全 文 ：一测多评技术在赶黄草药材质量评价中的应用
陀扬凌，娄涛涛，欧小洪，张　旭＊
（成都中医药大学 药学院 中药材标准化教育部重点实验室 四川省中药资源系统研究
与开发利用重点实验室 省部共建国家重点实验室培育基地，四川 成都６１１１７５）
摘　要：目的：建立测定赶黄草中３种成分（没食子酸、儿茶素、槲皮苷）的一测多评方法，验证此方法在
赶黄草质量评价中的可行性和技术适应性。方法：以赶黄草为研究对象，以没食子酸为内参物，建立儿
茶素、槲皮苷与没食子酸之间的相对校正因子。采用外标法测定赶黄草中没食子酸的含量，通过待测成
分间的相对校正因子计算赶黄草中其他２种成分的含量，并采用相对误差对一测多评法的计算值与外
标法实测值进行评价，同时采用ＳＰＳＳ１９．０计算两种方法的Ｐｅａｒｓｏｎ相关系数。结果：两种方法的计算
结果没有显著性差异，相对误差＜５％；儿茶素的相关系数为０．９９９，槲皮苷的相关系数为０．９９５，两种方
法呈正向直线相关。结论：一测多评方法用于测定赶黄草中多种有效成分准确可行、操作简便，为进一
步建立赶黄草药材及相关制剂科学完善的质量评价方法奠定了基础。
关键词：赶黄草；一测多评技术；没食子酸；儿茶素；槲皮苷
中图分类号：Ｒ２８４．１　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１６７３－２１９７（２０１６）０３－００１９－０４
ＤＯＩ：１０．１１９５４／ｙｔｃｔｙｙ．２０１６０３００８
收稿日期：２０１５－０８－１８
基金项目：四川省教育厅重点项目（２０１０Ａ０３６）
作者简介：陀扬凌（１９８８－），女，成都中医药大学硕士研究生，研究方向为中药化学和中药质量控制。Ｅ－ｍａｉｌ：８３７９２０８１７＠ｑｑ．ｃｏｍ
通讯作者：张旭（１９６０－），男，博士，成都中医药大学副教授，研究方向为中药化学和中药质量控制。Ｅ－ｍａｉｌ：１６４２９５１１＠ｑｑ．ｃｏｍ
Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＱＡＭＳ　ｉｎ　Ｑｕａｌｉｔｙ　Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐｅｎｔｈｏｒｕｍ　ｃｈｉｎｅｎｓｅ　Ｐｕｒｓｈ
Ｔｕｏ　Ｙａｎｌｉｎｇ，Ｌｕｏ　Ｔａｏｔａｏ，Ｏｕ　Ｘｉａｏｈｏｎｇ，Ｚｈａｎｇ　Ｘｕ＊
（Ｔｈｅ　Ｍｉｎｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｈｅｒｂａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ
Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ａｎｄ　Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ　ｉｎ　Ｓｉｃｈｕａｎ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｋｅｙ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｂｒｅｅｄｉｎｇ　Ｂａｓｅ　ｏｆ　Ｃｏ－ｆｏｕｎｄｅｄ　ｂｙ　Ｓｉｃｈｕａｎ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ　ａｎｄ　ＭＯＳＴ，Ｐｈａｒｍａｃｙ　Ｃｏｌｅｇｅ，
Ｃｈｅｎｇｄｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｃｈｅｎｇｄｕ　６１１１７５，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａ　ｎｅｗ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｎ　ｍｕｌｔｉ－ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｂｙ　ｓｉｎｇｌｅ　ｍａｒｋｅｒ（ＱＡＭＳ）ａｎｄ　ｖａｌｉ－
