全 文 ：2015 年 2 月 第 17 卷 第 2 期 中国现代中药 Modern Chinese Medicine Feb. 2015 Vol. 17 No. 2
·基础研究·
△［基金项目］ 陕西省科技资源统筹中药现代化专项(2012KTCL03-14) ;陕西省大学生创新训练项目(1689)
*［通信作者］ 王小平，副教授，硕士生导师，研究方向:中药质量分析与新药研究;E-mail:wangxiaoping323@126. com
猕猴桃藤总黄酮纯化工艺研究
△
李雪，李栋红，王小平* ，白吉庆
(陕西中医学院，陕西 咸阳 712046)
［摘要］ 目的:猕猴桃藤中总黄酮纯化工艺的优选。方法:采用单因素设计，以总黄酮的含量为评价指标。
结果:最佳纯化条件样品与聚酰胺的比例为 1∶10，10 倍量柱体积的 60%乙醇洗脱，所纯化的总黄酮含量最高，可达
51. 8%。结论:该纯化工艺简单、可行，可用于猕猴桃藤中总黄酮的纯化。
［关键词］ 猕猴桃藤;总黄酮;纯化工艺;正交设计
Purification Process of total flavonoids in Vine of Actinidia chinensis
LI Xue，LI Donghong，WANG Xiaoping* ，BAI Jiqing
(Shaanxi University of TCM，Xianyang 712046，Shaanxi，China)
［Abstract］ Objective:To optimize of flavonoids purification process of Actinidia chinensis vine． Methods:The
optimized The purification process of the flavonoids was optimized with the total flavonoids as a index． Ｒesults:Optimal
purification process was as following:The ratio of samples and adsorbent 1∶10，tenfold column volumes of 60% ethanol elute，
the content of total flavonoids was 71. 8% ． Conclusion:The purification process is simple and feasible，and can be used for
purification of total flavonoids in vine of A． chinensis.
［Keywords］ Vine of Actinidia chinens;total flavonoids;purification process;orthogonal design
doi:10． 13313 / j． issn． 1673-4890． 2015． 2． 010
猕猴桃藤为猕猴桃科猕猴桃属植物猕猴桃
Actinidia Chinensis Planch. 的藤［1］。猕猴桃根具有清
热解毒、活血散结、祛风利湿之功能。临床上用于
治疗胃癌、乳腺癌、风湿性关节炎、淋巴性结核、
跌扑损伤、痈疖等病［2］。我国为猕猴桃的主要产区，
陕西省广泛栽培，栽植面积占全国 60%以上。近年
发现中华猕猴桃根富含黄酮类、生物碱类等成分，
具有降压、抗肿瘤等药理作用［2-5］。猕猴桃根资源相
对匮乏，但其藤因为果农每年都要修剪，资源非常
丰富。前期研究发现猕猴桃藤富含大量黄酮类成分，
但对其总黄酮纯化工艺研究报道较少，因此本文对
其总黄酮的纯化工艺进行研究，希望为猕猴桃藤总
黄酮的开发利用提供参考。
1 仪器与试剂、试药
1. 1 仪器
紫外-分光光度计(上海美普达仪器有限公司) ;
德国 IKA ＲV10 旋转蒸发仪;KQ-300VDE 型双频数
控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);DZF-
6050B真空干燥箱(上海齐欣科学仪器有限公司) ;
