全 文 ：第 28卷 第 1期
2 0 1 1 年 1 月
沈　阳　药　科　大　学　学　报
JournalofShenyangPharmaceuticalUniversity
Vol.28 　No.1
Jan.2011 p.40
收稿日期:2010-03-24
作者简介:谭亮(1984-), 男(藏族), 青海西宁人 , 硕士研究生 , E-mailtanliang0117@126.com;贾英(1969-), 女(汉
族),辽宁沈阳人 , 副教授 , 主要从事中药质量控制 、中药有效成分药动学研究 , Tel.18940017699, E-mailjiaying-
syphu@yahoo.com.cn。
文章编号:1006-2858(2011)01-0040-07
柱前衍生化 GC法测定旱芹非淀粉多糖中
各单糖组分含量
谭　亮 1 , 杨　洋1 , 张　琦 2 , 霍　鑫1 , 毕开顺 1 , 贾　英 2
(1.沈阳药科大学 药学院 ,辽宁 沈阳 110016;2.沈阳药科大学 中药学院 , 辽宁 沈阳 110016)
摘要:目的 建立测定旱芹非淀粉多糖中各单糖组分含量的柱前衍生化 GC法。 方法 非淀粉多糖
经衍生化生成糖腈乙酯 , 采用 GC法进行分析。色谱柱:DB-17柱(30 m×0.25 mm, 0.25 μm);柱
温:程序升温;载气:N
2
;进样温度:270℃;进样方式:不分流;检测器温度:270 ℃;进样量:1.0 μL。
结果 水不溶性非淀粉多糖(insolublenon-starchpolysaccharides, INSP)水解后得到 7种单糖 , 分别
是:L-(+)-鼠李糖 、L-(+)-阿拉伯糖 、D-(+)-岩藻糖 、D-(+)-木糖 、D-(+)-甘露糖 、D-(+)-葡萄
糖和 D-(+)-半乳糖;水溶性非淀粉多糖(solublenon-starchpolysaccharides, SNSP)水解后得到 6种
单糖 , 除无 D-(+)-岩藻糖外 ,其余均同 INSP水解后单糖。结论 本方法准确度高 , 重现性好 ,可用
于测定旱芹水溶性和水不溶性非淀粉多糖中各单糖组分的含量。
关键词:柱前衍生化;气相色谱法;旱芹;非淀粉多糖;单糖组分;含量测定
中图分类号:R917　　　文献标志码:A
　　旱芹为伞形科芹属植物旱芹(Apiumgraveo-
lensL.)的带根全草 。味甘 、辛 、微苦 ,性凉 。归
肝 、胃 、肺经 。能平肝 、清热 、去热 、解毒。主治肝
阳眩晕 、风热头痛 、面红目赤 、血淋 、痈肿 [ 1] 。现
代药理研究表明旱芹可作为治疗 HIV和其他病
毒感染的抗病毒药物;可治疗各种炎症;具有降血
压 、降血脂 、降血糖等作用 [ 2] 。旱芹的众多化学
成分中 ,旱芹多糖具有确切的药物效应 ,从最初提
高免疫功能到现在具有抗肿瘤 、抗病毒 、抗氧化 、
降血糖 、降血脂以及治疗艾滋病和心脑血管疾病
等药理作用 。目前天然药物化学与药理学研究工
作多侧重于脂溶性化学成分 ,如生物碱和苷类等 ,
而对多糖类有效成分重视不够 ,往往将多糖作为
杂质除去。作者以旱芹为研究对象 ,将提取所得
水不溶性非淀粉多糖(INSP)和水溶性非淀粉多
糖(SNSP)水解成单糖 ,各单糖结构式见图 1。采
用柱前衍生化气相色谱法 [ 3 -5] 对旱芹 SNSP和
INSP中各单糖组分的含量进行测定。
Fig.1　ChemicalstructuresofL-(+)-rhamnose(1), L-(+)-arabinose(2), D-(+)-fucose(3), D-(+)-xylose(4), D-
(+)-mannose(5), D-(+)-glucose(6)andD-(+)-galactose(7)
1　仪器与材料
GC-6890N气相色谱仪 、氢火焰离子化检测
器 、HPCORE色谱工作站(美国安捷伦公司)。
正己烷 、体积分数 95%乙醇(分析纯 ,天津大
茂化学试剂厂),盐酸羟胺 (分析纯 ,天津博迪化
工有限公司), 乙酸酐 (分析纯 , 沈阳东兴试剂
