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六月青多糖抗肿瘤活性研究



全 文 :收稿日期:2012-06-25; 修订日期:2012-11-06
基金项目:广西卫生职业技术学院项目( No. WZ2012ZA01) ;
广西科学研究与科技开发攻关项目
( 桂科攻 10124008 - 6)
作者简介:汤小军( 1978-) ,男( 汉族) ,广西博白人,现任广西卫生
职业技术学院讲师,硕士学位,主要从事免疫研究工作.
* 通讯作者简介:黄仁彬( 1955-) ,男( 汉族) ,广西灵山人,现任广
西医科大学教授,博士生导师,博士学位,主要从事抗肝炎药和抗
心血管疾病药物研究工作.
六月青多糖抗肿瘤活性研究
汤小军1,2,黄建春1,黄仁彬1*
(1.广西医科大学,广西 南宁 530021; 2.广西卫生职业技术学院,广西 南宁 530021)
摘要:目的 研究六月青多糖的抗肿瘤作用及其对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法 以 S180荷瘤小鼠为模型,六月青多糖
灌胃后观察小鼠移植瘤抑制率,采用双抗体夹心 ABC - ELISA法检测 S180荷瘤小鼠血清中 IL - 2 和 TNF - α水平。结果
六月青多糖可抑制小鼠 S180移植瘤的生长,其中高剂量组 ( 1. 2 g·kg
-1·d -1 ) 抑瘤率为 37. 81% ;六月青多糖能提高荷瘤
小鼠血清中 IL - 2 和 TNF - α含量。结论 六月青多糖体内抗肿瘤活性较强,其机制可能与增强机体的免疫功能有关。
关键词:六月青多糖; 抗肿瘤; IL - 2; TNF - α
DOI标识:doi: 10. 3969 / j. issn. 1008-0805. 2013. 02. 048
中图分类号:R284. 2 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2013) 02-0354-01
六月青系爵床科(Acanthaceae)植物肖鸡笼(顶头马
兰)Taraphochlamys affinis (Griff)Bremekhu[Strobilanthes
affinis (griff)Y. C. Tang]的干燥地上部分,是一种广西
民间草药[1]。六月青与白花蛇舌草、半枝莲等 6 味药配
伍组成的制剂复方 6 月雪,民间用来治疗乙型、丙型肝
炎、肝硬化、肝癌等,疗效显著[2]。前期研究表明,六月
青多糖有明显的体外抗氧化作用[3]。本实验对六月青
多糖体内抑制 S180荷瘤小鼠的作用及荷瘤小鼠血清中 IL
- 2 和 TNF - α 水平进行初步研究,为六月青多糖在临
床肿瘤的治疗中提供一定的实验依据。
1 材料与仪器
1. 1 动物 健康昆明种小鼠,SPF 级,雌雄各半,体质量
(20 ± 2)g,由广西医科大学实验动物中心提供,试验动
物生产许可证:SCXKG 桂 2003 - 0003,试验动物使用许
可证:SYKG桂 2003 - 0005。
1. 2 药品和试剂 六月青多糖由广西医科大学药学院提
供,临用前用生理盐水配制并稀释;环磷酰胺(CTX)注射
液(江苏恒瑞医药股份有限公司,批号:0905092)。RP-
MI1640 培养基(GIBCO公司) ;新生小牛血清(杭州四季
青生物工程材料有限公司)。小鼠 IL - 2 和 INF - α
ELISA 试 剂 盒 (晶 美 生 物 工 程 有 限 公 司,批 号:
20110610)。
1. 3 仪器 酶标仪(Thermo Labsystems 公司,型号:MK3
Multiskon) ,洁净工作台(苏州安泰空气技术有限公司,型
号:SW - CJ - 1F) ,水套式二氧化碳培养箱(美国 SHEL-
LAB,型号:2323 - 2) ,SIGMA台式高速冷冻离心机(德国
SIGMA,型号:3K - 15)。
1. 4 瘤株 小鼠肉瘤 S180,由广西中医药研究院提供,本