ｄａｔｅ　ｉｔｓ　ｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙ　ａｎｄ　ｔｅｃｈｎｉｃａｌ　ａｄａｐｔａｂｉｌｉｔｙ　ｉｎ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｎ　Ｐｅｎｔｈｏｒｕｍ　ｃｈｉｎｅｎｓｅ　Ｐｕｒｓｈ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　３ｍａｉｎ
ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ（ｇａｌｉｃ　ａｃｉｄ，ｃａｔｅｃｈｉｎ，ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｍｕｌｔｉ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｂｙ　ｓｉｎｇｌｅ－ｍａｒｋｅｒ（ＱＡＭＳ）
ｗａｓ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ａｎｄ　ｖａｌｉｄａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　Ｐｅｎｔｈｏｒｕｍ　ｃｈｉｎｅｎｓｅ　Ｐｕｒｓｈ．ｔｈｒｅｅ　ｍａｉｎ　ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ｅｖａｌｕａｔｅｄ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ
ｆａｃｔｏｒｓ（ＲＣＦｓ）ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ＨＰＬＣ．Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ｇａｌｉｃ　ａｃｉｄ，ｉｎ　ｔｈｅ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｏｆ　Ｐｅｎｔｈｏｒｕｍ　ｃｈｉｎｅｎｓｅ　Ｐｕｒｓｈ　ｗｅｒｅ　ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ
ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ｅｘｔｅｒｎａｌ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｍｅｔｈｏｄ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｗｏ　ｏｔｈｅｒ　ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅｉｒＲＣＦ．Ｔｏ　ｃｏｍｐａｒｅ　ｔｈｅ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　ＱＡＭＳ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｘｔｅｒｎａｌ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｎ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｅｒｒｏｒ，ａｎｄ　ｕｓｅ　ｔｗｏ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｍｅｔｈｏｄ　ｔｏ　ｃａｌｃｕｌａｔｅ　Ｓｐａｓｓ