厂),吡啶(分析纯 ,天津科密欧化学试剂开发中
心),氯仿(分析纯 ,天津康科德科技有限公司),
三氟乙酸(分析纯 ,江苏泗阳青云精细化工厂)。
L-(+)-阿拉伯糖(批号 63000584)、L-(+)-鼠李
糖对照品(批号 111683-200401)(中国药品生物
制品检定所), D-(+)-岩藻糖对照品(上海晶纯
试剂 有限 公司 , 批 号 12121), 肌 醇 (批 号
20060925)、D-(+)-木糖 (批号 F20060531)、D-
(+)-甘露糖(批号 F20060620)、D-(+)-葡萄糖
(批 号 20080925)、 D-(+)-半 乳 糖 (批 号
F20061025)(国药集团化学试剂有限公司)。以
上对照品质量分数均≥ 99%。
旱芹由沈阳药科大学中药学院孙启时教授鉴
定为旱芹的地上部分 。产地来自沈阳(春季 、夏
季 、秋季)、河北 、新疆 、广州 、韩国 ,其药材来源见
表 1。
Table1　SourcesofApiumgraveolensL.
SampleNo. Sources
1 Shenyanginspring
2 Shenyanginsummer
3 Shenyanginautumn
4 Hebei
5 Xinjiang
6 Guangzhou
7 Korea
2　方法与结果
2.1　色谱条件
色谱 柱:DB- 17 柱 (30 m ×0.25 mm,
0.25μm);柱温:从 180℃以 3 ℃·min-1的速度升
温至 225 ℃,持续 2 min,再以 6 ℃·min-1的速度
升温至 260 ℃,持续 7 min;载气:N2;进样温度:
270℃;进样方式:不分流;检测器温度:270℃;进
样量:1.0μL。
2.2　旱芹样品制备
精密称取旱芹粉末 5.0 g,每个产地 3份 ,加
正己烷 30mL,置 80 ℃水浴加热回流 2次 ,每次
2 h,过滤 ,弃去滤液(除脂类成分)。药渣挥干溶
剂后加体积分数 80%乙醇溶液 30 mL,置 80℃水
浴加热回流 2次 ,每次 2 h,过滤 ,弃去滤液(除游
离单糖)。药渣烘干后加磷酸钠缓冲溶液(pH值
6.6)100 mL,加热至 100 ℃并保持 30 min(使淀
粉凝胶化 )。冷却至 75 ℃加 α-淀粉酶溶液
10mL,水解 16 h(除淀粉),上清液备用 。药渣烘
干后 ,加蒸馏水 30 mL,置 100 ℃水浴加热回流
2次 ,每次 2 h,滤过 ,滤液备用 ,药渣烘干后用于
INSP测定。合并滤液与上清液 ,浓缩至 40mL,加
Sevage试 剂 7 mL, 剧 烈 振 荡 20 min, 于
4 000 r·min-1离心 5 min,弃去中间变性蛋白层和
下层有机层 ,水相继续重复上述操作直至无变性
蛋白出现为止。向水相中加无水乙醇 180 mL,充
分振摇 ,静置过夜 。于 4 000 r·min-1离心 5 min,
弃去上清液 ,沉淀依次用无水乙醇 、丙酮和无水乙
醚各洗涤 3次 ,弃去有机溶剂后挥干沉淀 [ 6 -7] ,得
到黄白色颗粒状 SNSP。
不同产地或采收季节的 7个样品制得含 IN-
SP的药渣和 SNSP的质量见表 2。
Table2　Themassofresidueandsolublenon-starchpol-
ysaccharidesindifferentoriginssamples(n=3)
SampleNo. m(INSP)/g m(SNSP)/g
1 0.878 0.586 3
2 0.894 0.567 9
3 0.852 0.624 6
4 1.066 0.598 7
5 0.676 3 0.592 7
6 0.664 1 0.634 8
7 0.764 0 0.642 4
2.3　溶液制备
2.3.1　内标物肌醇六乙酸酯的制备及纯度检查
取肌醇 6.0 g,精密称定 ,加盐酸羟胺 9.0 g、
乙酸酐 90.0mL和吡啶 6.0 mL,置 90 ℃水浴加
热反应 2h,反应中不断振摇反应液 。冷却至室温
