全 文 ：［收稿日期］ 20100607(003)
［基金项目］ 广西教育厅自然科学基金项目(200710MS014)
［第一作者］ 林兴，讲师，硕士学位，主要从事生化药理学、心血管药理学研究，Tel:0771-5358342，E-mail:gxLx60@ 163. com
［通讯作者］ * 黄仁彬，教授，博士生导师，研究方向:心血管药理学、生化药理学，Tel:0771-5358272，E-mail:huangrenbin518@ 163. com
六月青皂苷对小鼠免疫性肝损伤的保护作用
林兴1，黄权芳2，张士军1，黄仁彬1*
(1. 广西医科大学，南宁 530021;2. 广西中医学院第一附属医院，南宁 530023)
［摘要］ 目的:观察六月青皂苷对小鼠免疫性肝损伤的保护作用。方法:将 72 只小鼠随机分为空白组、模型组、日达仙阳
性药组(4. 2 × 10 － 3 g·kg － 1·d － 1)以及六月青皂苷低、中、高剂量组(0. 5，1，2 g·kg － 1·d － 1)，第 1 天，除空白组外，其余各组均尾 iv
卡介苗(BCG)，次日起给予相应药物干预，第 10 天末次给药 2 h 后，除空白组外，其余各组均经尾 iv 脂多糖(LPS)，10 h 后取小
鼠称重，于眼球取血，处死，取肝脏，检测并比较各组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)，天冬氨酸氨基转移酶(AST)和 T 细胞
亚群(CD3 +，CD4 +，CD8 +，CD4 + /CD8 +)之间的差异，HE 染色，光镜下观察肝组织损伤程度。结果:与模型组比较，高、中剂量
六月青皂苷能明显提高 CD3 +，CD4 +，CD4 + /CD8 +值，显著降低 CD + 8 值和 ALT，AST 水平;能明显减轻肝细胞气球样变性，点
状、片状坏死及炎性细胞浸润。结论:六月青皂苷对免疫性肝损伤具有明显的保护作用。
［关键词］ 六月青皂苷;免疫性肝损伤;T 淋巴细胞亚群
［中图分类号］ R285. 5 ［文献标识码］ B ［文章编号］ 1005-9903(2010)15-0117-03
Protective Effect of Terpenoids of Liuyueqing on
Immunological Liver Injury in Mice
LIN Xing1，HUANG Quan-fang2，ZHANG Shi-jun1，HUANG Ren-bin1*
(1 . Guangxi Medical University，Nanning 530021，China;
2 . The First Affiliated Hospital of Guangxi Traditional Chinese Medicine University，Nanning 530023，China)
［Abstract］ Objective:To observe the protective effect of terpenoids from Liuyueqing (TLYQ) on
immunological hepatic injury in mice. Method:Seventy-two mice were randomly divided into normal group，model
group，Zadaxi positive control (4. 2 × 10 － 3 g·kg － 1·d － 1)group and low，medium，high-dose TLYQ-treated group
(0. 5，1，2 g·kg － 1·d － 1). On the first day，except the blank group，other groups were injected BCG from tail vein.
The next day the mice in normal and model groups were administered with nothing，while those mice in other groups
were respectively administered with different medicine. By the end of the 10 th day，model，Zadaxi and three TLYQ-
treated groups were injected LPS from tail vein. 10 h later the mice were weighed，blood was collected from eyeball，
then all of groups were sacrificed，livers were taken out. ALT and AST in serum，percentage of CD3 +，CD4 +，CD8 +
and CD4 + /CD8 + of every group were determined. Liver tissue damage with HE staining was observed by light
microscope. Result:Compared with model group，high，medium-dose TLYQ could significantly increase percentage of
CD3 +，CD4 + cell and CD4 + /CD8 +，decrease the ratio of CD8 + and the activity of AST，ALT. And TLYQ also could
reduce the balloon degeneration，punctate，patchy necrosis and inflammatory cell infiltration. Conclusion:TLYQ has
a protective effect on immunological liver injury in mice.