研究室定期腹腔接种传代保种。
2 方法
2. 1 造模、分组及给药 无菌抽取传代 7 d 的瘤株小鼠
的腹水,用无菌生理盐水稀释,调整细胞浓度至 2 × 106
个活细胞 /ml,每只 0. 2 ml 接种于小鼠右前肢腋下形成
实体瘤。接种 24 h后,小鼠随机分成 5 组,每组 10 只。模型组(生理盐
水 0. 2 ml·10 g -1·d -1) ,CTX组(0. 02 g·kg -1·d -1) ,六月青多糖高剂
量组 (1. 2 g·kg -1·d -1)、中剂量组(0. 6 g·kg -1·d -1)、低剂量组(0. 3
g·kg -1·d -1)。除 CTX 组隔天腹腔注射给药外,余均连续灌胃给药 10
d。
2. 2 六月青多糖的抑瘤作用 每天观察记录各组小鼠生存状况并称重。
第 11 天颈椎脱臼法处死小鼠,剪开小鼠右腋下皮下组织,剥离肿瘤,称
重,按下列公式计算抑瘤率。
抑瘤率(%)=(模型组瘤重 - 实验组瘤重)/ 模型组瘤重 × 100%
2. 3 血清 IL - 2、TNF - α 的检测 第 11 天眼球取血,分离血清,参照试
剂盒说明书检测。A450 nm下,用酶标仪检测各孔 OD值。标准品和标本的
OD值减去空白孔 OD值,将各样品 OD值代入标准曲线方程求出对应的
浓度。
2. 4 数据分析 采用 SPSS13. 0 软件进行分析,实验数据的结果以均数 珋x
± s表示,组间比较采用 t检验。
3 结果
3. 1 六月青多糖对 S180荷瘤小鼠的抑瘤作用 与模型组比较,六月青多
糖各剂量组对小鼠体质量无明显影响,差异无统计学意义。与模型组比
较,六月青多糖高、中剂量组和 CTX组肿瘤重量明显减轻(P < 0. 01 或 P
< 0. 05) ,其中六月青多糖高剂量组和 CTX 组抑瘤率 > 30%。结果见表
1。
表 1 六月青多糖对 S180荷瘤小鼠移植瘤的作用(珋x ± s)
组别
剂量 /
g·kg - 1·d - 1
体质量 m /g
用药前 用药后
肿瘤重量
/g
抑瘤率
(%)
模型 - 19. 83 ± 1. 15 24. 51 ± 1. 11 1. 48 ± 0. 30 -
CTX 0. 02 19. 65 ± 1. 36 26. 58 ± 2. 29* 0. 58 ± 0. 17** 60. 76
六月青多糖(高) 1. 20 19. 80 ± 1. 07 25. 47 ± 1. 28 0. 92 ± 0. 30** 37. 81
六月青多糖(中) 0. 60 20. 23 ± 1. 09 25. 50 ± 1. 06 1. 04 ± 0. 36** 29. 21
六月青多糖(低) 0. 30 20. 19 ± 1. 08 25. 05 ± 1. 28 1. 16 ± 0. 39 21. 57
与模型组比较,* P <0. 05,**P <0. 01;n =10
3. 2 六月青多糖对血清 IL - 2、TNF - α 含量的影响 与模型组比较,六
月青多糖各剂量组血清 IL - 2 含量增高,其中高、中剂量组差异有统计学
意义(P < 0. 05) ;六月青多糖各剂量组、CTX组血清 TNF - α 含量明显增
高,差异有统计学意义(P < 0. 01 或 P < 0. 05)。结果见表 2。
表 2 六月青多糖对 S180荷瘤小鼠血清 IL - 2、TNF - α含量的影响(珋x ± s)
组别
剂量
/g·kg - 1·d - 1
IL - 2 /
pg·ml - 1
TNF - α /
pg·ml - 1
模型 - 118. 73 ± 44. 39 47. 41 ± 9. 84
CTX 0. 02 87. 02 ± 29. 64 65. 33 ± 12. 85**
六月青多糖(高) 1. 20 164. 40 ± 38. 46* 63. 73 ± 8. 44**
六月青多糖(中) 0. 60 156. 77 ± 33. 84* 61. 73 ± 14. 95*
六月青多糖(低) 0. 30 120. 73 ± 58. 17 60. 53 ± 16. 43*