迅速倒入冰水中 ,析出肌醇六乙酸酯 。过滤 ,用水
洗涤数次 ,置烘箱中烘干备用。精密称取肌醇六
乙酸酯 10mg,加氯仿使溶解并定容至 10 mL,制
成质量浓度为 1.0 g·L-1的溶液 ,取 1.0 μL按
“2.1”条色谱条件进行分析 ,图谱显示单一色谱
峰 ,用面积归一化法计算 , 含量质量分数大于
41第 1期 谭　亮等:柱前衍生化 GC法测定旱芹非淀粉多糖中各单糖组分含量
99.5%,说明可作为内标物使用 [ 6 -8] 。
2.3.2　SNSP单糖衍生物溶液
分别精密称取 L-(+)-鼠李糖 8.70 mg、L-
(+)-阿拉伯糖 17.08 mg、D-(+)-木糖 4.34 mg、
D-(+)-甘 露 糖 4.05 mg、 D-(+)-葡 萄 糖
4.27mg、D-(+)-半乳糖 17.18 mg, 加盐酸羟胺
10.0mg、吡啶 0.5mL,加热溶解 ,置 90 ℃水浴加
热反应 50 min。冷却至室温 , 加乙酸酐 0.5 mL,
置 90℃水浴加热反应 50 min。 70 ℃ N2吹干除
去溶剂 ,残渣用氯仿溶解并转移至 1 mL量瓶中 ,
加氯仿稀释至刻度 ,摇匀 ,作为储备液 。分别精密
量取上述各储备液 200μL,加 1.0g·L-1肌醇六乙
酸酯溶液 20 μL,置同一 2 mL量瓶中 ,加氯仿稀
释至刻度 ,摇匀。封口 、冷藏 ,作为 SNSP混合单
糖储备液。
2.3.3　INSP单糖衍生物溶液
分别精密称取 L-(+)-鼠李糖 19.80 mg、L-
(+)-阿 拉伯 糖 20.10 mg、 D-(+)-岩藻 糖
4.22mg、D-(+)-木糖 20.18 mg、D-(+)-甘露糖
10.30mg、D-(+)-葡萄糖 19.70mg和 D-(+)-半
乳糖 20.06 mg, 加盐酸羟胺 10.0 mg、吡啶
0.5mL,加热溶解 ,置 90 ℃水浴加热反应 50 min。
冷却至室温 ,加乙酸酐 0.5mL,置 90 ℃水浴加热
反应 50 min。 70 ℃ N2吹干除去溶剂 ,残渣用氯
仿溶解并转移至 5 mL量瓶中 ,加氯仿稀释至刻
度 ,摇匀 ,作为储备液 。分别精密量取上述各储备
液 100 μL, 加 1.0 g·L-1肌醇六乙酸酯溶液
20μL,置同一 2 mL量瓶中 ,加氯仿稀释至刻度 ,
摇匀。封口 、冷藏 ,作为 INSP混合单糖储备液。
取该储备液 1.0 μL,按 “ 2.1”条色谱条件进行分
析 ,记录色谱图 ,见图 2(A)。
2.3.4　INSP水解与衍生化
精密称取药渣 20mg,加 2 mol·L-1三氟乙酸
溶液 1.0 mL,试管壁标记液面位置并塞上玻璃塞
以减少挥发 。置烘箱中 110℃水解 8h,反应过程
中每 20分钟左右检查液面位置的变化 ,并不断补
加三氟乙酸 。 70 ℃ N2 吹干除去溶剂。按
“ 2.3.3”条方法操作 , 加氯仿使溶解 , 同时加
1.0g·L-1的肌醇六乙酸酯溶液 100 μL并定容至
2 mL。取 1.0μL按 “2.1”条色谱条件进行分析。
记录色谱图 ,见图 2(B)。
2.3.5　SNSP水解与衍生化
精密称取 SNSP20mg,加 0.2mol·L-1三氟乙
酸溶液 2.0mL,试管壁标记液面位置并塞上玻璃
塞以减少挥发。置烘箱中 110℃水解 8h,反应过
程中每 20分钟左右检查液面位置的变化 ,并不断
补加三氟乙酸 。 70 ℃ N2 吹干除去溶剂。按
“ 2.3.2”条方法操作 , 加氯仿使溶解 , 同时加
1.0g·L-1的肌醇六乙酸酯溶液 100 μL并定容至
10mL。取 1.0 μL按 “ 2.1”条色谱条件进行分
析 ,记录色谱图 ,见图 2(C)。
1—L-(+)-Rhamnose;2—L-(+)-Arabinose;3—D-(+)-Fucose;4—D-(+)-Xylose;5—D-(+)-Mannose;6—D-(+)-
Glucose;7—D-(+)-Galactose;8—Insitol
