全 文 ：收稿日期:2005 06 28
基金项目:国家攻关计划课题(2001BA701A56)子课题
作者简介:周丽娜(1971 ),女(汉族), 辽宁沈阳人 , 硕士 ,主要从事微生物与生物药学的研究 , Tel.024 23986400 , E
mail sylina@163.com。
文章编号:1006 2858(2006)04 0247 04
复方大青叶注射液体外抑菌作用
及抗内毒素作用的研究
周丽娜1 , 袁　波2 , 苏　昕1 ,霍丽丽2 , 李发美2
(1.沈阳药科大学 制药工程学院 ,辽宁 沈阳 110016;　2.沈阳药科大学 药学院 ,辽宁 沈阳 110016)
摘要:目的 研究复方大青叶注射液体外抑菌作用及抗内毒素作用。方法 体外抑菌作用采用液体
培养基连续稀释法测定复方大青叶的最小抑菌浓度(MIC);抗内毒素作用采用细菌内毒素检查
法。结果 体外抑菌实验结果表明复方大青叶注射液对被测微生物的最小抑菌浓度为:金黄色葡萄
球菌 ,MIC62 g·L-1;藤黄微球菌 , MIC62 g·L -1;枯草芽孢杆菌 , MIC62 g·L-1;大肠埃希菌 ,
MIC125 g·L-1;变形杆菌, MIC125 g·L-1;新型隐球菌 ,MIC62 g·L-1;白假丝酵母菌 ,MIC125 g·L-1;
啤酒酵母菌 , MIC125 g·L-1 。抗内毒素结果:复方大青叶注射液 62 g·L-1即具有抗内毒素作用。
结论 复方大青叶注射液体外具有广谱抗菌作用 , 不仅对革兰阳性细菌有较强的抑菌作用 , 而且对
某些真菌也有较强的抑菌作用;复方大青叶注射液有较强的抗内毒素活性。
关键词:复方大青叶注射液;最小抑菌浓度;抗内毒素活性
中图分类号:Q 949.748.3;R 282.71　　　文献标识码:A
　　大青叶来源于十字花科植物菘蓝(Isat is in-
digotica Fort.)的干燥叶 ,性味苦寒 ,具清热解毒 ,
凉血利咽功效 。是常用的清热解毒中药材 ,主治
呼吸系统感染。近年来研究表明大青叶还具有抗
肿瘤 、免疫调节等作用[ 1] 。药典中的药方多是以
多味药同时入药 ,而目前该药的体外抑菌作用及
抗内毒素作用只集中在单味药 ,对复方大青叶的
研究未见报道。复方大青叶注射液以大青叶为
主 ,辅以金银花 、羌活 、拳参 、大黄制得。作者采用
液体培养基连续稀释法测定了复方大青叶注射液
对革兰阳性菌 、革兰阴性菌和真菌的最小抑菌浓
度(M IC);以细菌内毒素检查法对复方大青叶注
射液抗内毒素作用进行了研究 ,旨在为临床应用
复方大青叶注射液提供理论依据。
1　材料与方法
1.1　实验菌(由本校微生物教研室提供)
细菌:革兰阳性菌:金黄色葡萄球菌(S taphy-
lococcus aureus CMCC26001)、藤黄微球菌(Mi-
crococcus luteus ATCC28001)、枯草芽孢杆菌
(Bacillus subt ilis SYCDC63501);革兰阴性菌:大
肠埃希菌(Escherichia col i ATCC25923)、变形杆
菌(Proteus sp.)。
真菌:新型隐球菌(Cryptococcus neoformans
ATCC32609)、白假丝酵母菌(Candida albicans
ATCC10231)、啤酒酵母菌(Saccharomyces cere-
v isiae ATCC560)。
1.2　药品
复方大青叶注射液(江西天施康余江分公司 、
山东华信制药有限公司),双黄连注射液(A 、B有
限责任公司), 鲎试剂(0.1 mL/支 , 灵敏度
500 EU·L -1 ,湛江安度斯生物有限公司),细菌内
毒素工作标准品(120 EU/支 ,以 NS溶解备用 ,中
国生物制品检定所),生理盐水(沈阳志鹰制药
厂)。
1.3　菌悬液的制备
1.3.1　细菌悬液的制备
将受试细菌菌株接种于普通肉汤斜面培养
基 ,37℃培养 24 h后 ,再接种于普通肉汤培养基
37℃培养 6 h后 ,用肉汤培养基将菌液浓度调至
约为 1.5×108个·L -1备用 。
1.3.2　真菌悬液的制备
真菌菌株接种于沙氏固体斜面培养基 ,28 ℃