101-2 型电热鼓风干燥箱(北京科伟永兴仪器有限公
司);BT125D电子天平(赛多利斯)。
1. 2 试剂、试药
猕猴桃藤，经陕西中医学院生药教研室白吉庆
副教授鉴定为猕猴桃科猕猴桃属植物猕猴桃
Actinidia Chinensis Planch. 的藤;芦丁对照品(中国
食品药品检定研究院提供，批号:100080-200707);
聚酰胺(100 ～ 200 目) ;亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化
钠、乙醇等均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 方法
2. 1. 1 粗提物制备 称取猕猴桃藤藤饮片 150 g，用
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8倍量60%的乙醇提取3次，每次1 h，合并滤液，减
压回收乙醇至稠膏状，减压干燥，得粗提物 14. 64 g。
2. 1. 2 对照品的制备 精密称取芦丁对照品 9. 93 mg，
置 10 mL 容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇
匀，即得。
2. 2 标准曲线的绘制
分别取芦丁对照品溶液 0. 1、0. 2、0. 4、0. 6、
0. 8 mL于 10 mL 容量瓶中，精密加入 5%的亚硝酸
钠溶液 0. 4 mL，摇匀，放置 6 min;加入 10%硝酸
铝溶液 0. 4 mL，摇匀，放置 6 min;加入 4. 3%的氢
氧化钠试液 4 mL，加水至刻度，摇匀，放置15 min，
以相应试剂为空白，用紫外-可见分光光度法，在
500 nm波长处测吸收光度。以总黄酮(芦丁计)浓度
为纵坐标，吸光度为横坐标，进行线性回归，绘制标
准曲线，得 Y =0. 008 73X － 0. 002 8(r = 0. 999 9)，总
黄酮(芦丁计)在 0. 01 ～ 0. 08 mg·mL －1线性关系好
良好［6］。
2. 3 上柱溶液的制备
称取粗提物适量置烧瓶中，精密加入 10 倍量
60%的乙醇，称定重量，超声 20 min，取出，室温
放置，称重，用 60% 的乙醇补足减失的重量，过
滤，滤液备用。
2. 4 纯化工艺考察
2. 4. 1 洗脱量的考察 取供试品 2 g(平行 3 份) ，精
密称定，按照 2. 3 项下的方法制备上柱溶液，加到
已处理好的聚酰胺(10 g)柱上(30 cm ×5 cm)，分别
用 6、8、10、12 倍量柱体积的 60%乙醇洗脱，收集
洗脱液，摇匀，精密量取 0. 3 mL 置10 mL容量瓶
中，照 2. 2 项下的方法自加入 5% 的亚硝酸钠
0. 4 mL起，依法测定吸光度。代入标准曲线，计算
总黄酮的浓度。精密量取洗脱液适量，置干燥至恒
重的蒸发皿中，水浴蒸干，105 ℃烘3 h，取出，置
干燥器中冷至室温，精密称重。计算所得纯化物中
总 黄 酮 的 含 量 分 别 为 31. 6%、 40. 5%、
49. 2%、42. 8%。
2. 4. 2 洗脱浓度的考察 取供试品 2 g(平行 3 份)，
精密称定，按照 2. 3 项下的方法制备上柱溶液，加
到已处理好的聚酰胺(10 g)柱上(30 cm × 5 cm) ，用
10 倍量柱体积的 50%、60%、70%、80% 乙醇洗
脱，收集洗脱液，摇匀，精密量取0. 3 mL置 10 mL
容量瓶中，照 2. 2 项下的方法自加入 5%的亚硝酸钠
0. 4 mL 起，依法测定吸光度。代入标准曲线，计算
总黄酮的浓度。精密量取洗脱液适量，置干燥至恒重
的蒸发皿中，水浴蒸干，105 ℃烘 3 h，取出，置干燥
器中冷至室温，精密称重。计算所得纯化物中总黄酮
的含量分别为 32. 4%、48. 6%、39. 2%、40. 6%。
2. 4. 3 上样量的考察 分别取供试品 1、2、3 g(平
行 3 份) ，精密称定，按照 2. 3 项下的方法制备上柱
溶液，加到已处理好的聚酰胺(10 g)柱上(30 cm ×
5 cm) ，分别用 10 倍量柱体积的 60%乙醇洗脱，收
