全 文 ：2． 2． 3 化合物 3 白色无定形粉末(甲醇) ，IR νmax(KBr)cm
－1:
3 410，3 317(－ OH) ，2 943，2 914，2 891，1 458，1 148，1 111，
1 051，1 026，998，916，839，776，648，624;MS m/z:149，131，103，
91，73，60，43，31。1H NMR(DMSO － d6)δ:5． 1(1H，d，J = 3． 6 Hz，
1 － H) ，4． 9(9H，s) ，3． 7(2H，sex)。13 CNMR(DMSO － d6)δ:93． 1
(1 － C) ，74． 0(3 － C) ，73(2 － C) ，72(5 － C) ，71． 0(4 － C) ，
61． 9(6 － C)。上述数据和文献［4］判断化合物 3 为葡萄糖
C6H12O6。
2． 2． 4 化合物 4 淡黄色粉末(甲醇) ，IR νmax(KBr)cm
－1:3 421
(OH) ，1 655(C = O) ，1 601，1 506，1 457(Ar) ，1 361，1 296，
1 204，1 063，1 013，943，879，807。MS m/z:302(基峰) ，273，245，
153，128，109。1H NMR(DMSO － d6)δ:6． 2(1H，d，J = 2． 4Hz，6 －
H) ，6． 4(1H，d，J = 2Hz，8 － H) ，6． 9(1H，dd，J = 8． 8Hz，5＇－ H) ，
7． 5(1H，dd，J = 1． 6Hz，J2 = 2． 4 Hz) ，5． 3(1H，d，J = 7． 6 Hz，葡萄
糖端基氢) ，4． 4(1H，d，J1 = 1． 6Hz，鼠李糖端基氢) ，1． 0(3H，鼠
李糖甲基氢)。13C NMR(DMSO － d6)δ:177． 4(4 － C) ，164． 1(7 －
C) ，161． 2(5 － C) ，156． 6(9 － C) ，156． 4(2 － C) ，133． 3(3 － C) ，
104(10 － C) ，98． 7(6 － C) ，93． 6(8 － C) ，148． 4(4 － C) ，144． 7
(3 － C) ，121． 6(6 － C) ，121． 2(1 － C) ，116． 3(5 － C) ，115． 2
(2 － C) ，芸香糖基上的碳的位移分别为:101． 2，74． 1，76． 4，
70． 6，75． 9，67． 0，100． 8，70． 6，70． 4，71． 8，68． 3，17． 8。上述数据
与文献报道［5］的芦丁 C27H30 O16基本相符，所以化合物 4 鉴定为
芦丁 C27H30O16。
3 讨论
4 个化合物均是首次从胃痛宁中分离出来，为胃痛宁进一步
的开发和应用提供了一定依据。但是本文只对胃痛宁的部分有
效部位的化学成分进行了研究，其他有效部位的化学成分还需进
一步的研究。
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收稿日期:2010-07-23; 修订日期:2010-11-30
基金项目:广西壮族自治区科学研究与技术开发计划项目(No． 0322024-5E);
广西研究生教育创新计划资助项目(No． 2006105981007D14)
作者简介:张士军(1974-) ，男(汉族) ，安徽望江人，现任广西医科大学副
教授，博士学位，主要从事抗肝病药研究工作．
* 通讯作者简介:黄仁彬(1955-) ，男(汉族) ，广西南宁人，现任广西医科
大学教授，博士研究生导师，博士学位，主要从事抗肝病和心血管药理学
研究工作．
复方六月青对实验性肝纤维化
大鼠肝脏超微结构的影响
张士军1，张志伟2，陈兆霓1，林 兴1，付书婕1，黄仁彬 1*
(1．广西医科大学，广西 南宁 530021; 2． 广西中医学院附属瑞康医院，广西 南宁 530011)
摘要:目的 研究复方六月青(CLYQ)对实验性肝纤维化大鼠肝脏超微结构的影响。方法 SD大鼠皮下注射(s． c．)CCl4
建立实验性肝纤维化大鼠模型，随机分为 5 组:模型对照组，阳性对照组，CLYQ高剂量组、中剂量组、低剂量组，并设正常
SD大鼠为空白对照组。模型组和空白对照组灌胃(i． g．)生理盐水，其他组 i． g．相应的药物，连续 4 周。于肝左叶同一部
位取肝组织约 1 cm × 1 cm × 1 cm大小，固定于 10%中性福尔马林溶液，作光镜观察;另一部分约 1 cm × 1 cm × 1 cm 大
