全 文 ：第 33 卷第 2 期
2014 年 4 月
中 国 野 生 植 物 资 源
Chinese Wild Plant Ｒesources
Vol． 33 No． 2
Apr． 2014
收稿日期:2013 － 08 － 18
基金项目:湖南省教育厅重点项目(09A073) ;吉首大学大学生研究性学习与创新实验项目。
作者简介:陈雅(1992 －) ，女，吉首大学生物资源与环境科学学院 2009 级生物科学专业学生。E-mail:Chenya52@ 126． com
* 通讯作者:陈功锡(1966 －) ，男，教授，主要从事植物学教学与研究工作。E-mail:chengongxi2011@ 163． com
doi:10． 3969 / j． issn． 1006 － 9690． 2014． 02． 007
红果参叶中总黄酮的提取工艺初步探讨
陈 雅1，李 贵2，吴帅玲1，张永康2，陈功锡1，2*
(1．吉首大学 生物资源与环境科学学院;2．植物资源保护与利用湖南省高校重点实验室，湖南 吉首 416000)
摘 要 目的:研究红果参叶中总黄酮的最佳提取工艺条件。方法:利用单因素和正交试验，考察提取时间、乙醇
溶液体积分数、液固比 3 个因素对总黄酮得率的影响。结果:红果参叶中总黄酮的最佳提取工艺条件为:85%(体
积分数)的乙醇作为提取溶剂、提取时间 10 min、料液比 1∶ 30(g /mL)。在此条件下，总黄酮提取率可达 4． 76%。结
论:乙醇超声法可用于红果参叶中总黄酮的提取，其中料液比对提取率的影响最大。
关键词 红果参叶;总黄酮;提取工艺
中图分类号:O6 － 332 文献标识码:A 文章编号:1006 － 9690(2014)02 － 0024 － 04
Preliminary Discussion on Extration of Total Flavonids from
the Leaves of“Hong Guoshen”Plant
Chen Ya1，Li Gui2，Wu Shuailing1，Zhang Yongkang2，Chen Gongxi1，2*
(1． College of Biology and Environmental Science，Jishou University;2． Key Laboratory of Plant Ｒe-
sources Protection and Utilization，College of Hunan Province，Jishou 416000，China)
Abstract Objective:To select out the optimal extraction procedure，the extraction time，ethanol con-
centration，and solvent consumption were adopted，as the factors to determine the optimum conditions for
detecting flavonoids in the leaves of Campanumoea lancifolia(Ｒoxb．)Merr． with UV spectrophotometry．
Ｒesults:The optimum extraction process was 85% (volume fraction) ethanol concentration，1 ∶ 30
(g /mL)solid-liquid ratio，10min of extraction time． With this understanding the extraction rate is the
highest，which can reach 4． 76% ． Conclusion:optimizing the extraction process of total flavonoids in the