Fig.2　GCchromatogramsofmixedstandardmonosaccharidesderivatives(A), hydrolyzedwaterinsolublenon-starch
polysaccharidesderivatives(B)andhydrolyzedwatersolublenon-starchpolysaccharidesderivatives(C)
2.4　线性关系考察
2.4.1　INSP各单糖标准曲线绘制
分别精密量取 INSP混合单糖衍生物溶液
0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL,置 2 mL量瓶中 ,
各加内标(1.0g·L-1肌醇六乙酸酯衍生物)溶液
1.0mL,加氯仿稀释至刻度 ,摇匀 ,作为系列标准
溶液。分别取 1.0 μL按 “ 2.1”条色谱条件进行
分析 , 记录色谱图。以单糖衍生物质量浓度
ρ(mg·L-1)为横坐标 ,单糖衍生物峰面积与内标
物峰面积比值 A(Ai/As)为纵坐标绘制标准曲线。
各单糖衍生物的回归方程及其线性关系见表 3。
42 沈　阳　药　科　大　学　学　报 第 28卷　
Table3　LinearityofmonosaccharidederivativesinINSP
Monosaccharide Regressionequation r ρ(linearrange)/(mg·L-1)
L-(+)-Rhamnose A=1.372×10-2 ρ-6.044×10-2 0.999 3 9.90-99.0
L-(+)-Arabinose A=6.345×10-3ρ-4.163×10-2 0.999 2 10.05-100.5
D-(+)-Fucose A=3.089×10-3ρ+2.825×10-3 0.999 4 2.110-21.10
D-(+)-Xylose A=1.913×10-3ρ-1.307×10-2 0.999 0 10.09-100.9
D-(+)-Mannose A=6.897×10-3 ρ-1.118×10-2 0.999 5 5.150-51.50
D-(+)-Glucose A=2.688×10-3 ρ+1.836×10-2 0.999 2 9.85-98.5
D-(+)-Galactose A=4.362×10-3 ρ-2.545×10-3 0.999 2 10.03-100.3
2.4.2　SNSP各单糖标准曲线绘制
分别精密量取 SNSP混合单糖衍生物溶液
0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL,置 2 mL量瓶中 ,
各加内标(1.0g·L-1肌醇六乙酸酯衍生物)溶液
1.0mL,加氯仿稀释至刻度 ,摇匀 ,作为系列标准
溶液。分别取 1.0 μL按 “ 2.1”条色谱条件进行
分析 , 记录色谱图。以单糖衍生物质量浓度
ρ(mg·L-1)为横坐标 ,单糖衍生物峰面积与内标
物峰面积比值 A(Ai/As)为纵坐标绘制标准曲线。
各单糖衍生物的回归方程及其线性关系见表 4。
Table4　LinearityofmonosaccharidederivativesinSNSP
Monosaccharide Regressionequation r ρ(linearrange)/(mg·L-1)
L-(+)-Rhamnose A=2.913×10-3ρ+2.470×10-1 0.999 0 43.50-435.0
L-(+)-Arabinose A=7.162×10-3ρ+7.247×10-2 0.999 1 85.4-854
D-(+)-Xylose A=2.299×10-3ρ+3.233×10-3 0.999 1 21.70-217.0
D-(+)-Mannose A=8.660×10-4ρ+4.274×10-2 0.999 2 20.25-202.5
D-(+)-Glucose A=1.627×10-3ρ+4.718×10-2 0.999 2 21.35-213.5