集洗脱液，摇匀，精密量取 0. 3 mL 置10 mL容量瓶
中，照 2. 2 项下的方法自加入 5% 的亚硝酸钠
0. 4 mL起依法测定吸光度。代入标准曲线，计算总
黄酮的浓度。精密量取洗脱液适量，置干燥至恒重
的蒸发皿中，水浴蒸干，105 ℃烘 3 h，取出，置干
燥器中冷至室温，精密称重，计算所得纯化物中总
黄酮的含量分别为 51. 8%、48. 5%、46. 4%。
2. 5 结果
试验结果表明，最佳纯化条件为样品与聚酰胺
的比例为 1∶10，10 倍量柱体积的 60%乙醇洗脱。
2. 6 工艺验证
取供试品 5 g(平行 3 份)，精密称定，按照 2. 3
项下的方法制备上柱溶液，加到已处理好的聚酰胺
(50 g)柱上(30 cm × 5 cm) ，分别用 10 倍量柱体积
的 60%乙醇洗脱，收集洗脱液，摇匀，精密量取
0. 3 mL置 10 mL容量瓶中，照 2. 2 项下的方法自加
入 5%的亚硝酸钠 0. 4 mL 起，依法测定吸光度。代
入标准曲线，计算总黄酮的浓度。精密量取洗脱液
适量，置干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，
105 ℃烘 3 h，取出，置干燥器中冷至室温，精密称
重，计算所得纯化物中总黄酮的含量分别为 51. 6%，
52. 5%，50. 9%，表明优选的纯化工艺稳定可行。
3 结论与意义
采用薄层色谱法，猕猴桃藤粗提物色谱中在与
芦丁对照品相应的位置出现相同的斑点，表明猕猴
桃藤粗提物中含有芦丁，故本文选择芦丁作为对照
品测定猕猴桃藤粗提物纯化前后总黄酮的含量。本
文采用单因素试验，筛选影响猕猴桃藤粗提物中总
黄酮纯化效果的主要因素，并对优化的纯化工艺进
行放大试验验证，为猕猴桃藤总黄酮工业化生产及
开发利用提供参考。
本试验以芦丁为对照品，用紫外-分光光度法对
(下转第 135 页)
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报道的脂肽类物质的理化特征相近，推测可能是结
构相同或类似的脂肽类物质［8］。另外，本文用不同
极性的有机溶剂萃取发酵上清液，发现极性较大的
水饱和正丁醇萃取物具有较强的抑菌活性，说明
ge15 胞外分泌液中可能存在多种抗菌活性物质。
ge15 菌株经鉴定为寡养单胞菌 Stenotrophomonas
sp. ，有关该细菌的报道主要集中在芴［9］、苦马豆
素［10］、多环芳烃菲［11］、黄曲霉［12］等有毒有害物质
的生物脱毒以及土壤、水体的修复［13］等研究领域，
将该细菌用于植物病害防治的研究鲜有报道，仅见
张泽坤等［14］ 报 道 杨树中的内生寡养 单 胞 菌
Stenotrophomonas sp. 对三倍体毛白杨和枫香组培苗
的生根及幼苗生长有促进作用，但并未开展该菌株
的次生代谢产物的成分分析。本文在对 ge15 菌株开
展抑菌活性研究的基础上，就其次生代谢产物中的
抑菌活性成分开展了初步研究，基本明确了抑菌活
性物质的活性部位，这为菌株抑菌活性物质的分离
纯化、结构鉴定及抑菌机理研究奠定了良好基础;
另外，上述试验结果的获得也将有助于推动人参病
害的生物防治。
参考文献
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(收稿日期 2014-09-21
檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿
)
(上接第 131 页)
总黄酮进行含量测定，通过聚酰胺柱层析对猕猴桃
藤中总黄酮纯化效果进行筛选。结果表明，样品与
聚酰胺的比例为 1∶10，洗脱剂为 10 倍量柱体积 60%
的乙醇，所得纯化物中总黄酮含量最高，可达
51. 8%。本试验对优化的工艺进行放大试验验证，
结果纯化效果较为理想，纯化后总黄酮的含量可高
达 50%以上，与单因素考察所得的最佳纯化效果进
行比较，无显著差异。该纯化工艺简单、可行，重
复性好，可用于猕猴桃藤中总黄酮的纯化。
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