leaves of Campanumoea lancifolia(Ｒoxb．)Merr． can provide a reference for further research of fla-
vonoids of Eucommia．
Key words the leaves of Campanumoea lancifolia(Ｒoxb． )Merr．;total flavonoids;extraction process
红果参系桔梗科(Campanulaceae)金钱豹属
(Campanumoea)长叶轮钟草［Campanumoea lancifo-
lia(Ｒoxb．)Merr．］的俗称，为湘西苗族传统药用植
物，同时由于其叶常绿、花果美丽，又深受人们喜爱，
因此可以做观赏植物。该植物为多年生，直立或蔓
性草本，茎高可达 3 m，肉质根胡萝卜状。《中华本
草》记载其有“治疗劳倦气虚乏力、跌打损伤、肠绞
痛”等效用。长期以来，湘西苗族人民以其肉质根
代替人参作为大病初愈后的滋补品，常称其为“南
方人参”。其果实称为“蜘蛛果”、“肉算盘”［1 － 2］，
美味可口，营养丰富，男女老少均喜食用。在春夏生
长旺季及冬季，老百姓常采其嫩叶作为蔬菜炒食，不
仅风味独特、美味可口，还有一定的保健功效。
黄酮类化合物在植物中广泛存在，并具有多种
多样的生物活性。有研究表明黄酮类化合物具有防
治神经性病变、延缓衰老［3］、加强 DNA 的保护 ［4］、
治疗冠心病、抗癌和抗 HIV 病毒等功效［5］。同时在
食品工业上，许多以黄酮类化合物为功能因子的保
健食品被开发，如孙建华［6］研制的黄酮绿豆饮料，
庞霞［7］研制的富含荷叶黄酮的黄酒，乌毡帽酒业有
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第 2 期 陈 雅，等:红果参叶中总黄酮的提取工艺初步探讨
限公司［8］研制的含有竹叶黄酮的清爽型黄酒等。
含有黄酮类物质的药物，保健品越来越受到人们的
青睐，其社会需求量大，市场前景广阔，因此从植物
中寻找黄酮资源越来越受到人们的重视。红果参全
株是宝，果实中含有的化学成分主要有糖类、生物
碱、黄酮类、酚类、蒽醌、甾体、三萜类、有机酸等［2］，
经实验初步测定红果参叶中含有黄酮，探究红果参
叶总黄酮提取工艺，可为红果参的开发利用奠定理
论基础，有助于其综合开发利用。
关于黄酮的提取方法多种多样，如热水提取法、
酶解法、超滤法、超临界 CO2 萃取法等
［9］，各种提取
方法各有特点。本实验采用乙醇超声法提取红果参
叶中的总黄酮，相对传统的醇提取法而言，缩短了提
取时间，提高了实验效率。
1 材料与方法
1． 1 材料、仪器与试剂
1． 1． 1 材料
红果参叶于 2011 年 12 月采自湖南省海拔 230
m的湘西吉首大学红果参试验基地。采样时，随机
摘取红果参的幼叶。采后将叶子迅速洗净、凉干，于
60 ℃下烘 24 h、粉碎，装袋，密封贮存，备用。
1． 1． 2 仪器
UV － 2550 型紫外 －可见分光光度仪，日本岛
津公司;SHB －3 循环水多用真空泵，西安禾普生物
仪器有限公司;F2102 型微型植物粉碎机，天津市泰
斯特仪器有限责任公司;FA2104N 型万分之一电子
天平，上海精密科学仪器有限公司;DCTZ － 2000 型
三频多用途恒温超声提取机，北京弘祥隆生物技术
有限公司。
1． 1． 3 试剂
芦丁标准品，中国医药集团上海化学试剂公司;
NaNO2、NaOH、Al(NO3)3、C2H5OH，所用试剂均为分
析纯。
1． 2 方法
1． 2． 1 芦丁标准溶液的配制
准确称取芦丁标准品 10． 6 mg，用体积分数
30%的乙醇溶解，并完全移入 50mL 容量瓶中，用
30%乙醇定容［10］，配置成 212 mg /L的芦丁溶液。
1． 2． 2 标准曲线的绘制
取 7 支试管依次加入质量分数为 212 mg /L 芦
丁溶液 0，1，2，3，4，5，6，7 mL，加蒸馏水补充至