［Key words］ terpenoids of Liuyueqing(TLYQ);hepatic injury;T lymphocyte subpopulation
六月青系爵床科(Acanthaceae)植物肖鸡笼(顶
花马兰)Taraphochlamys affinis (Griff) Bremekhu
［Strobilanthes affinis (Griff)Y. C. Tang］的干燥地上
部分［1］。我们前期研究发现，从六月青提取得到的
皂苷类能明显抑制 HepG2. 2. 15 细胞分泌 HBsAg，
HBeAg［2］，能有效地抑制细胞乙型肝炎病毒(HBV)
·711·
第 16 卷第 15 期
2010 年 11 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 16，No. 15
Nov.，2010
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2010.15.045
DNA 的复制，其作用呈明显的量效和时效反应关
系［3］。此外，实验还发现六月青皂苷能明显减轻
CCl4 致小鼠脂质过氧化肝损伤
［4］。本实验试图了
解六月青皂苷对免疫功能的影响及其抗乙肝病毒
(HBV)的作用机制，为筛选出六月青抗 HBV 主要活
性部位提供实验依据。
1 材料
1. 1 实验动物 健康昆明小鼠，SPF 级，雌雄各半，
体重 20 ～ 24 g，实验动物使用许可证号 SYKG(桂)
2003-0005;实验动物生产许可证号 SCXKG(桂)2003-
0003;由广西医科大学实验动物中心提供。
1. 2 受试药 六月青，秋季采于广西灵山县，经广
西中医学院第一附属医院黄权芳中药师鉴定为爵床
科植物肖鸡笼(顶花马兰)T. affinis(Giff)Bremekhu
［S. affinis(Griff)Y. C. Tang］的干燥地上部分。六月
青皂苷(TLYQ)，由广西医科大学药理学教研室和医
学科学实验中心自行提取，经常规化学定性试验证
实为皂苷类，纯度为 85. 8% ［4］。
1. 3 阳性对照品 日达仙(美国赛生氏公司产品，批
号 PA1005，1. 6 mg 溶于 77 mL无菌生理盐水，备用)。
1. 4 主要仪器 流式细胞仪为美国 BD 公司产品，
型号 BD Influx。
1. 5 试剂盒 T淋巴细胞亚群试剂盒(CD3-FITC，CD4-
PE，CD8-TC 荧光素标记的单克隆抗体，批号分别为:
MR3404，MR5104，MR5206)，美国 Caltag 公司产品。丙
氨酸氨基转移酶(ALT)，天冬氨酸氨基转移酶(AST)试
剂盒，南京建成生物工程研究所，批号 20070423。
2 方法
2. 1 造模方法及分组 将 72 只昆明小鼠随机分为
正常对照组(Normal)，模型组(Model)，日达仙阳性
对照组(Zadaxi)，治疗组即六月青皂苷高剂量组
(TLYQH )、中 剂 量 组 (TLYQM )、低 剂 量 组
(TLYQL)，每组 12 只。全部小鼠在实验期间均正常
饮水，普通饮食。除空白组每只尾 iv 生理盐水 0. 2
mL 外，其余各组每只尾 iv 卡介苗 0. 2 mL (BCG，含
5 × 107 活菌)，次日起日达仙组和治疗组开始给药
治疗，TLYQ 低、中、高剂量组分别 ig 0. 5，1，2 g·kg － 1
·d － 1(相当于生药 12，24，48 g·kg － 1·d － 1);阳性对照
组则以日达仙生理盐水溶液 0. 2 mL·kg － 1·d － 1(即
剂量为 4. 2 × 10 － 3 g·kg － 1·d － 1)ip。空白对照组和模
型组分别 ig 等容积的生理盐水。
实验开始的第 10 天，除空白组以生理盐水 0. 2
mL /只尾静脉 iv 外，其他各组以脂多糖(LPS)10 μg /
只尾静脉 iv，iv 10 h 后，从眼眶后静脉丛采血，处死，