１９．０Ｐｅａｒｓｏｎ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅｒｅ　ｉｓ　ｎｏ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｗｏ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎ　ｒｅｓｕｌｔｓ，ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｖｅ
ｅｒｒｏｒ＜５％．Ｔｈｅ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ｏｆ　Ｃａｔｅｃｈｉｎ　ｉｓ　０．９９９，ｔｈｅ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ｏｆ　ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ　ｉｓ　０．９９５，ｔｗｏ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｗｅｒｅ　ｐｏｓｉ－
ｔｉｖｅｌｙ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｓｔｒａｉｇｈｔ　ｌｉｎｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ　ＱＡＭＳ　ｉｓ　ｆｅａｓｉｂｌｅ　ａｎｄ　ａｃｃｕｒａｔｅ　ｔｏ　ｅｖａｌｕａｔｅ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　Ｐｅｎｔｈｏｒｕｍ　ｃｈｉｎｅｎｓｅ
Ｐｕｒｓｈ，Ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｂｕｉｌｄ　ｔｈｅ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　Ｐｅｎｔｈｏｒｕｍ　ｃｈｉｎｅｎｓｅ　Ｐｕｒｓｈ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｐｅｎｔｈｏｒｕｍ　Ｃｈｉｎｅｎｓｅ　Ｐｕｒｓｈ；ＱＡＭＳ；Ｇａｌｉｃ　Ａｃｉｄ；Ｃａｔｅｃｈｉｎ；Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ
　　赶黄草（Ｐｅｎｔｈｏｒｕｍ　Ｃｈｉｎｅｎｓｅ　Ｐｕｒｓｈ），又名水泽兰、水杨
柳、扯根菜等，为虎耳草科（Ｓａｘｉｆｒａｇａｃｅａｅ）扯根菜属植物扯
根菜的地上部分。现代药理学研究表明，赶黄草具有抗氧
化、抗肝炎和降血脂等［１－３］作用。赶黄草中含有黄酮、有机酸
—９１—
类等成分，其中没食子酸、槲皮素为已知的具有抗乙肝病毒
和保肝作用的成分［４］，而儿茶素具有很强的抗氧化作用［５］。
近年来，因其在临床上治疗肝炎疗效明显，市场对其原料需
求量急剧攀升。为评价赶黄草的质量，需建立科学完善的
质量评价方法，保证赶黄草质量安全可控。目前赶黄草药
材、饮片及其成方制剂主要以单一指标成分，如槲皮素来控
制质量，且赶黄草中槲皮素的测定是通过酸化水解槲皮苷
进行。中药疗效为多成分、多中心、多靶点综合作用的结
果，以单一成分评价赶黄草的内在质量有失偏颇。为较为
客观、全面地评价赶黄草药材的品质，本文采用一测多评技
术对赶黄草进行多指标有效成分质量控制，即以价廉易得、
质量稳定的没食子酸对照品为内标物，通过建立其与儿茶
素、槲皮苷的相对校对因子进行含量计算，可降低检测成本
和提高方法的实用性，现报道如下。
１　材料与仪器
ＳＳＩ　ｓｅｒｉｅｓ１５００高效液相色谱仪（美国ＳＳＩ公司）；Ａｇｉ－
ｌｅｎｔ　１２００高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；岛津 ＬＣ－
２０ＡＴ高效液相色谱仪（日本岛津公司）；ＫＱ３２００Ｂ型超声
