全 文 ：书收稿日期:2012-08-06; 修订日期:2013-01-06
基金项目:中国博士后科学基金( No． 20110490870) ;
广西自然科学基金创新研究团队项目
( No． 2011GXNSFF018006)
作者简介:夏 星( 1981-) ，男( 汉族) ，广西桂林人，现任广州中医药大学
中药学院副教授，博士学位，主要从事中药有效成分的药理活性及作用机
制研究工作．
* 通讯作者简介:钟振国( 1956-) ，男( 汉族) ，广西南宁人，现任广西中医
药大学药学院教授，博士研究生导师，博士学位，主要从事中药新药研究
与开发工作．
罗汉果甜苷对 PC12 细胞氧化应激的保护作用研究
夏 星1，钟振国2* ，肖颖梅2
(1．广州中医药大学中药学院，广东 广州 510405; 2．广西中医药大学药学院，广西 南宁 530001)
摘要:目的 考察罗汉果甜苷在 PC12 细胞中对外源性氧化损伤的保护作用。方法 采用 MTT 法考察 0． 01 ～ 100 μg /ml
罗汉果甜苷对正常 PC12 细胞活力的影响，并在 H2O2 刺激的 PC12 细胞中考察 0． 01 ～ 10 μg /ml 的罗汉果甜苷对细胞活
力的影响，通过对细胞活力的考察选择罗汉果甜苷合适的实验剂量，测定罗汉果甜苷 0． 1 及 1 μg /ml 对 H2O2 刺激的
PC12 细胞中过氧化氢酶( SOD) 、谷胱甘肽过氧化物酶( GSH － Px) 活力的影响以及对丙二醛( MDA) 含量的影响。结果
罗汉果甜苷在 1 ～ 10 μg /ml浓度能提高正常 PC12 细胞活力，在 0． 1 ～ 10 μg /ml浓度下能显著提高 H2O2 刺激的 PC12 细
胞活力( P ＜ 0． 01) 。0． 1 及 1 μg /ml 两个剂量的罗汉果甜苷均能显著提高 H2O2 刺激的 PC12 细胞中 SOD 活力( P ＜ 0．
001) 和 GSH － Px活力( P ＜ 0． 001) ，并减少MDA生成( P ＜ 0． 05) 。结论 罗汉果甜苷能缓解氧化应激导致的 PC12 细胞活
力下降，并能增强 PC12 细胞的抗氧化能力。
关键词:罗汉果甜苷; PC12 细胞; 氧化损伤
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2013． 04． 020
中图分类号:Ｒ962 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2013) 04-0818-02
Protective Effect of Mogroside on H2O2 induced oxidative stress in PC12 Cell
XIA Xing1，ZHONG Zhen-guo2* ，XIAO Ying-mei2
( 1． School of Chinese Pharmaceutical Science，Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou Guangdong
510405，China; 2． Guangxi Traditional Chinese Medicine University，Nanning Guangxi 530001，China)
Abstract: Objective To investigate the protective effect of mogroside on hydrogen peroxide ( H2O2 ) induced oxidative stress in
PC12 cell．Methods MTT method was employed to determine the viability in mogroside ( 0． 01 ～ 100 μg /mL) treated PC12 cell
and mogroside ( 0． 01 ～ 10 μg /mL) plus H2O2 treated PC12 cell． Thereafter，activity of SOD，GSH － Px，as well as MDA concen-
tration were determined at optimal dosage of mogroside selected based on MTT experiment． Ｒesults PC12 cell viability was in-
creased by mogroside at 1 ～ 10 μg /mL，and the viability of H2O2 treated PC12 cell was increased by mogroside at 0． 1 ～ 10 μg /