左叶同一部位取小块肝脏组织。
2. 2 T 细胞亚群检测 ①取 CD3-FITC 和 CD4-PE
各加入 50 μL 全血;另一试管中取 CD3-FITC 和
CD8-TC 各加入 50 μL 全血，暗处孵育 15 min。②每
管加入 450 μL 红细胞溶解液。③暗处孵育 15 min。
④1 000 r·min － 1离心 5 min，弃上清。⑤沉淀加 0. 5
mL PBS，重新悬浮。⑥过 300 目尼龙网。⑦上机检
测。⑧用 Cellquest 软件分析散点图。
2. 3 ALT，AST 活性测定 小鼠全血，离心 3 500 r·
min － 1 10 min，吸取上层血清，按试剂盒说明书操作，
检测血清 ALT，AST 的活性。
2. 4 病理组织学观察 取肝脏标本，用 10% 福尔
马林固定，乙醇逐级脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，切
片机作 5 μm 切片，常规脱蜡，HE 染色，中性树胶封
片，用显微镜观察。
3 结果
3. 1 对免疫性肝损伤小鼠 T 淋巴细胞的影响 与空
白组相比，模型组 CD3 +，CD4 +，CD4 + /CD8 + 明显降
低，CD8 +明显升高，这表明免疫性肝损伤小鼠细胞免
疫功能低下。六月青皂苷高、中剂量组和日达仙组外
周血 CD3 +和 CD4 + T 细胞百分率及 CD4 + /CD8 + 比
值明显高于模型组(P < 0. 05 或 P < 0. 01)，而 CD8 + T
细胞百分率明显低于模型组，提示一定剂量的六月青
皂苷具有提高细胞免疫功能的作用。结果见表 1。
表 1 六月青皂苷对免疫性肝损伤小鼠 T淋巴细胞亚群的影响(珋x ± s)
组别
剂量
/ g·kg －1·d-1
n CD3
+
/%
CD4 +
/%
CD8 +
/%
CD4 +
/CD +8
正常 － 12 86. 5 ±9. 7 53. 7 ±8. 7 25. 8 ±7. 3 2. 11 ±0. 34
模型 － 9 37. 8 ±6. 43) 25. 8 ±7. 53) 43. 9 ±7. 63) 0. 67 ±0. 083)
日达仙 4. 2 ×10-3 12 71. 2 ±8. 82) 43. 8 ±9. 42) 30. 9 ±6. 72) 1. 42 ±0. 252)
TLYQ 0. 5 10 42. 3 ±7. 9 33. 7 ±9. 6 40. 2 ±9. 1 0. 87 ±0. 23
1 10 53. 5 ±9. 11) 38. 6 ±8. 21) 38. 9 ±9. 9 1. 01 ±0. 391)
2 12 68. 1 ±7. 62) 40. 1 ±8. 92) 35. 7 ±6. 31) 1. 15 ±0. 422)
注:与模型组比较 1)P < 0. 05，2)P < 0. 01;与空白组比较 3)P <
0. 01(表 2 同)。
3. 2 对血清 ALT，AST 活性的影响 模型组小鼠血
清中 ALT，AST 活性较空白对照组明显升高，与空白
组比较差异有显著性(P < 0. 01)。与模型组比较，
六月青皂苷高、中剂量组和日达仙组血清中 AST，
ALT 水平均有显著下降，见表 2。
3. 3 病理检查结果 HE 染色结果显示，正常组(图
1A)小鼠肝小叶结构清晰，以中央静脉为中心肝细
·811·
第 16 卷第 15 期
2010 年 11 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 16，No. 15
Nov.，2010
表 2 六月青皂苷对免疫性肝损伤小鼠血清 AST，ALT的影响(珋x ± s)
组别 剂量/ g·kg －1·d-1 n ALT /U·L － 1 AST /U·L － 1
正常 － 12 33. 81 ± 9. 66 41. 24 ± 8. 02
模型 － 9 169. 72 ± 40. 653) 180. 77 ± 37. 933)