D-(+)-Galactose A=1.037×10-2ρ-8.180×10-2 0.999 0 85.9-859
2.5　精密度实验
取各单糖衍生物溶液 ,加内标物溶液 ,混匀 ,
取 1.0μL按 “2.1”条色谱条件重复进样 6次 ,记
录峰面积。 L-(+)-鼠李糖 、L-(+)-阿拉伯糖 、D-
(+)-岩藻糖 、D-(+)-木糖 、D-(+)-甘露糖 、D-
(+)-葡萄糖 、D-(+)-半乳糖衍生物与内标物峰
面积比值的 RSD分别为 2.3%、 2.6%、 2.0%、
2.8%、3.2%、2.0%、2.5%。结果表明仪器精密
度良好 。
2.6　重复性实验
分别精密称取 6份旱芹 SNSP和含 INSP的
药渣 20 mg,按 “2.3.4”和 “2.3.5”条方法操作 ,取
1.0μL按 “2.1”条色谱条件进行分析 ,记录峰面
积 。INSP中 L-(+)-鼠李糖 、L-(+)-阿拉伯糖 、
D-(+)-岩藻糖 、D-(+)-木糖 、D-(+)-甘露糖 、
D-(+)-葡萄糖 、D-(+)-半乳糖衍生物与内标物
峰面积比值的 RSD分别为 2.6%、3.0%、2.0%、
2.1%、2.9%、1.8%、3.2%;SNSP中 L-(+)-鼠李
糖 、L-(+)-阿拉伯糖 、D-(+)-木糖 、D-(+)-甘露
糖 、D-(+)-葡萄糖 、D-(+)-半乳糖衍生物与内
标物峰面积比值的 RSD分别为 1.6%、 1.2%、
3.6%、2.8%、2.2%、3.0%。结果表明方法重复
性良好 。
2.7　稳定性试验
取 “ 2.3.4”和 “ 2.3.5”条下的溶液(以沈阳
夏季为例 ), 室温放置 ,分别在 0、1、2、4、6、8、
10、12、24h时取 1.0 μL,按 “ 2.1”条色谱条件进
行分析 ,记录峰面积 。 INSP中 L-(+)-鼠李糖 、
L-(+)-阿拉伯糖 、D-(+)-岩藻糖 、D-(+)-木
糖 、D-(+)-甘露糖 、D-(+)-葡萄糖 、D-(+)-半
乳糖衍生物与内标物峰面积比值的 RSD分别为
2.9%、 3.0%、 3.2%、 1.6%、 2.8%、 2.7%、
2.8%;SNSP中 L-(+)-鼠李糖 、L-(+)-阿拉伯
糖 、D-(+)-木糖 、D-(+)-甘露糖 、D-(+)-葡萄
糖 、D-(+)-半乳糖衍生物与内标物峰面积比值
的 RSD分别 为 3.2%、 2.5%、 3.1%、 3.0%、
2.3%、2.8%。结果表明各单糖衍生化产物室
温放置 24 h内稳定 。
2.8　回收率实验
采用加样回收法。分别精密称取 9份旱芹
(沈阳夏季)药渣和 SNSP各 10mg,分别加高 、中 、
低 3个不同质量浓度的各单糖混合溶液和内标物
43第 1期 谭　亮等:柱前衍生化 GC法测定旱芹非淀粉多糖中各单糖组分含量
溶液 , 每一质量浓度制备 3份 , 按 “ 2.3.4”和
“ 2.3.5”条方法操作 ,取 1.0 μL按 “ 2.1”条色谱
条件进行分析 ,记录各峰面积与内标物峰面积比
值 A(Ai/As)。结果见表 5、6。
Table5　ResultofrecoveriesofmonosaccharideinINSP(n=9)
Component moriginal/mg madded/mg mfound/mg Recovery/% Meanrecovery/% RSD/%
L-(+)-Rhamnose 0.046 6 0.022 9 0.067 5 91.4
0.045 9 0.045 7 0.087 5 91.2 91.3 2.2
0.045 9 0.068 6 0.108 5 91.3
L-(+)-Arabinose 0.114 5 0.056 2 0.166 1 91.8
0.112 7 0.112 3 0.214 8 90.9 91.5 2.5
0.112 7 0.168 5 0.267 6 91.9
D-(+)-Fucose 0.075 9 0.037 2 0.111 3 95.1
0.074 7 0.074 4 0.145 3 94.9 94.0 1.9