mL． Furthermore，mogroside at 0． 1 and 1 μg /mL significantly enhanced SOD activity ( P ＜ 0． 001) and GSH － Px activity ( P ＜
0． 001) ，decreased MDA concentration ( P ＜ 0． 05) ． Conclusion Mogroside alleviated loss of cell viability in H2O2 treated PC12
cell，the anti － oxidative capacity could enhanced by pre － treat with mogroside in PC12 cell line．
Key words: Mogroside; PC12 Cell; Oxidative stress．
阿尔茨海默病(Alzheimer＇s disease，AD)是一种主要在老年
期发生的以进行性痴呆为主要特征的神经退行性变疾病，其主要
临床表现为进行性认知功能障碍、记忆力衰退、失语、性格和行为
改变等［1］。氧化应激(oxidative stress)是指自由基产生过多或抗
氧化物质水平减少而使两者之间的平衡失调所造成的损伤，在多
种中枢神经系统疾病的发生过程中起着重要作用。研究表明，自
由基诱导的细胞损伤是 AD的主要发病机制之一［2］。罗汉果 Sir-
aitia grosvenorii(Swingle)C． Jeffrey 为广西特产中药，性甘、凉。
罗汉果甜苷是罗汉果中主要有效成分，具有广泛的生物特性。近
年研究表明，罗汉果甜苷提取物对羟基自由基和超氧阴离子自由
基均有一定的清除作用，并随着罗汉果甜苷提取物浓度的增加，
清除效果逐渐增强，呈一定的剂量效应关系［3］。关于罗汉果甜
苷对具有神经源性的 PC12 细胞的影响尚未见报道。本研究利
用 H2O2刺激 PC12 建立体外神经细胞氧化应激模型，研究罗汉果
甜苷对 PC12 细胞的保护作用，为阐明抗氧化作用及治疗 AD 的
应用提供实验依据。
1 材料与仪器
1． 1 细胞 大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤细胞株 PC12 细胞购买
于北京北纳创联生物技术研究院。
1． 2 药品和试剂 罗汉果甜苷(纯度≥80%) :由桂林集琦实力
天然物科技有限公司提供(批号:12012948) ;DMEM/high glu-
cose，赛默飞世尔生物化学制品有限公司(批号:NXBO566) ;无支
原体胎牛血清，杭州四季清生物工程材料有限公司(批号:
090603) ;MTT及 Trypsin(Amersco公司产品，北京索莱宝科技有
限公司分装，批号:20110509，20110403) ;考马斯亮蓝蛋白测定试
剂盒(批号:20120214) ，超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase，
SOD)活力测定试剂盒(批号:20110721) ，丙二醛(Mobile Desktop
Assitant，MDA)含量测定试剂盒(批号:20120112) ，谷胱甘肽过氧
化物 酶 (glutathione peroxidase，GSH － Px)测 试 盒 (批 号:
20120109)均购于南京建成生物工程研究所。
1． 3 仪器 DLE560 超净工作台(荷兰 clearAir公司) ，311 型二氧
化碳培养箱(美国 Thermo Forma) ，Sorvall ST16Ｒ 超低温离心机
(Thermo Fisher) ，DML 3000B倒置荧光显微镜(莱卡仪器有限公
司) ，EPOCH 酶标仪(美国 BIOTEK 公司) ，JY92 超声波粉碎机
·818·
时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 4 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2013 VOL． 24 NO． 4
书(宁波新芝生物科技股份有限公司)。
2 方法
2． 1 PC12 细胞培养 用含 10 % 胎牛血清和 5 % 马血清的
DMEM培养液，37℃，5 % CO2 条件下培养细胞，每 2 天传代 1
次。待细胞增长至 80%融合时，用 0． 25%胰酶消化细胞，调整细