小，固定于 2． 5%戊二醛作电镜观察。结果 CLYQ高、中剂量组大鼠肝脏肝小叶结构完整，汇管区有少量纤维组织增生。
CLYQ低剂量组肝细胞排列紊乱，肝小叶结构有破坏，尚完整，结节周围纤维组织增生，少量炎细胞浸润。结论 CLYQ 能
有效地减轻肝组织病理损害，抑制肝纤维化形成，从而发挥其抗肝纤维化的作用。
关键词:复方六月青; 肝纤维化; 肝脏超微结构
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2011． 06． 030
中图分类号:R285． 5 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2011)06-1351-02
六月青系爵床科(Acanthaceae)肖鸡笼属植物肖鸡笼 Tara-
phochlamys affinis(Giff)Bremekhu 的干燥地上部分［1］，为广西民
族特色草药。由六月青、白花蛇舌草、栀子花根等组成的复方六
月青(CLYQ，又称复方六月雪) ，是根据长时期的临床观察而拟
定的治疗急慢性乙型肝炎的验方，民间常用于治疗急性黄疸性肝
炎的湿热黄疸等证。本课题组首次对该方进了大量的研究，我们
发现 CLYQ体外和体内均可有效地抑制乙型肝炎病毒 DNA的复
制，显著降低 HBsAg 和 HBeAg 的滴度［2 ～ 5］，此外，研究尚发现
CLYQ对小鼠急性化学性肝损伤均有明显的保护作用［6］，我们的
实验结果初步显示 CLYQ在抗乙肝病毒、保护肝脏方面具有良好
的作用。本实验是前期系列研究的一部分，采用 CCl4 诱导大鼠
肝纤维化模型，研究 CLYQ对实验性肝纤维化大鼠肝脏超微结构
的影响，进一步完善 CLYQ 的药效学研究，为把该方开发成抗乙
肝病毒中药新药提供实验依据。
1 材料与仪器
1． 1 药物 CLYQ，由广西医科大学药理学教研室采用醇水双提
的最佳工艺提取［7］。
1． 2 动物 SPF 级 SD(Sprague － Dawley)大鼠，雄性，体质量
(230 ± 30)g;由广西医科大学实验动物中心提供。试验动物生产
许可证:SCXKG桂 2003 － 0003，试验动物使用许可证:SYKG 桂
2003 － 0005。
1． 3 试剂 秋水仙碱:云南昊邦制药有限公司;四氧化锇、醋酸
铀:英国 Johnson Matthey Chemicals Limited 公司;环氧树脂 618:
上海树脂厂;枸橼酸铅:天津天大化工实验厂。
1． 4 仪器 LKB － V 超薄切片机:瑞士 LKB 公司;LeicaDMR +
Q550 荧光显微镜:德国 Leica 公司;JEM － 1200EX 型透射电镜:
日本电子公司。
2 方法
2． 1 CCl4 诱发实验性肝纤维化大鼠模型的建立 SD 雄性大鼠
按体质量随机分为 2 组:空白对照组及肝纤维化模型组。肝纤维
化模型组 100 只，背部 s． c． CCl4 造模，剂量 0． 3 ml /100 g，每周 2
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2011 VOL ． 22 NO． 6 时珍国医国药 2011 年第 22 卷第 6 期
次。空白对照组 10 只，采用生理盐水背部 s． c．，剂量同肝纤维化
模型组，每周 2 次。分别于造模后第 4 周、第 5 周及第 6 周抽取 2
只肝纤维化大鼠及 1 只正常对照组大鼠，进行病理学检查，监测
肝纤维化形成的情况。
2． 2 实验分组及用药 选择肝纤维化大鼠 50 只，随机分为以下
5 组，每组 10 只。①模型对照组:等量的生理盐水;②阳性对照
组:秋水仙碱，0． 2 mg /(kg·d) ;③CLYQ高剂量组:30 mg /(kg·
d) ;④CLYQ中剂量组:15 mg /(kg·d) ;⑤CLYQ 低剂量组:7． 5
mg /(kg·d)。未注射 CCl4 造模的空白对照组给予等量的生理
盐水。实验期间各组动物标准饲料，在同样条件下饲养，均以每
天 1 次 i． g．连续给药 4 周。每天观察大鼠一般状况、饮食变化、
行为变化、毛发变化。末次给药 24 h 后，戊巴比妥钠麻醉，打开
腹腔，于肝左叶同一部位取肝组织约 1 cm × 1 cm × 1 cm大小，固
定于 10%中性福尔马林溶液，作光镜观察;另一部分约 1 cm × 1
cm × 1 cm大小，固定于 2． 5%戊二醛作电镜观察用。
2． 3 HE染色病理学检查 各组大鼠肝脏标本以 10%中性福尔
