卷第 11 期 Chin J Public Health Nov 2010 Vol． 26 No． 11
表 1 CLYQ对肝纤维化大鼠血清 SOD和
MDA影响 (珔x ± s，n =10)
组别
(g /kg)
SOD
(U /mL)
MDA
(nmol /mL)
正常对照 166. 70 ± 15. 02 2. 09 ± 0. 16
模型对照 77. 70 ± 11. 27 3. 58 ± 0. 43
秋水仙碱 0. 2(mg /kg) 99. 21 ± 9. 55a 2. 29 ± 0. 38a
CYLQ 30. 0 142. 59 ± 9. 80 a 2. 28 ± 0. 43a
15. 0 139. 11 ± 7. 54 a 2. 46 ± 0. 35a
7. 5 127. 00 ± 14. 29a 2. 56 ± 0. 56a
注:与模型对照组比较，a P ＜ 0. 01。
2. 2 CLYQ对肝纤维化大鼠血清 Hyp、HA 和 TIMP － 1 影响
(表 2)与模型对照组比较，CLYQ 各剂量组均可明显降低肝
纤维化大鼠血清 Hyp、HA 和 TIMP － 1 含量(P ＜ 0. 01 或 P ＜
0. 05) ，并呈现量效反应关系。
表 2 CLYQ对肝纤维化大鼠血清 Hyp、HA和
TIMP －1 影响 (珔x ± s，n =10)
组 别
(g /kg)
Hyp
(μg /mL)
HA
(ng /mL)
TIMP －1
(pg /mL)
正常对照 5. 17 ± 1. 39 121. 09 ± 23. 51 1811. 21 ± 147. 60
模型对照 9. 54 ± 1. 65 164. 20 ± 34. 32 2825. 47 ± 229. 79
秋水仙碱 0. 2(mg /kg) 7. 19 ± 0. 91b 112. 65 ± 25. 96b 2260. 63 ± 212. 00b
CYLQ 30. 0 6. 53 ± 0. 77b 111. 16 ± 23. 89b 2180. 69 ± 278. 02b
15. 0 6. 59 ± 0. 77 b 136. 25 ± 16. 95a 2381. 64 ± 172. 97b
7. 5 7. 56 ± 0. 71b 138. 97 ± 18. 87a 2658. 66 ± 307. 70
注:与模型对照组比较，a P ＜ 0. 05，b P ＜ 0. 01。
3 讨 论
肝纤维化是多种慢性肝病发展的共同病理基础，也是慢
性肝炎、肝硬化等进一步发展、恶化的重要环节，是肝脏纤维
组织的过度沉积，细胞外基质(ECM)合成大于降解的结果，
主要是肝星状细胞活化和向肌成纤维样细胞和成纤维细胞转
化，导致大量 ECM合成，另一方面 ECM降解减少导致其合成
与降解的不平衡促进了肝纤维化形成。肝纤维化是肝硬化早
期和必经阶段，若病因持续存在，肝纤维化逐渐加重，肝小叶
及血管等逐渐被改建，肝脏正常结构遭到破坏，中心静脉区和
汇管区出现间隔、假小叶形成，即发展为不可逆转的肝硬
化〔6 － 7〕。研究表明，此时如果病因消除并经适当治疗，纤维化
可被逐渐吸收，肝纤维化是可以逆转的〔8〕。目前除病因治疗
外，阻抑、逆转肝纤维化进程成为非常重要的治疗对策。
本实验结果表明，CLYQ 各剂量组均可明显升高肝纤维
化大鼠血清 SOD 活力，MDA、Hyp、HA 和 TIMP-1 含量(P ＜
0. 01) ，且随着剂量增加，其作用逐渐增强，呈现量效反应关
系。结果提示，CLYQ具有抑制脂质过氧化作用，其机制可能
与其抗自由基，抑制脂质过氧化有一定关系。CLYQ 通过拮
抗 CCL4 诱发 SD 大鼠肝损害，抑制胶原合成，减少 ECM 沉
积，这可能是抗肝纤维化作用途径之一。
参考文献
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收稿日期:2010-04-28 (解学魁编辑 范会清校对)
* 基金项目:浙江省医药卫生科学研究基金项目(2005B019)
作者单位:1. 浙江省疾病预防控制中心辐射与核安全防护所，杭州 310051;2. 浙江省医学科学院卫生学研究所;3. 浙江大学医学院环境医
学研究所
作者简介:宣志强(1978 －) ，男，浙江杭州人，主管医师，硕士，研究方向:环境与职业毒理学。
文章编号:1001-0580(2010)11-1395-03 中图分类号:R 575. 5 文献标志码:A 【实验研究】
二甲基甲酰胺对人肝细胞凋亡相关蛋白影响*
宣志强1，杨锦蓉1，路艳艳2，李雪芝3，黎君3，王菁3
摘 要:目的 探讨不同剂量二甲基甲酰胺(DMF)在不同染毒时间下对人正常离体肝细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋
白酶 － 3(Caspase-3)激活的影响。方法 以 0，6. 25，25，100 mmol /L的 DMF染毒正常成人肝细胞 12 h，100 mmol /L的
DMF染毒肝细胞 0，3，6，12 h，应用蛋白印记法(Western法)观察 Caspase-3 激活的变化。结果 随着染毒剂量的增加，
Caspase-3原酶形式(Procapase-3)表达水平呈下降趋势，但各染毒组间比较，差异无统计学意义(P ＞ 0. 05) ;100 mmol /L
染毒组 Caspase-3激活水平最高，灰度比值为 0. 55，各染毒组间比较差异有统计学意义(F =7. 684，P ＜0. 01) ;随着染毒时
间增加，Caspase-3激活水平逐渐增加，12 h 染毒组灰度比值最高，达 0. 48，各组间比较，差异有统计学意义(F = 9. 351，P
＜0. 01)。结论 Caspase-3的激活参与了 DMF致人肝细胞的凋亡过程，并呈现良好的时间 －剂量效应关系。
关键词:二甲基甲酰胺;肝细胞;凋亡相关蛋白
5931中国公共卫生 2010 年 11 月第 26 卷第 11 期 Chin J Public Health Nov 2010 Vol． 26 No． 11