胞数至 1 × 105 个 /ml后传代或接种于细胞培养板进行各项指标
测定。
2． 2 MTT法检测罗汉果甜苷对 PC12 细胞生长的影响 取对数
生长期细胞，调整细胞数至 1 × 105 个 /ml 接种于 96 孔板。分别
设正常组(不加药物正常培养的细胞) ，罗汉果甜苷 100，10，1，
0． 1，0． 01 μg /ml组，同时设无细胞的空白对照组，每组设 3 个复
孔。细胞于接种 18h后，向培养液中加入相应药物处理 24 h。完
成药物处理后以 MTT 法测定细胞活力，向各孔加入 5 mg /ml 的
MTT继续培养 4h，小心吸弃所有培养液，每孔加入 150μl 二甲基
亚砜(DMSO)振荡 10 min。在酶标仪上以 560nm 波长测定各孔
OD值。按公式计算细胞相对活力:相对活力 =(处理组平均吸
光度值 －空白对照平均吸光度值)/ (正常组平均吸光度值 －空
白对照组平均吸光度值)× 100%。
2． 3 MTT法检测罗汉果甜苷对氧化应激的 PC12 细胞活力的影
响 取对数生长期细胞，调整细胞数至 1 × 105 个 /ml接种于 96 孔
板。分别设正常组(不加药物正常培养的细胞) ，模型组(不经药
物处理，接受 H2O2 400 μmol /L处理) ，阳性组(经维生素 E 1 μg /
ml处理，并接受 H2O2 400 μmol /L处理) ，罗汉果甜苷 10，1，0． 1，
0． 01 μg /ml组(分别接受罗汉果甜苷 1，0． 1，0． 1，0． 01 μg /ml 处
理，并接受 H2O2 400 μmol /L 处理) ，同时设无细胞的空白对照
组，每组设 3 个复孔。细胞于接种 18h 后，向培养液中加入相应
药物处理 24 h。之后按照文献方法诱导细胞的氧化应激［4］，除
正常组外，均给予终浓度为 400 μmol /L 的 H2O2 损伤 1h。完成
药物及 H2O2 处理后以 MTT法测定细胞活力，向各孔加入 5 mg /
ml的 MTT继续培养 4 h，小心吸弃所有培养液，每孔加入 150 μl
二甲基亚砜(DMSO)振荡 10 min。在酶标仪上以 560 nm波长测
定各孔 OD值。按公式计算增殖抑制率:增殖抑制率(%)=(处
理组平均吸光度值 －空白对照平均吸光度值)/ (正常组平均吸
光度值 －空白对照组平均吸光度值)× 100%。
2． 4 罗汉果甜苷对氧化应激的 PC12 细胞中抗氧化能力的影响
取对数生长期细胞，调整细胞数至 1 × 105 个 /ml 接种于 6 孔板。
根据罗汉果甜苷对细胞活力的影响，选择 1，0． 1 μg /ml组进行后
续实验，其余分组及处理同“2． 3”。完成给药及 H2O2 处理后，采
用细胞刮彻底收集细胞，超声破碎细胞，4℃下 3 000 r /min 离心
10 min，收集上清液按照试剂盒方法测定细胞匀浆中 SOD、GSH
－ Px活力及 MDA含量。
2． 5 统计分析 实验数据均以 珋x ± s表示，采用 SPSS13． 0 软件进
行统计分析，t检验法比较各组间差异，P ＜ 0． 05 则认为组间差异
显著。
3 结果
3． 1 罗汉果甜苷对 PC12 细胞生长的影响 实验结果见表 1。不
同浓度的罗汉果甜苷与 PC12 细胞共同孵育 24 h 后，10 μg /ml
和 1 μg /ml组的 PC12 细胞活力有明显增加，且 1 μg /ml 时活力
增加最为明显。
表 1 罗汉果甜苷对 PC12 细胞活力的影响(珋x ± s)
组别 剂量 /μg·ml －1 OD560 相对活力(%)
正常组 － 0． 922 ± 0． 077 100
罗汉果甜苷组 100 0． 827 ± 0． 069 89． 69
10 0． 974 ± 0． 103 105． 64
1 1． 018 ± 0． 093 110． 46
0． 1 0． 900 ± 0． 085 97． 68
0． 01 0． 919 ± 0． 096 99． 67
3． 2 罗汉果甜苷对氧化应激的 PC12 细胞活力的影响 实验结
果见表 2。模型组经 400 μmol /L的 H2O2 损伤 1 h 后，细胞相对
活力显著降低至 54． 83 %(P ＜ 0． 001)。罗汉果甜苷在 0． 1 ～ 10
μg /ml范围内能显著提高 PC12 细胞活力(P ＜ 0． 01) ，1 μg /ml的
罗汉果甜苷对 PC12 细胞活力的促进作用最强。
表 2 罗汉果甜苷对 H2O2 损伤的 PC12 细胞活力的影响(珋x ± s)
组别 剂量 /μg·ml －1 OD560 相对活力(%)
正常组 － 0． 897 ± 0． 071 100