波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；ＤＶ２１５ＣＤ电子天平
（赛多利斯科学仪器（北京）有限公司）。２０批赶黄草叶、花
样品分别购自四川５家药材公司（见表１），由成都中医药大
学马俞英教授鉴定为赶黄草Ｐｅｎｔｈｏｒｕｍ　ｃｈｉｎｅｎｓｅ　Ｐｕｒｓｈ的
地上部位。药材标本保存在成都中医药大学药学楼６０６实
验室。没食子酸对照品（成都曼斯特生物有限公司，批号：
ｍｕｓｔ－１３０４０１０３），儿茶素对照品（成都曼斯特生物有限公司，
批号：ｍｕｓｔ－１４０７２２１０）；槲皮苷对照品（成都曼斯特生物有限
公司，批号：ｍｕｓｔ－１４０９２１０５）。实验用乙腈、磷酸为色谱纯，
甲醇均为分析纯。试验用水为乐百氏纯净水。
表１　赶黄草药材来源
收集日期 编号 产地 购买单位 部位
２０１３－０９－１２ Ｈ１ 泸州泸县 泸州百草堂中药饮片有限公司 花
２０１３－０９－２８ Ｈ２ 泸州古蔺 古蔺宏安药业有限公司 花
２０１３－１１－１２ Ｈ３ 都江堰 四川御鼎堂中药饮片有限公司 花
２０１３－１１－１５ Ｈ４ 泸州古蔺 四川锦云堂中药饮片有限公司 花
２０１４－０３－１８ Ｈ５ 泸州古蔺 泸州百草堂中药饮片有限公司 花
２０１４－０３－１８ Ｈ６ 泸州古蔺 四川御鼎堂中药饮片有限公司 花
２０１４－０５－２０ Ｈ７ 都江堰 四川锦云堂中药饮片有限公司 花
２０１４－０５－０７ Ｈ８ 泸州古蔺 古蔺宏安药业有限公司 花
２０１４－０５－２０ Ｈ９ 泸州古蔺 四川新荷花中药饮片股份有限公司 花
２０１４－０９－０６ Ｈ１０泸州古蔺 泸州百草堂中药饮片有限公司 花
２０１４－１１－１３ Ｈ１１泸州古蔺 古蔺宏安药业有限公司 花
２０１４－１１－１４ Ｈ１２泸州古蔺 四川御鼎堂中药饮片有限公司 花
２０１４－１１－２０ Ｈ１３泸州古蔺 四川新荷花中药饮片股份有限公司 花
２０１４－０３－１８ Ｙ１ 泸州古蔺 泸州百草堂中药饮片有限公司 叶
２０１４－０３－１８ Ｙ２ 泸州古蔺 四川御鼎堂中药饮片有限公司 叶
２０１４－０５－２０ Ｙ３ 都江堰 四川锦云堂中药饮片有限公司 叶
２０１４－０５－０７ Ｙ４ 泸州古蔺 古蔺宏安药业有限公司 叶
２０１４－０５－２０ Ｙ５ 泸州古蔺 四川新荷花中药饮片股份有限公司 叶
２０１４－０９－０６ Ｙ６ 泸州古蔺 泸州百草堂中药饮片有限公司 叶
２０１４－１１－１３ Ｙ７ 泸州古蔺 古蔺宏安药业有限公司 叶
２０１４－１１－１４ Ｙ８ 泸州古蔺 四川御鼎堂中药饮片有限公司 叶
２　方法与结果
２．１　一测多评方法学考察
２．１．１　色谱条件　色谱柱：ｄｉａｍａｏｎｓｉｌ　Ｃ１８（２５０ｍｍ×４．６
ｍｍ，５μｍ）；流动相：乙腈（Ａ）－０．１％磷酸水（Ｂ），梯度洗脱：
０～２ｍｉｎ，１０％～１０％Ａ；２～１８ｍｉｎ，１０％～１４％Ａ；１８～
２５ｍｉｎ，１４％ ～２０％Ａ；２５～４０ｍｉｎ；２０％ ～２５％Ａ；４０～
４５ｍｉｎ，２５％～１０％Ａ；４５～５０ｍｉｎ，１０％～１０％Ａ；检测波长：
２８０ｎｍ；柱温：３０℃；流速：０．８ｍＬ·ｍｉｎ－１；进样量：１０μＬ。在
上述色谱条件下，各组分分离度、对称因子良好，见图１。
图１　赶黄草药材中３种黄酮色谱
２．１．２　混合对照品溶液制备　精密称取没食子酸对照品
１２．７３ｍｇ、儿茶素对照品７０．４５ｍｇ、槲皮苷对照品３６．３ｍｇ，
置于５０ｍＬ容量瓶中，加甲醇至刻度，溶解摇匀，即得。
２．１．３　混合对照品溶液制备　精密量取混合对照品溶液
５ｍＬ，置于２５ｍＬ容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
２．１．４　供试品溶液制备　称取赶黄草１ｇ，置于具塞锥形
瓶中，加入５０％甲醇４０ｍＬ，超声处理４０ｍｉｎ，放冷，过滤，定
容至５０ｍＬ容量瓶中，加５０％甲醇至刻度，摇匀，即得。
２．１．５　线性范围考察　分别精密量取混合对照品０．６、