日达仙 4. 2 × 10 － 3 12 88. 51 ± 23. 452) 93. 79 ± 34. 182)
TLYQ 0. 5 10 143. 86 ± 67. 58 163. 27 ± 70. 22
1 10 129. 26 ± 40. 831) 140. 73 ± 53. 941)
2 12 103. 83 ± 31. 762) 119. 77 ± 26. 432)
胞板呈放射状排列，胞浆深染，汇管区无炎性细胞浸
润;模型组(图 1B)可见肝小叶内炎症细胞呈围管性
浸润，肝窦淤血，肝细胞变性、水肿，多处灶性坏死，
严重的呈桥接坏死，汇管区炎性细胞浸润;日达仙组
(图 1C)和六月青皂苷高剂量组(图 1D)、中剂量组
(图 1E)肝细胞气球样变性，点状、片状坏死及炎性
细胞浸润均见明显减轻;六月青皂苷低剂量组(图
1F)肝脏改善不明显。
4 讨论
乙型肝炎病毒(HBV)感染人体后，其引起的肝
脏病变及其疾病的发生、发展，并非病毒本身所致，
与人体的免疫状态有一定的关系［5］，乙型病毒性肝
炎发病与患者的免疫应答及调控紊乱有密切关系，
乙型肝炎的免疫病理主要由 T 淋巴细胞免疫应答状
态决定，是由细胞免疫介导的免疫损伤，T 淋巴细胞
直接针对已感染 HBV 的肝细胞膜上所表达的病毒
抗原产生免疫反应，并对病毒的清除产生作用，因此
调节其免疫功能，增强其正常免疫反应是治疗乙肝
的一个主要途径之一。
图 1 六月青皂苷对免疫性肝损伤小鼠肝脏组织病理学变化的影响 (HE，× 200)
A.正常组;B.模型组;C.日达仙 4. 2 mg·kg － 1·d － 1组;D.六月青皂苷 2 g·kg － 1·d － 1组;
E.六月青皂苷 1 g·kg － 1·d － 1组;F.六月青皂苷 0. 5 g·kg － 1·d － 1组
本实验结果显示，六月青皂苷高、中剂量可增加免
疫性肝损伤小鼠外周血 CD3 +和 CD4 + T 细胞百分率，
降低 CD8 + T细胞百分率，从而升高 CD4 + /CD8 +，提示
六月青皂苷可增强免疫性肝损伤小鼠的细胞免疫功
能，增强小鼠的非特异性免疫功能;能够显著降低肝损
伤小鼠血清 ALT，AST 活性;改善模型中 BCG + LPS 引
起的肝组织病理变化。实验结果说明六月青皂苷对免
疫性肝损伤具有明显的保护作用。
综合我们前期的研究结果可以推测，六月青皂
苷有可能是通过抑制 HBV-DNA 复制，同时提高机
体免疫功能达到抗 HBV 的作用，同时也进一步证明
皂苷类是六月青主要抗 HBV 活性部位之一，值得进
一步研究和开发。
［参考文献］
［1］ 林兴，黄权芳，张士军，等 .广西民间药六月青的性状与
显微鉴定［J］.中药材，2005，28(7)541.
［2］ 林 兴，黄 权 芳，张 士 军，等 . 六 月 青 总 皂 苷 对
HepG2. 2. 15 细胞 HBV 复制的抑制作用［J］. 时珍国医
国药，2009，20(11):2728.
［3］ 林 兴，黄 权 芳，张 士 军，等 . 六 月 青 总 皂 苷 对
HepG2. 2. 15 细胞分泌 HBsAg，HBeAg 的影响［J］，中国
医院药学杂志，2009，29(17):1445.
［4］ 林兴，黄权芳，张士军，等 .六月青总皂苷对四氯化碳诱
导小鼠脂质过氧化反应的影响［J］. 中成药，2009，31
(12):133.
［5］ Mainimk，Bonic，Lee C K，et al. The role of virus-specific
CD8 + cell in liver damage and viral control during
persistent B virus infection［J］. J Exp，2000，191(8):
1269.
［责任编辑 聂淑琴］
·911·
第 16 卷第 15 期
2010 年 11 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 16，No. 15
Nov.，2010