模型组 － 0． 492 ± 0． 022＊＊＊ 54． 83
罗汉果甜苷组 10 0． 654 ± 0． 072### 72． 87
1 0． 673 ± 0． 049### 74． 97
0． 1 0． 614 ± 0． 058## 68． 38
0． 01 0． 524 ± 0． 048 58． 36
与正常组比较，＊＊＊ P ＜ 0． 001;与模型组比较，## P ＜ 0． 01，### P ＜
0． 001;n = 3
3． 3 罗汉果甜苷对氧化应激的 PC12 细胞中抗氧化能力的影响
实验结果见表 3。与正常组相比，模型组 PC12 细胞的 GSH － Px
活性显著降低(P ＜ 0． 001) ，而 MDA 含量显著增加(P ＜ 0． 001) ，
SOD活力有升高的趋势。给予罗汉果甜苷后，PC12 细胞 SOD、
GSH － Px 的活性均较模型组显著升高(P ＜ 0． 001) ，MDA 含量显
著降低(P ＜ 0． 001) ，且罗汉果甜苷的作用随使用剂量的改变而
有变化。
表 3 罗汉果甜苷对 H2O2 刺激的 PC12 细胞中 SOD、MDA
及 GSH － Px的影响(珋x ± s)
组别
剂量 /
μg·ml － 1
SOD /
U·mg prot － 1
MDA /
mmol·mg prot － 1
GSH － Px
/U·mg prot － 1
正常组 － 45． 91 ± 6． 55 9． 73 ± 0． 64 69． 38 ± 4． 41
模型组 － 52． 08 ± 4． 32 21． 32 ± 1． 77＊＊＊ 41． 52 ± 3． 27＊＊＊
罗汉果甜苷组 1 96． 34 ± 7． 73### 15． 32 ± 1． 95### 82． 34 ± 10． 47###
0． 1 72． 55 ± 7． 48### 17． 25 ± 1． 03# 65． 47 ± 5． 59###
与正常组比较，＊＊＊P ＜0． 001;与模型组比较，#P ＜0． 05，###P ＜0． 001;n =3
4 讨论
氧化损伤是机体各组织老化的重要诱因，氧化应激是指机体
内氧自由基的产生与清除失去平衡，或外源性氧化剂的过量摄入
导致活性氧在体内堆积引起细胞毒性。正常情况下，机体内自由
基的产生与消失是处于动态平衡的。若自由基产生过多或抗氧
化能力下降，将导致机体损伤［5］。体内各种组织在代谢过程中
产生自由基后，可使生物膜脂质双层中的不饱和脂肪酸过氧化，
形成脂质过氧化产物，继而使膜结构和功能发生障碍。AD 病人
体内自由基生成增加，尤其是脑组织中神经细胞的氧化应激是导
致其脑结构和功能改变的原因之一［6］。并且氧化应激在 AD 患
者脑中 β －淀粉样蛋白的生成和老年斑的出现过程中也发挥了
重要作用［7］。因此缓解神经细胞氧化应激的处理方式，可能对
AD的治疗起到积极作用。
H2O2 是一种重要的活性氧，外源性 H2O2 极易通过细胞膜
进入细胞，在细胞内过渡金属存在时通过 Fenton 反应，形成高活
性的自由基如单态氧、羟自由基等，进一步造成细胞损伤［8］。
PC12 细胞为 1976 年 Greene和 Tisehle成功建立的具有神经特性
的细胞株，在细胞形态、结构和功能上与神经元极其相似，能与原
代培养的神经细胞说明一致的问题［9］。本研究采用 H2O2 处理
PC12 细胞导致 PC12 细胞活力降低，细胞中抗氧化酶 SOD 活力
及 GSH － Px活力降低，脂质过氧化代谢产物 MDA 含量显著增
多。使用罗汉果甜苷预处理 24 小时后，受氧化应激 PC12 细胞活
力明显恢复，表明细胞对过氧化物的耐受力明显增强，并且 SOD
活力及 GSH － Px活力显著增加，MDA 生成减少，提示罗汉果甜
苷处理能改善 PC12 细胞的抗氧化能力。罗汉果甜苷的抗氧化
应激效果在陈善源等［10］对胰岛 β细胞中的研究，王勤等［11］在慢
性肝损伤大鼠中的研究中都有报道，本研究再次在 PC12 细胞中
证实了罗汉果甜苷对抗氧化应激的作用。
·918·
LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2013 VOL． 24 NO． 4 时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 4 期
书总之，罗汉果甜苷能缓解氧化应激导致的 PC12 细胞活力下
降，并能显著提高细胞内抗氧化酶活力，减少 MDA 的生成，可以
认为罗汉果甜苷有切实的抗氧化应激效果，并且可能透过该作用
对 H2O2 刺激的 PC12 细胞产生保护作用。
参考文献:
［1］ Selkoe DJ． Alzheimer＇s disease is a synaptic failure［J］． Science，2002，
298:789．
［2］ Chauhan V，Chauhan A． Oxidative stress in Alzheimer ＇s disease［J］．
Pathophysiology，2006，13(3) :195．
［3］ 戚向阳，陈维军，张俐勤，等．罗汉果皂甙清除自由基及抗脂质过氧
化作用的研究［J］．中国农业科学，2006，39(2) :382．
［4］ Crispo JAG，PichéM，Ansell DＲ，et al． Protective effects of methyl gal-
late on H2O2 － induced apoptosis in PC12 cells［J］ ． Biochemical and
Biophysical Ｒesearch Communications，2010，393(4) :773．
［5］ 杜先华，李海燕，王 爽，等．三七总皂苷对 H2O2 损伤的皮肤成纤
维细胞的保护作用［J］．时珍国医国药，2011，22(10) :2549．
［6］ Zawia NH，Lahiri DK，Cardozo － Pelaez F． Epigenetics，oxidative stress，
and Alzheimer disease［J］． Free radical biology ＆ medicine，2009，46
(9) :1241．
［7］ Jo DG，Arumugam TV，Woo HN，et al． Evidence that gamma － secretase
mediates oxidative stress － induced beta － secretase expression in Alzhe-
imer＇s disease［J］． Neurobiology of Aging，2010，31(6) :917．
［8］ Li WG，Miller FJ Jr，Zhang HJ，et al． H2O2 － induced superoxide anion
production by a non － phagocytic NAD(P)H oxidase cause oxidant in-
jury［J］． The Journal of Biological Chemistry，2001，276(31) :29251．
［9］ Tang XQ，Yang CT，Chen J，et al． Effect of hydrogen sulphide on beta －
amyloid － induced damage in PC12 cells［J］． Clinical and Experimental
Pharmacology and Physiology，2008，35(2) :180．
［10］ 陈善源，邓立东，徐 勤，等．罗汉果甜苷干预棕榈酸致胰岛 β 细胞
氧化应激相关损伤的机制研究［J］．中国药房，2012，23(23) :2116．
［11］ 王 勤，肖 刚．罗汉果甜苷对大鼠慢性肝损伤保护作用的实验研
究［J］．广西中医药，2007，30(5) :54．
收稿日期:2012-07-29; 修订日期:2012-12-12
基金项目:广西自然科学基金创新研究团队项目
( No． 2011GXNSFF018006 )
作者简介:李 丽( 1973-) ，女( 壮族) ，广西东兰人，现任广西中医药大学
副教授，硕士研究生导师，在读博士研究生，硕士学位，主要从事中药和民
族药药效及生化药理研究工作．
* 通讯作者简介:王志萍( 1965-) ，女( 汉族) ，湖南邵东人，现任广西中医
药大学教授，硕士研究生导师，学士学位，主要从事中药、民族药新制剂、
新剂型研发工作．
排毒消脂灵降血脂作用的实验研究
李 丽1，王志萍1* ，朱 华1，冯 桥2，刘幸丽1，黎 芳1，周 芳1，王振宁1
(1．广西中医药大学，广西 南宁 530001; 2．广西民族医药研究院，广西 南宁 530001)
摘要:目的 研究排毒消脂灵对实验性高脂血症小鼠血脂的影响。方法 将合格小鼠随机分成 6 组: 空白对照组、高血脂
模型组、辛伐他丁阳性对照组( 20 mg /kg) 、排毒消脂灵高( 43 g /kg) 、中( 21． 5 g /kg) 、低( 10． 8 g /kg) 剂量组。除空白对照
组灌胃给予蒸馏水外，其余各组每天上午灌胃给予相应药物，下午除空白对照组继续灌胃蒸馏水外，其余各组灌胃给予
高脂脂肪乳剂，连续 11 d。观察各组小鼠血清总胆固醇( TC) 、甘油三酯( TG) 、低密度脂蛋白胆固醇( LDL － C) 、高密度脂