０．８、１．０、１．２、１．４、１．６ｍＬ，分别置于５ｍＬ容量瓶中，用甲醇
—０２—
稀释至刻度，摇匀，进样分析，每个浓度进样３次，取平均
值。以进样量对峰面积积分值进行线性回归处理，得没食
子酸、儿茶素、槲皮苷的标准曲线方程见表２。
表２　赶黄草中３种黄酮标准曲线
组分 回归方程 相关系数 进样范围（ｍｇ·ｍＬ－１）
没食子酸 Ｙ＝１０７　Ｘ＋１８１　０４２　 ０．９９９　５　 ０．０３０　５５～０．０８１　４７
儿茶素 Ｙ＝４×１０６　Ｘ＋３　９８９．３　０．９９９　６　 ０．１６９　１～０．４５０　９
槲皮苷 Ｙ＝２×１０７　Ｘ－１０９　４０１　０．９９９　８　 ０．０８７　１２～０．２３２　３
２．１．６　精密度试验　精密吸取同一供试品溶液１０μＬ，连
续进样６次，记录没食子酸、儿茶素、槲皮苷的峰面积，得精
密度ＲＳＤ％值分别为１．３８％、１．３２％、０．８１％。表明仪器精
密度良好。
２．１．７　稳定性试验 　精密吸取同一供试品溶液１０μＬ分
别于配制后０、２、４、８、１２、２４ｈ进样测定峰面积，没食子酸、
儿茶素、槲皮苷峰面积积分 ＲＳＤ％ 值分别为 ２．３６％、
２．９０％，３．０８％，表明样品在２４ｈ内性质稳定。
２．１．８　重复性试验 　称取赶黄草（编号：Ｈ２）药材粉末
（４０目）约１ｇ，共６份，精密称定，按照“２．１．４”项下制备供
试品溶液，测得没食子酸、儿茶素、槲皮苷平均含量分别为
１．４４４　３、９．４６１　２、６．５６１　２ｍｇ·ｇ－１，ＲＳＤ％值分别为１．
３７％、２．２７％、２．０６％。
２．１．９　加样回收率试验　取已测得没食子酸、儿茶素、槲
皮苷含量的赶黄草样品（编号：Ｈ２）约０．５ｇ，共６份，精密称
定。按照５０％的取样量＋余下５０％含量的对照品平行做６
份的方法，加入一定量“２．１．２”项下混合对照品溶液４ｍＬ，按
照“２．１．４”项下制备供试品溶液，计算加样回收率，没食子
酸、儿茶素、槲皮苷的加样回收率分别为９８．１４％、９９．２０％、
９８．８８％，ＲＳＤ％值分别为１．６２％、３．３９％、２．９５％。
２．２　校正因子计算
取绘制标准曲线的系列浓度对照品溶液，注入液相色
谱仪测定，以没食子酸为内标物，根据相对校正因子计算公
式：ｆｍｎ＝ｆｍ／ｆｎ＝（Ｗｍ×Ａｎ）／（Ｗｎ×Ａｍ），其中 Ｗｎ 为内标物
浓度，Ａｎ为内标物峰面积，Ａｍ为其他组分的峰面积，Ｗｍ 为
其他组分的浓度。计算儿茶素和槲皮苷的校正因子（ｒｅｌａ－
ｔｉｖｅ　ｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒ，ＲＣ）［６］，结果见表３。
表３　赶黄草黄酮相对校正因子
编号 ｆ儿茶素／没食子酸 ｆ槲皮苷／没食子酸
１　 ０．１９０　６　 １．０５９　６
２　 ０．１９１　８　 １．０５４　５
３　 ０．１８３　９　 １．０２２　３
４　 ０．１９１　７　 １．０５３　５
５　 ０．１８６　１　 １．０３１　３
６　 ０．１８５　２　 １．０１３　９
平均值 ０．１８８　２　 １．０３９　２
ＲＳＤ（％） １．８９　 １．８５
２．３　校正因子重现性考察
考察了ＳＳＩ　ｓｅｒｉｅｓ１５００、Ａｇｉｌｅｎｔ　１２００及岛津ＬＣ－２０ＡＴ
３台高效液相色谱仪，使用４根不同品牌和型号的色谱柱：
Ｉｎｔｅｒｔｓｉｌ　Ｃ１８（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），Ｗｏｎｄａｓｉｌ　Ｃ１８（４．６ｍｍ
×２５０ｍｍ，５μｍ），Ａｌｔｉｍａ　Ｃ１８（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），Ｄｉ－
ｍａｓｉｌ　Ｃ１８（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），取混合对照品溶液１０μＬ
注入液相色谱仪，以没食子酸为内参物，计算儿茶素和槲皮
苷的校正因子（ＲＣＦ），结果见表４和表５。