马林溶液固定，常规脱水，石蜡包埋，经石蜡包埋后切片，HE 染
色，光镜下观察肝组织纤维化程度。
2． 4 透射电子显微镜下观察肝细胞超微结构改变 将固定
2． 5%戊二醛的肝脏组织放入安瓿瓶，向装有 1 mm × 1 mm × 1
mm左右大小细胞团的安剖瓶中加入适量 4℃预冷的 2． 5%戊二
醛固定 2 h 或过夜，PBS 4℃漂洗 10 min × 3 次，经 1%四氧化锇
4℃固定 2h后，PBS 4℃漂洗 10 min × 3 次，50%乙醇 4℃脱水 10
min，70%乙醇脱水 10 min，80%乙醇脱水 10 min，90%乙醇脱水
10 min，90%(乙醇 1 ∶ 1 丙酮)脱水 10 min，90% 丙酮脱水 10
min，100%丙酮脱水 10 min × 3 次，环氧树脂包埋 4 ～ 6 h，36 ～ 60
℃聚合，修块，作 0． 05 ～ 0． 07 μm厚薄切片，醋酸双氧铀及枸椽酸
铅染色［8］，JEM － 1200EX型透射电子显微镜观察，照相冲洗。
3 结果
3． 1 HE染色病理学结果 正常对照组:大鼠肝小叶为类圆形，
结构完整，肝小叶肝细胞排列整齐，表现肝细胞以中央静脉为中
心，呈放射状排列，肝细胞未见变性和坏死;中央静脉、肝窦也未
见充血、出血和水肿;汇管区未见纤维组织增生等病理改变。模
型对照组:正常肝小叶结构被破坏，由大小不等的圆形或椭圆形
肝细胞结节所构成的假小所取代，结节周围纤维组织增生，少量
炎细胞浸润。CLYQ高、中剂量组与阳性对照组很相似:肝细胞
排列紊乱，肝小叶结构完整，汇管区有少量纤维组织增生。CLYQ
低剂量组:肝细胞排列紊乱，肝小叶结构有破坏，尚完整，结节周
围纤维组织增生，少量炎细胞浸润。结果见图 1。
图 1 各实验组肝组织病理学图片(HE染色 100 ×)
3． 2 透射电镜观察 CLYQ 对实验性肝纤维化大鼠肝脏超微结
构的影响 电镜下正常大鼠肝脏组织细胞形态清晰，细胞膜、核膜
完整，胞核大小适中，核仁轮廓清晰，胞浆粗面内质网、核糖体丰
富，线粒体丰富、完整、膜清晰，肝窦周间隙未见纤维沉积，窦内可
见 KUFF细胞;模型对照组大鼠肝脏组织细胞明显变性、坏死，内
质网扩张呈大囊泡，线粒体肿胀呈球形，内见高密度物质，肝细胞
周边胶原纤维增生明显;可见大量成纤维细胞;窦周纤维化;狄氏
间隙明显扩张，可见成脂细胞;阳性对照组大鼠肝组织肝细胞正
常伴有淋巴细胞浸润，可见巨型线粒体，内质网扩张，有脂滴，脂
肪变性，核膜皱缩，线粒体丰富，形态略有差异;CLYQ 高剂量组
大鼠肝细胞大多正常，少量肝细胞凋亡小体，个别细胞坏死，窦周
少量胶原纤维丝或束，肝窦面微绒毛亦丰富，细胞胞间可见毛细
胆管，胞浆内内质网明显扩张，线粒体丰富、变大;CLYQ 中剂量
组大鼠肝细胞形态完好，线粒体丰富，形态良好，基质密度增高，
粗面内质网周围无脱颗粒现象，毛细胆管清晰可见;CLYQ 低剂
量组大鼠肝细胞正常，或有坏死，可见核分裂相、脂滴、脂质体，窦
周间隙胶原少量沉积。结果见图 2。
图 2 各实验组肝组织超微结构电镜照片(2 800 ×)
4 讨论
肝纤维化是多种慢性肝病发展的共同病理基础，也是慢性肝
炎、肝硬化等进一步发展、恶化的重要环节，是肝脏纤维组织的过
度沉积，是细胞外基质的合成大于降解的结果，其中心环节是肝
星状细胞的活化和向肌成纤维样细胞和成纤维细胞的转化，导致
大量细胞外基质(ECM)的合成，另一方面 ECM 的降解减少导致
其合成与降解的不平衡促进了肝纤维化形成。肝纤维化是肝硬
化的早期阶段和必经阶段，若病因持续存在，肝纤维化逐渐加重，
肝小叶及血管等逐渐被改建，肝脏的正常结构遭到破坏，中心静
脉区和汇管区出现间隔、假小叶形成，即发展为不可逆转的肝硬
化［9］。近年来大量实验及临床研究表明在此时如果病因消除并
经适当治疗，纤维化可被逐渐吸收，肝纤维化是可以逆转的［10］。
目前除病因治疗(通过作用于肝纤维化始动因子，间接发挥改善
纤维化的功能)外，阻抑、逆转肝纤维化进程成为非常重要的治
疗对策。
本实验分别采用光镜和电镜两种方法观察肝组织纤维化程
度和肝细胞超微结构改变，实验结果显示，正常对照组大鼠肝细
胞形态清晰，模型组大鼠肝细胞周边胶原纤维增生明显，CLYQ
作用后的肝纤维化大鼠肝组织较多正常，形态良好。本实验结果
从肝脏组织形态结构的客观改变进一步证明 CLYQ 有抗肝纤维
化的作用，与我们前期研究的结果相一致，值得进一步研究开发。
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