蛋白胆固醇( HDL － C) 水平的变化。结果 与高脂血症模型组小鼠相比，排毒消脂灵给药组小鼠血清 TC、TG、LDL － C 水
平均有显著降低( P ＜ 0． 05) ，血清 HDL － C水平则显著升高( P ＜ 0． 05) 。结论 排毒消脂灵方对高脂血症小鼠具有降低
血脂的作用。
关键词:排毒消脂灵; 总胆固醇; 甘油三酯; 低密度脂蛋白胆固醇; 高密度脂蛋白胆固醇
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2013． 04． 021
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2013) 04-0820-02
Effects of the Paiduxiaozhiling on Blood Lipid in Experimental Hyperlipemia of mice
LI Li1，WANG Zhi-ping1* ，ZHU Hua1，FENG Qiao2，LIU Xing-li1，LI Fang1，ZHOU Fang1，WANG Zhen-ning1
( 1． Guangxi Traditional Chinese Medical University，Nanning 530001，China; 2． Guangxi Ｒesearch Institute of
Ethnopharmacy，Nanning 530001，China)
Abstract: Objective To investigate the influence of Paiduxiaozhiling ( PDXZL) on blood － fat of mice．Methods Mice were ran-
domly divided into the normal control group，model control group，positive medicine control group，PDXZL large( 20g·kg －1 ) ，
medium ( 10 g·kg －1 ) and small － dose ( 5g·kg －1 ) groups． Except the normal control group，all mice were feeded with the high
fat diet at the same time for 11 days． Cholesterol TC( Cholesterol) ，TG ( Triglycerides) ，LDL － C ( Low Density Lipoprotein Cho-
lesterol) and HDL － C ( High Density Lipoprotein Cholesterol) levels were observed． Ｒesults Compared to high blood lipid model
group，the levels of TG、TC and LDL － C in serum were significant lower( P ＜ 0． 05) in the groups of PDXZL，and the levels of
HDL － C in serum was significant higher ( P ＜ 0． 05) ． Conclusion PDXZL has the effects of reducing blood lipids．
Key words: Paiduxiaozhiling; TC; TG; LDL － C; HDL － C
高脂血症是现代社会的常见病、多发病。随着人们生活水平
的提高，以及饮食习惯的转变，高脂血症的发病率呈上升趋势，
发病年龄呈下降趋势。由于高脂血症是引起冠心病、动脉粥样硬
化等心脑血管疾病及糖尿病的重要致病因素，严重危害人们的健
康，因此及早、安全、有效地调节血脂是积极预防、治疗心脑血管
疾病和糖尿病的一个重要途径［1］。
在临床上，降血脂西药虽然疗效确切，但常常引起腹泻、腹胀、
头痛、眩晕、恶心、皮疹;甚至引起肌炎、平滑肌溶解等严重的不良
反应。而近年来临床研究表明，许多中药有降低血脂的作用，且无
·028·
时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 4 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2013 VOL． 24 NO． 4