培养 72 h后 ,将活化菌株在沙氏平板上进行分区
第 23 卷 第 4 期
2 0 0 6 年 4 月
沈　阳　药　科　大　学　学　报
Journal of Shenyang Pharmaceutical University
Vol.23 　No.4
Apr.2006 p.247
划线分离 。取 5 个直径>1 mm 的菌落于 5 mL
无菌生理盐水中 ,震荡 5 min ,用无菌滴管取少许
菌悬液于血球计数板上 ,将其浓度调至 1×108 ～
1×109个·L -1备用。
1.4　体外最小抑菌浓度测定
采用液体培养基连续稀释法测定药物的最小
抑菌 浓 度 (minimal inhibitory concentration ,
M IC)[ 2 ,3] ,以双黄连注射液做药效对照 。
1.4.1　稀释药液
复方大青叶注射液和双黄连注射液原液 ,含
药质量浓度为 1 000 g·L-1 。分别以液体培养基
稀释成含药质量浓度分别为 500 、250 、125 、62 、
31 、15 g·L-1 。每管装稀释药液 1 mL ,每个浓度
设3个平行管 ,并分别设不含中药的液体培养基
为空白对照管。
1.4.2　加入菌液
每支试管内分别加入备用的试验菌 50 μL ,
细菌组置 37℃温箱中培养 18 ～ 24 h ,真菌组置
28℃培养 24 ～ 36 h 。
1.4.3　结果判断
空白对照管应长菌变为混浊 ,观察试验管 ,能
完全抑制试验菌生长(澄清)的最高稀释倍数管的
药物浓度即为最小抑菌浓度 M IC ,浑浊纪录为
+,澄清纪录为-。
1.5　抗内毒素作用的测定
采用细菌内毒素检查法 ,按文献[ 4 ,5]中细菌
内毒素检查法测定。
1.5.1　试验准备
试验所用器皿于 250 ℃30 min灭活 ,除去可
能存在的外源性内毒素。试验过程中防止微生物
的污染。
1.5.2　阴性对照实验
对复方大青叶注射液 、双黄连注射液及生理
盐水的内毒素进行检测 ,阴性对照实验结果应为
阴性 ,排除药液和生理盐水存在内毒素的可能。
1.5.3　复方大青叶注射液抗内毒素测定
分别取 0.5 mL 复方大青叶注射液于 1 、2号
试管内 ,在 2号试管内加入 0.5 mL NS ,混匀 ,吸
取 0.5 mL 于已加有 0.5 mL 生理盐水的 3号试
管内 ,依次按同法稀释 , 得到质量浓度分别为
1 000 、500 、250 、125 、62 、31 、15和 8 g·L-1的系列
稀释溶液 ,并使各管的药液量都为 0.5 mL ;分别
加入预先配制的浓度为 10 EU·mL-1内毒素液
0.5 mL ,摇匀 ,与(55±2)℃水浴保温 30 min ,分
别取 0.2 mL 于 0.1 mL鲎试剂中 ,溶解 ,封口 ,垂
直放入(37±1)℃水浴中 ,保温 60 min。同时设
不加检测药物的阳性对照 。保温和拿取试管过程
应避免受到震动造成假阴性结果。
1.5.4　结果判断
将试管从水浴中轻轻取出 ,缓缓倒转 180度
时 ,管内凝胶不变形 ,不从管壁滑脱者为阳性 ,记
录为+,凝胶不能保持完整并从管壁滑脱者为阴
性 ,记录为±,无凝胶生成纪录为-。
2　结果与讨论
2.1　体外抑菌实验
体外抑菌实验结果见表 1 、2 。由表 1 、2中数
据可知 ,采用的试验菌对双黄连注射液的敏感度
低于复方大青叶注射液的敏感度。复方大青叶注
射液具有广谱抗菌作用 ,不仅对革兰阳性菌有较
强的抑菌作用 ,而且对某些真菌也有较强的抑菌
作用 ,与双黄连注射液相比其抑菌作用更为明显。
本实验结果为确定合理的复方大青叶注射剂用药
量 ,提高药效具有一定的指导作用 。
Table 1　MIC of compound Isatis indigotica Fort.injection(n=3)
No. Strain ρ/(g·L
-1)
0 15 31 62 125 250 500
1 Staphy lococcus aureus + + + - - - -
2 Micrococcus luteus + + + - - - -
3 Bacillus subtilis + + + - - - -