与模型组比较,* P <0. 05,**P <0. 01;n =10
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时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 2 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2013 VOL. 24 NO. 2
4 讨论
肿瘤的发生、发展、预后与人体的免疫功能密切相关,在抗肿
瘤免疫因子中,IL - 2 和 TNF - α比较重要。IL - 2 是 T细胞、NK
细胞等分泌的细胞因子,主要作用于免疫细胞 T 细胞、B 细胞、
NK细胞等,是 T淋巴细胞生长不可缺少的细胞因子,能增强细胞
毒性 T 细胞对肿瘤细胞的细胞毒性和刺激单核细胞杀伤肿瘤细
胞,在肿瘤免疫中具有重要作用[4]。TNF - α 是由单核 -巨噬细
胞系统分泌的细胞因子,能够激活 T 淋巴细胞、刺激机体产生抗
体和细胞因子,直接杀伤肿瘤细胞而对机体正常细胞无明显毒害
作用,还可通过抑制肿瘤血管生成等间接途径影响肿瘤细胞生
长,诱导多种肿瘤细胞凋亡,是迄今为止直接杀伤肿瘤最强的生
物活性因子之一[5,6]。
一般认为中药的抑瘤率超过 30%,实验重复 3 次,连续数次
疗效稳定,而且有统计学意义,可评定药物有一定抑制肿瘤的效
果。本研究结果显示,六月青多糖高、中剂量组肿瘤重量明显减
轻,其中高剂量组抑瘤率 > 30%,实验复重 3 次,结果基本一致,
由此评定六月青多糖对 S180移植瘤有一定抑制作用,且随药物浓
度增加抑瘤作用加强,呈明显的剂量依赖性。六月青多糖各剂量
组能增加荷瘤小鼠血清 TNF - α、IL - 2 含量,说明六月青多糖在
一定程度上可逆转肿瘤生长而导致的细胞因子合成抑制,进一步
增强机体的抗肿瘤免疫力,这可能是其抗肿瘤作用的重要机制之
一。
参考文献:
[1] 林 兴,黄权芳,黄仁彬,等. 广西民间药六月青的性状与显微鉴
定[J]. 中药材,2005,28(7) :541.
[2] 张士军,张志伟,陈兆霓,等. 复方六月青对实验性肝纤维化大鼠
肝脏超微结构的影响[J]. 时珍国医国药,2011,22(6) :1351.
[3] 刘 曦,黄仁彬,孙 懿,等. 六月青多糖体外抗氧化作用的研究
[J]. 中国医院药学杂志,2008,28 (23) :1983.
[4] Smith AJ,Humphries SE. Cytokine and cytokine receptorgene polymor-
phisms and their functionality[J]. Cytokine GrowthFactor Rev,2009,
20(1) :43.
[5] 朱庆均,郑广娟,张 丹.白术水提物抑瘤作用及其机制研究[J].
山东中医药大学学报,2006,30(1) :69.
[6] Kruglov A A,Kuchmiy A,Grivennikov S I,et al. Physiological func-
tions of tumor necrosis factor and the consequences of its pathologic
overexpression or blockade:Mouse models[J]. Cytokine & Growth
Factor Reviews,2008,19(3 - 4) :231.
收稿日期:2012-07-06; 修订日期:2012-11-20
基金项目:广西壮族自治区卫生厅课题( No. Z2011137)
作者简介:刘春荣( 1956-) ,男( 汉族) ,四川遂宁人,现任广西百色右江民
族医学院副教授,附属医院副主任中药师,学士学位,主要从事教学和临
床药学研究工作.
* 通讯作者简介:何国栋( 1982 - ) ,男,汉族,湖南浏阳人,现为广西百色
右江民族医学院讲师,硕士学位,主要从事中药学研究工作.