10 mL，往各试管中加入质量分数 5% 的 NaNO2
1． 5 mL，摇匀，放置 6 min 后加入质量分数 10%的
Al(NO3)3 1． 5 mL，6 min 后再加入质量分数 4%的
NaOH溶液 20 mL，混匀，20 min 后以第一管为空白
参比，采用比色法在 510 nm波长下测定吸光度［10］。
以吸光度为横坐标，芦丁质量浓度为纵坐标，绘制标
准曲线。
1． 2． 3 溶剂法提取及含量测定
精确称取 1 g 干样，在一定条件下用乙醇浸提
超声后抽滤，滤液用 30%的乙醇定容到 50 mL 容量
瓶中;准确移取 4． 00 mL于 50 mL容量瓶中，用水再
次定容。准确移取 5． 00 mL 于锥形瓶中加水
5． 00 mL，按照 1． 2． 2 中所述的方法测定样品中总黄
酮提取得率(质量分数)。
黄酮提取得率计算公式:
Y(黄酮质量浓度 μg /mL)= 89． 745X(吸光值)－
0． 019 6
提取得率 = Y(μg /mL)×23mL ×50mL ×12． 5
样重(g)×5 mL ×1 000 ×1 000
×100%
1． 2． 4 提取条件优化
1． 2． 4． 1 乙醇浓度的选择
称取干样，在固液比为 1 ∶ 20，超声提取温度为
35 ℃，功率为 700 W，超声时间为 10 min的条件下，
分别用 50%、60%、70%、80%、90%的乙醇进行试
验，重复提取 3 次，计算得率。
1． 2． 4． 2 料液比的选择
称取干样，料液比分别为 1 ∶ 5、1 ∶ 10、1 ∶ 15、1 ∶
20、1∶ 30(g /mL) ，于 60%的乙醇溶液，在超声提取
温度为 35 ℃，功率为 700 W条件下超声 10 min，进
行试验，重复提取 3 次，计算得率。
1． 2． 4． 3 提取时间的选择
称取干样，在料液比 1∶ 10、乙醇浓度为 60%，在
超声提取温度为 35 ℃，功率为 700 W 的条件下分
别超声 5、10、15、20、30 min，进行试验，重复提取 3
次，计算得率。
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中 国 野 生 植 物 资 源 第 33 卷
1． 3 多因素正交实验
为寻求最佳工艺提取条件组合，在单因素考察
的基础上，选择乙醇浓度(A)、提取时间(B)、料液
比(C)、三个因素为考察因素，每个因素选择 3 个水
平，以总黄酮提取得率为指标，采用了 L9(3
4)正交
实验表安排实验，并确立因素水平表，见表 1。
表 1 正交表设计实验
水平
因素
A乙醇浓度 /% B提取时间 /min C料液比 /(g /m)
1 75 5 1∶ 10
2 80 10 1∶ 20
3 85 15 1∶ 30
2 结果与分析
2． 1 芦丁标准曲线
测得芦丁质量浓度 Y(μg /mL)及对应的吸光度
X，见图 1 所示。其标准曲线的回归方程为:Y =
89． 745X － 0． 019 6;相关系数 Ｒ2 = 0． 999 9，线性关
系良好，可用作红果参叶中总黄酮提取得率的测定。
图 1 芦丁标准曲线
2． 2 提取条件与得率的关系
2． 2． 1 乙醇浓度对提取得率的影响
由图 2 可知，红果参叶中总黄酮在提取时出现
两个乙醇浓度峰值，分别为 80% 乙醇(5． 37%)和
50% 乙醇(5． 26%) ;当乙醇浓度为 90%时，黄酮提
取得率最低为 4． 52%;其次为 60%、70%，黄酮提取
得率依次为 4． 98%、5． 01%;实验结果表明:用 80%
乙醇提取，黄酮得率可达到最大;另外，50%乙醇作
为提取溶剂可有效节约试剂。因此，超声提取的最
适乙醇浓度为 80%。
2． 2． 2 提取时间对黄酮提取得率的影响
由图 3 可知，随超声波处理时间的延长，总黄酮
提取率先上升，而后又下降，造成这种现象的原因是
在长时间超声作用下，提取率逐渐接近极限，提取物
中杂质也随之增加，黄酮提取得率反而降低，由上表