0.074 7 0.111 6 0.177 4 92.1
D-(+)-Xylose 0.899 0.440 5 1.317 94.9
0.884 0.881 1.686 91.0 93.4 2.8
0.884 1.322 2.131 94.3
D-(+)-Mannose 0.105 7 0.051 8 0.152 5 90.4
0.103 9 0.103 6 0.198 0 90.8 90.8 1.9
0.103 9 0.155 4 0.245 9 91.4
D-(+)-Glucose 0.711 2 0.348 7 1.039 94.1
0.699 6 0.697 3 1.346 92.7 93.4 1.8
0.699 6 1.046 1.678 93.6
D-(+)-Galactose 0.324 5 0.159 1 0.469 0 90.8
0.319 2 0.318 1 0.613 1 92.4 92.2 2.0
0.319 2 0.477 2 0.765 0 93.4
Table6　ResultofrecoveriesofmonosaccharideinSNSP(n=9)
Component moriginal/mg madded/mg mfound/mg Recovery/% Meanrecovery/% RSD/%
L-(+)-Rhamnose 1.808 0.881 2.627 93.1
1.761 1.761 3.375 91.7 92.1 1.8
1.784 2.642 4.202 91.5
L-(+)-Arabinose 1.584 0.771 5 2.286 91.0
1.543 1.543 3.000 94.4 92.7 2.7
1.564 2.315 3.707 92.6
D-(+)-Xylose 0.695 8 0.338 9 1.008 92.1
0.677 7 0.677 7 1.289 90.3 90.9 1.6
0.686 7 1.017 1.606 90.4
D-(+)-Mannose 1.679 0.818 2.452 94.6
1.635 1.635 3.141 92.1 93.6 2.0
1.657 2.453 3.965 94.1
D-(+)-Glucose 1.435 0.699 0 2.074 91.4
1.398 1.398 2.670 91.0 91.8 2.2
1.417 2.097 3.368 93.0
D-(+)-Galactose 1.090 0.531 0 1.573 90.8
1.062 1.062 2.031 91.2 90.8 1.5
1.076 1.597 2.521 90.5
44 沈　阳　药　科　大　学　学　报 第 28卷　
2.9　样品含量测定
分别精密称取沈阳 (春季 、夏季 、秋季)、河
北 、新疆 、广州 、韩国的旱芹药渣和 SNSP20 mg,
每个收集地 3份 ,分别按 “2.3.4”和 “ 2.3.5”条方
法操作 ,取 1.0 μL按 “2.1”条色谱条件进行分
析 。记录各峰面积值 ,根据所测得单糖衍生物与
内标物峰面积比值以标准曲线法计算 ,求得各单
糖在药渣和 SNSP中的含量 , 以及 INSP和 SNSP
在旱芹干粉中的含量 。结果见表 7。
Table7　Content(c)ofeachmonosaccharideinnon-starchpolysaccharides(n=3)
SampleNo. Catego-rization
c/(mg·g-1)
L-(+)-
Rhamnose
L-(+)-
Arabinose
D-(+)-
Fucose
D-(+)-
Xylose
D-(+)-
Mannose
D-(+)-
Glucose
D-(+)-
Galactose
Sumof
content
Contentin
origins
samples
1 INSP 6.605 20.02 15.04 80.4 17.06 126.9 60.66 326.6 57.38