4 Escherichia coli + + + + - - -
5 Proteus sp. + + + + - - -
6 Cryptococcus neoformans + + + - - - -
7 Candida albicans + + + + - - -
8 Saccharomyces cerevisiae + + + + - - -
248 　　　沈　阳　药　科　大　学　学　报 第 23卷
Table 2　MIC of the compound coptis injection(n=3)
No. Strain ρ/(g·L
-1)
0 15 31 62 125 250 500
1 Staphylococcus aureus + + + + - - -
2 M icrococcus luteus + + + + - - -
3 Bacillus subtilis + + + + - - -
4 Escherichia coli + + + + + + -
5 P roteus sp. + + + + + + -
6 Crypto coccus neoformans + + + + - - -
7 Candida albicans + + + + + - -
8 Saccharomyces cerevisiae + + + + + - -
2.2　抗内毒素作用的实验
采用细菌内毒素检查法对所用药品进行阴性
对照实验 ,实验结果表明药品不含内毒素 。复方
大青叶注射液与双黄连注射液的抗内毒素作用结
果见表 3。
　Table 3　The antiendotoxinactivities of the compound Isatis indigotica Fort.injection and the compound coptis injection(n=3)
Sample
ρ/(g·L -1)
0 8 15 31 62 125 250 500 1000
Compound Isatis indigotica Fort. + + ± ± ± - - - -
Compound coptis injection + + + + + ± ± - -
　　复方大青叶注射液被稀释至 62 g·L -1时开
始形成凝胶 ,双黄连注射液被稀释至 500 g·L-1
时开始形成凝胶 。
内毒素生物活性复杂 ,对人体作用广泛 ,能使
脏腑组织发生严重病变 ,可引起休克 、弥散性血管
内凝血(DIC)、多器官功能衰竭等[ 6 , 7] 。文献[ 8]
报道大青叶具有抗内毒素作用 。作者采用细菌内
毒素检查法对复方大青叶注射液进行抗内毒素作
用评价 ,结果表明同等剂量复方大青叶注射液与
双黄连注射液的体外抗内毒素作用有显著差别。
其拮抗内毒素作用的深入研究对临床治疗具有一
定的意义 。
3　结论
a.复方大青叶注射液体外抑菌作用的试验
结果表明 ,复方大青叶注射液具有广谱抗菌作用 ,
不仅对革兰阳性细菌有较强的抑菌作用 ,而且对
某些真菌也有较强的抑菌作用 。
b.复方大青叶注射液体外抗内毒素作用的
试验结果表明 ,复方大青叶注射液被稀释至质量
浓度为 62 g·L -1仍具有抗内毒素作用 。
参考文献:
[ 1] 郑虎占 , 董泽宏 ,余靖.中药现代研究与应用:第一卷
[ M] .北京:学苑出版社 , 1997.328-335.
[ 2] 郑剑玲 , 王美惠 ,李秀珍 , 等.大青叶和板蓝根提取物
的抑菌作用研究 [ J] .中国微生态学杂志 , 2003 , 15
(1):18-19.
[ 3] National Committee fo r clinical laboratory standards.
Reference method for bro th dilution antifungal suscepti-
bility testing of yeast proposed standard M27 -P [ S] .
Pennsy lvania:NCCLS , 1992.1-32.
[ 4] 国家药典委员会.中华人民共和国药典:二部 [ Z] .北
京:化学工业出版社 , 1995.附录 XI E.