野芭蕉花液
对糖尿病模型大鼠血糖、血脂的影响
刘春荣1,何国栋2* ,肖小青1
(1.广西百色民族医学院附属医院,广西 百色 533000; 2.广西右江民族医学院,广西 百色 533000)
摘要:目的 观察野芭蕉花提取物对糖尿病模型大鼠血糖、血脂、糖化血红蛋白的影响。方法 将普通级雄性大鼠分为正
常组、模型组、消渴丸组和野芭蕉花提取物小剂量组、中剂量组、大剂量组共 6 组。观察野芭蕉花提取物引起的糖尿病模
型大鼠空腹血糖( FBG) 、胆固醇( TC) 、三酰甘油( TG) 、糖化血红蛋白( HbA1c ) 含量变化。结果 野芭蕉花提取物能显著
降低糖尿病模型大鼠空腹血糖、胆固醇、三酰甘油水平和糖化血红蛋白含量,与对照组比较,均有显著性差异( P < 0. 01 或
P < 0. 05) 。结论 野芭蕉花提取物有明显的降血糖、调节血脂的作用。
关键词:野芭蕉花提取物; 糖尿病大鼠模型; 空腹血糖; 糖化血红蛋白
DOI标识:doi: 10. 3969 / j. issn. 1008-0805. 2013. 02. 049
中图分类号:R285. 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2013) 02-0355-02
糖尿病(Diabetes Mellitus ,DM)是一种代谢性临床综合症,
是常见的内分泌系统疾病;近年来 DM 的患病率逐年增加,其中
2 型糖尿病(T2DM)的发病率占 DM 的发病率的 90%以上,是严
重危害人类健康的三大非传染性疾病之一,是人类致残及早亡的
主要原因。人类普通 T2DM 的发病有两大机制:胰岛素抵抗
(IR)、胰岛 β细胞功能受损,而 IR是 T2DM的重要特征。因此,
研制具有胰岛素抵抗特征的实验性 T2DM 动物模型有重要的医
学研究意义。治疗 T2DM以控制血糖、防止各种并发症的出现为
主[1]。野芭蕉花在云南西双版纳地区用于减肥,也是广西、云南
餐桌上的一道美味。野芭蕉花是广西百色市壮族民间用于治疗
DM的验方。本研究小组也曾将野芭蕉花直接用于糖尿病患者,
发现患者的血糖水平得到很好的控制。为了证实其科学性和有
效性,我们课题组对野芭蕉花液进行了药效学实验。采用 DM模
型大鼠,观察了野芭蕉花提取物对空腹血糖(FBG)、胆固醇
(TC)、三酰甘油(TG)含量、糖化血红蛋白(HbA1c)的影响。现
报道如下。
1 材料与仪器
健康普通级雄性大鼠 75 只,体质量(220 ± 20)g,由右江民
族医学院实验动物中心提供。野芭蕉花购于靖西县,花提取物
(右江民族医学院药学系中药实验室制备) ;消渴丸(广州中一药
业有限公司生产,批号:20101229) ;链脲佐菌素(STZ,美国 Sigma
公司,批号为 070921)。KDC - 40 型离心机(科大创新股份有限
公司) ;DS - 5 型糖化血红蛋白仪及配套试剂(英国 drew) ;Sn -
695B型免疫计数仪(上海核所日环光电仪器有限公司) ;7600 -
010 型全自动生化分析仪(日本日立公司)。
2 方法
2. 1 糖尿病模型建立 雄性大鼠 75 只,体质量(220 ± 20)g,适
应性饲养 1 周后,逐一称重,随机分成两组:正常对照组 10 只,实
验组 65 只。正常对照组采用喂养普通饲料,其余 60 只全部给
予:高脂饲料喂养(20%脂肪、48% 蔗糖、10% 蛋白质、10%的猪
油和 10%的植物油以及维生素、纤维素、盐等,热量 15. 8cal /g) ,
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2013 VOL. 24 NO. 2 时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 2 期