SNSP 113.1 191.5 - 33.78 183.7 179.7 219.2 920 108.0
2 INSP 4.570 11.23 7.441 88.1 10.36 69.73 31.81 223.2 39.93
SNSP 176.1 154.3 - 67.77 163.5 139.8 106.2 807 91.7
3 INSP 11.34 28.19 16.52 171.0 14.25 85.3 61.45 388.0 66.14
SNSP 128.0 187.7 - 24.63 216.9 241.8 166.7 966 120.6
4 INSP 16.18 20.59 12.14 185.9 10.12 61.18 35.32 341.4 72.79
SNSP 103.4 437.9 - 88.8 24.70 81.5 114.1 850 101.8
5 INSP 8.81 31.28 8.73 105.4 17.11 94.4 21.63 287.4 38.88
SNSP 129.2 441.7 - 51.81 29.72 108.6 131.7 893 105.8
6 INSP 10.94 28.25 18.52 190.6 19.00 126.7 73.31 467.3 62.06
SNSP 277.6 281.9 - 126.4 113.4 91.9 88.4 980 124.4
7 INSP 10.30 30.85 18.61 171.5 12.06 141.7 67.89 452.9 69.21
SNSP 126.6 447.4 - 36.52 71.39 127.7 146.4 956 122.8
3　讨论
a.作者采用水提醇沉的方法提取出旱芹非
淀粉多糖 , 加正己烷除脂类物质 , 加体积分数
80%乙醇除游离单糖 ,加 α-淀粉酶除去淀粉 ,加
Sevage试剂除蛋白 , 制得 SNSP和含 INSP的药
渣 。通过硫酸-蒽酮实验和碱性酒石酸铜实验鉴
别确证了所制供试品为多糖 ,用 Feling试剂 、碘试
液 、苏丹Ⅲ染液 、双缩脲试剂对制得的 SNSP进行
了纯度检查 。结果表明 ,建立的多糖提取方法使
得所制旱芹 SNSP中不含有脂类物质 、游离单糖 、
淀粉 、蛋白质等杂质。
b.作者采用了糖醇乙酯衍生化法和糖腈乙
酯衍生化法对水解后得到的单糖进行衍生化 ,结
果显示:糖醇乙酯衍生化法操作繁琐 ,周期长 ,还
原步骤所用 NaBH4稳定性差 ,遇空气易自解;乙
酸乙酯萃取有机层中的糖醇酯时 ,操作繁琐 ,萃取
不彻底 ,以致引起较大误差。而糖腈乙酯衍生化
法不存在以上的问题 ,而且操作简便 、周期短 ,适
用于分析多糖中各单糖组分含量。故最终采用糖
腈乙酯衍生化法进行含量测定 。
c.在多糖水解反应液置烘箱中 110 ℃水解
时 ,所加试剂三氟乙酸具有挥发性 ,高温条件下易
从试管中挥出而使其体积减少 ,从而造成多糖水
解不完全。因此在加入三氟乙酸溶液后 ,在试管
壁标记液面位置塞上玻璃塞以减少挥发。反应过
程中每隔一段时间检查液面位置的变化 ,并不断
补加三氟乙酸。
从气相色谱图中可见 ,组成 INSP的各单糖
分离度均大于 1.5,符合分离度及含量测定的要
求 。但有少数产地 SNSP水解得到的 D-(+)-岩
藻糖与其位于 2号峰的 L-(+)-阿拉伯糖分离
度小于 1,改变色谱条件也无法达到含量测定的
要求 ,因又考虑到 D-(+)-岩藻糖峰面积很小 ,
故在本研究中未测定部分产地 SNSP中岩藻糖
的含量 。
d.由 GC数据分析可知:旱芹中 SNSP和 IN-
SP水解后均得到多个不同单糖 , 说明旱芹中
SNSP和 INSP均为杂多糖;旱芹中 SNSP的含量
比 INSP的含量平均多 3倍左右;所收集样品中 ,
45第 1期 谭　亮等:柱前衍生化 GC法测定旱芹非淀粉多糖中各单糖组分含量
韩国旱芹中 NSP含量最高 ,沈阳夏季旱芹中 NSP
含量最低。
参考文献:
[ 1] 南京中医药大学.中药大辞典 [ M] .2版.上海:上海
科学技术出版社 , 2006:1561.