[ 5] 王演 ,乔传卓.异地栽培大青叶和原栽培品种的抗内
毒素作用比较 [ J] .中草药 , 2000 , 31(3):212-213.
[ 6] 谭余庆 , 赵一 ,林启云 , 等.青蒿提取物抗内毒素实验
研究 [ J] .中国中药杂志 , 1999 , 24(3):166-171.
[ 7] 刘庆增 ,王金兰.中药抗内毒素生物活性机理的研究
[ J] .中草药 , 1996 , 27(2):121-123.
[ 8 ] Wu X Y , Liu Y H , Sheng W Y , et al.Chemical con-
stituents of Isatis indigo tica [ J] .Planta Med , 1997 , 63:
55-57.
249第 4 期 周丽娜等:复方大青叶注射液体外抑菌作用及抗内毒素作用的研究　　　
Antimicrobial activity in vitro and antiendotoxin
activity of the compound Isatis indigotica Fort.in-
jection
ZHOU Li-na1 , YUAN Bo2 , SU Xin1 , HUO Li-li2 , LI Fa-mei2
(1.School of Pharmaceut ical Engineering , Shenyang Pharmaceutical Universi ty , Shenyang 　110016 ,
China ;　2.School of Pharmacy , Shenyang Pharmaceutical University , Shenyang　110016 , China)
Abstract:Objective To study the antimicrobial activity in vit ro and the antiendotox in activity of the com-
pound Isatis indigotica Fort.inject ion.Methods Minimal inhibitory concentration(M IC)of the compound
Isat is indigotica Fort.injection on bacteria and fungi w as assayed by serial dilution test.The antiendoto xin
activi ty w as assayed by bacterial endo toxins test.Results M IC:S taphylococcus aureus ,62 g·L-1;Micro-
coccus luteus , 62 g·L-1;Baci llussubt il is ,62 g·L-1;Escherichia coli ,125 g·L-1;Proteus sp.,125 g·L-1;
Cryptococcus neoformans ,62 g·L-1;Candida albican ,125 g·L-1;Saccharomyces cerevisiae , 125 g·L-1.
The bacterial endoto xins test show ed that 62 g·L-1 of the compound Isat is indigotica Fort.injection still
had the antiendotoxin activity .Conclusions The compound Isatis indigot ica Fort.inject ion has broad
antimicrobial spect rum , it is proved to have st rong inhibitory ef fects to bacteria and fungi , and significant
antiendotoxic activity.
Key words:compound Isatis indigotica Fo rt.injection;minimal inhibi tory concentration(M IC);antiendo-
toxic activi ty
(上接第 246页)
Impact of arsenic trioxide on the GST-πand TopoⅡ
expressions in human gastric cancer cell line
SGC7901/ADR
YANG Hong-wu , QU Chong-xie , GUAN Hong-wei
(The Pathology Department of f irst Af f iliated Hospital , Dalian Medical University , Dalian　116011 ,
China)
Abstract:Objective To explo re the reversal effect of arsenic t rioxide(As2O3)on resistance of gastric cancer
cell line SGC7901/ADR to adriamycin(ADM)and the impact of As2O3 on the GST-π and TopoⅡexpres-
sions in SGC7901/ADR cells.Methods The non-cytotoxic concentrations of arsenic t rioxide and the sensi tiv-
ity of cells to adriamycin were detected w ith M TT assay.The drug concentrations w ithin cells w ere mea-
sured w ith f low cytometry(FCM), and the impact of arsenic trio xide on the expressions of GS T-πand Topo
Ⅱ were evaluated by immunohistochemical techniques.Results and Conclusions 0.4 0.8μmol·L-1 arsenic
trioxides didn t show significant cy totoxici ty to resistant cell line SGC7901/ADR(P<0.01).As2O3 could
improve the sensi tivi ty of SGC7901/ADR cells to adriamycin and partly reverse the resistance of SGC7901/
ADR cells to ADM via down-regulat ing GST-πexpressions.
Key words:gastric cancer cells;multidrug resistance;arsenic t rioxide
250 　　　沈　阳　药　科　大　学　学　报 第 23卷