分析可知提取时间为 10 min、15 min、20 min 时黄酮
的提取率较高，分别为 4． 88%、4． 90%、4． 93%其中
提取时间 20 min时黄酮提取得率最高。
图 2 乙醇浓度对提取率的影响
图 3 提取时间对提取率的影响
2． 2． 3 料液比对提取得率的影响
不同的料液比会对目标成分的提取率产生影
响，在一定范围内溶剂量越多越利于目标物浸出，但
是过高的溶剂原料比会导致提取得率下降。本实验
中在 1∶ 10 到 1∶ 20 的范围内提取得率随料液比增大
而增大，在 1∶ 20 到 1∶ 25 的范围内提取得率随料液
比增大而减小，在料液比 1∶ 25 之后提取得率又开始
增大，在料液比为 1∶ 30 时黄酮提取得率达到最高值
为 5． 48%，但从总体来看随料液比的增大，总黄酮
提取得率增加。
图 4 料液比对提取率的影响
2． 3 正交实验结果
根据 1． 3 的实验方案开展正交试验设计，所得
结果如表 2 所示。
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第 2 期 陈 雅，等:红果参叶中总黄酮的提取工艺初步探讨
表 2 正交实验设计及结果
编号
A乙醇浓度 /
%
B提取时间 /
min
C料液比 /
(g / m) 误差
提取得率 /
%
1 75 5 10 1 2． 67
2 75 10 20 2 4． 67
3 75 15 30 3 4． 74
4 80 5 20 3 4． 16
5 80 10 30 1 4． 60
6 80 15 10 2 1． 20
7 85 5 30 2 4． 45
8 85 10 10 3 3． 65
9 85 15 20 1 4． 62
K1 4． 03 3． 76 2． 50 3． 96
K2 3． 32 4． 31 4． 48 3． 44
K3 4． 24 3． 52 4． 60 4． 18
Ｒ 0． 92 0． 79 2． 09 0． 74
在正交实验中，黄酮的提取得率由公式计算而
来。通过分析得出红果参叶中黄酮类化合物最佳提
取条件为 85%的乙醇浓度、提取时间 10 min、料液
比 1∶ 30。从表 2 可知:黄酮提取率的影响按大小次
序排列分别为 ＲC ＞ ＲA ＞ ＲB，即料液比 ＞乙醇浓度
＞提取时间，初步确定从红果参叶中提取黄酮类物
质的较佳方案为:A3B2C3，即最佳提取条件为 85%
的乙醇浓度、提取时间 10 min、料液比 1∶ 30。
2． 4 验证性试验
按最佳提取条件 85% 的乙醇浓度、提取时间
10 min、料液比 1∶ 30进行验证试验，设计 3 组平行试
验，取平均值，得最佳工艺下黄酮提取率为4． 76%。
3 结 论
该实验初步探究了红果参叶中总黄酮的最佳提
取工艺，确定了各因素对红果参叶中总黄酮提取率
的影响顺序为 C(料液比)＞ A(乙醇浓度)＞ B(提
取时间) ;最佳提取工艺条件为 85%的乙醇、10 min
的提取时间、1 ∶ 30 的料液比。在此条件下，黄酮类
化合物提取率可达 4． 76%。
从以上初步探究的结果来看，红果参叶中总黄
酮含量较高，但是其分离纯化工艺、生理活性等探究
工作有待进一步开展。为使红果参叶中的黄酮提取
实现工业化生产，可进一步探索红果参叶中总黄酮
提取参数，优化生产工艺，为其工业化生产奠定
基础。
与桔梗科其他两种最重要的药用植物相比较，
党参［11］(根)的黄酮提取得率为 2． 5%，桔梗［12］(根
部)的黄酮提取得率为 2． 87%，二者黄酮提取得率
都低于红果参的叶。此外，檀香叶［13］中总黄酮提取
得率可达 3． 24%，黄皮［14］叶中的可达 3． 62%，紫
苏［15］叶中的可达 4． 03%，银杏［16］中的可达5． 14%，
红果参叶中总黄酮的含量较紫苏、黄皮、檀香叶中的
高，稍低于银杏叶。可见，红果参叶中的黄酮含量丰
富，可能具有更高的开发利用价值。
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