[ 2] 夏薇 ,隋焕平 , 邱隽.芹菜提取物对喂饲高脂饲料大
鼠血脂的影响 [ J] .中国公共卫生 , 2001, 17(4):
337-338.
[ 3] 张艳萍 ,俞志远.气相色谱法分析羊栖菜多糖的单糖
组成及其含量 [ J] .粮油食品科技 , 2006, 14(2):50 -
52.
[ 4] 崔莉凤 ,王微.气相色谱法测定芦荟及芦荟干粉中的
多糖 [ J] .分析测试技术与仪器 , 2002, 8(2):111 -
115.
[ 5] 戴金凤 ,李磊.紫萁多糖单糖组成及摩尔比 GC分析
[ J] .江西农业大学学报 , 2001, 23(4):492-494.
[ 6] 石俊英 , 李宝国 , 牟彩萍.山东地产药材北沙参多糖
含量测定 [ J] .山东中医药大学学报 , 2002, 26(27):
139-142.
[ 7] 刘吉成 ,牛英才.多糖药物学 [ M] .北京:人民卫生出
版社 , 2008:58-62.
Determinationofthecontentsofmonosaccharide
componentsinnon-starchpolysaccharidesofaerial
partofApiumgraveolensL.bypre-columnderivat-
izationGC
TANLiang1 , YANGYang1 , ZHANGQi2 , HUOXin1 , BIKai-shun1 , JIAYing2
(1.SchoolofPharmacy, ShenyangPharmaceuticalUniversity, Shenyang110016, China;2.SchoolofTradi-
tionalChineseMateriaMedica, ShenyangPharmaceuticalUniversity, Shenyang110016, China)
Abstract:ObjectiveToestablishpre-columnderivatizationGCmethodfordeterminationofmonosaccharide
componentofnon-starchpolysaccharidesoftheaerialpartofApiumgraveolensL.MethodsThederivatives
weredeterminedbyGCandDB-17 column(30 m×0.25 mm, 0.25 μm)wasused.Theinlettemperature
wasmaintainedfor270℃.Thecolumnovenwasbegunat180℃, thenprogrammedfrom180℃ to225℃
at3 ℃·min-1 , holdfor2 min, thenprogrammedfrom225 ℃ to260℃ at6 ℃·min-1 , andfinaly, holdfor
7 min.Mannerofsampleinjectionwassplitless.Detectortemperaturewasmaintainedat270 ℃.Samplea-
mountwas1.0 μL.ResultsSevenmonosaccharidesL-(+)-rhamnose, L-(+)-arabinose, D-(+)-fucose,
D-(+)-xylose, D-(+)-mannose, D-(+)-glucoseandD-(+)-galactoseweredeterminedinINSP.Except
D-(+)-fucose, othersixmonosaccharideswerethesameasfromINSPinSNSP.ConclusionsThemethod
isaccurateandreproducible, whichissuitableforthedeterminationofmonosaccharidecomponentinsoluble
andinsolublenon-starchpolysaccharidesinApiumgraveolensL.
Keywords:pre-columnderivatization;GC;ApiumgraveolensL.;non-starchpolysaccharide;monosaccha-
ridecomponent;contentdetermination
46 沈　阳　药　科　大　学　学　报 第 28卷