表４　不同高效液相色谱测得的相对校正因子
不同高效液相色谱仪 ｆ儿茶素／没食子酸 ｆ槲皮苷／没食子酸
Ａｇｉｌｅｎｇｔ１２００　 ０．１８７　４　 １．０２８　７
ＳＳＩ　ｓｅｒｉｅｓ　１５００　 ０．１９１　８　 １．０５４　５
岛津ＬＣ－２０ＡＴ　 ０．１９８　６　 ０．９７４　７
平均值 ０．１９２　６　 １．０１９　３
ＲＳＤ（％） ２．９３　 ３．９９
表５　不同色谱柱测得的相对校正因子
不同色谱柱 ｆ儿茶素／没食子酸 ｆ槲皮苷／没食子酸
ｉｎｔｅｒｔｓｉｌ　 ０．１９５　３　 ０．９９３　３
ｗｏｎｄａｓｉｌ　 ０．１９０　９　 ０．９８３　４
ａｌｔｉｍａ　 ０．２０６　１　 １．０５７　６
ｄｉｍａｓｉｌ　 ０．１８７　４　 １．０２８　７
平均值 ０．１９４　９　 １．０１５　７
ＲＳＤ％ ４．１７　 ３．３５
２．４　待测组分色谱峰的定位
色谱峰准确定位是保证一测多评法应用的前提，一般
采用保留时间差（△ｔ）或相对保留时间（ｒ）等参数结合色谱
图整体特征及每个峰的紫外光谱特征来定位［７］。在本试验
中，分别考察了不同色谱柱、不同仪器的△ｔ和ｒ。不同色谱
柱考 察 中 △ｔ儿茶素／没食子酸 为 ９．０４７　０，△ｔ槲皮苷／没食子酸 为
３０．７９９　３，ｒ儿茶素／没食子酸为２．８７０　１，ｒ槲皮苷／没食子酸 为７．４１７　９；不
同高 效 液 相 色 谱 仪 考 察 中 △ｔ儿茶素／没食子酸 为 ９．８５８　３，
△ｔ槲皮苷／没食子酸为３２．３０５　５，ｒ儿茶素／没食子酸为３．１６０　２，ｒ槲皮苷／没食子酸
为８．１４５　７。其中不同色谱柱和不同高效液相色谱仪的相
对保留时间（ｒ）ＲＳＤ＜５％，而且保留时间差 ＲＳＤ＞５％，因
此以相对保留时间结合紫外吸收特征进行定位是可行的，
可以正确判断出目标峰的位置。
２．５　一测多评法与外标法测定结果比较
首先采用外标法对赶黄草中３种黄酮类成分进行多成
分同步含量测定，再用建立的 ＱＡＭＳ法对其含量进行计
算，并对２种方法所得结果进行比较，以验证ＱＡＭＳ法用于
赶黄草蒽醌类成分多指标质量评价的准确性。结果表明，２
种方法测得的黄酮类成分含量无显著性差异，相对偏差＜
５％，表明建立的方法具有较高的可信度，见表６。
２．６　统计学方法验证［８］
对从厂家收集到的２１批样品通过一测多评方法和常
规外标法测得赶黄草中３种黄酮类成分的含量结果进行比
较，并分别计算Ｐｅａｒｓｏｎ相关系数。验证一测多评方法用于
赶黄草中黄酮类成分测定的准确性，为进一步推广至饮片
或剂型奠定基础。
２．６．１　儿茶素含量测定外标法与一测多评法的相关系
数分析　先以外标法表示横轴（ｘ轴），一测多评法表示纵
轴（ｙ轴），在直角坐标系上画出散点图，有直线趋势，采用积
差相关系数进行直线相关分析：假设 Ｈ０＝总体相关系数ｐ
＝０；外标法与一测多评法间无直接相关关系。Ｈ１：Ｐ不等
于０，α＝０．０５。以外标法和一测多评法为变量名，建立数据
文件，应用ＳＰＳＳ１９．０统计学软件计算。外标法和一测多评
的Ｐｅａｒｓｏｎ相关系数ｒ＝０．９９９，Ｐ值＝０．０００，按α＝０．０５水
准拒绝 Ｈ０，接受 Ｈ１ 可以认为儿茶素含量测定外标法和一
测多评法呈正向直线相关。结果见表７。
—１２—
表６　ＱＡＭＳ法与外标法测得赶黄草中蒽醌类成分含量 （ｍｇ／ｍＬ）
批号
没食子酸
含量
儿茶素含量
外标法 一测多评法 相对误差（％）
槲皮苷含量
外标法 一测多评法 相对误差（％）
Ｈ１　 １．４０４　１　 ９．０９５　８　 ９．１５６　６　 ０．６６　 ６．１３６　９　 ６．１７５　４　 ０．６２
Ｈ２　 １．８２１　６　 １０．１４８　３　 １０．１８２　６　 ０．３４　 ７．２９４　８　 ７．６２４　９　 ４．３３
Ｈ３　 １．３５０　７　 ８．６６９　０　 ８．６９８　３　 ０．３４　 ５．６０７　４　 ５．７５５　２　 ２．５７
Ｈ４　 １．５５６　５　 １０．１４１　８　 １０．１９６　０　 ０．５３　 ６．９５０　４　 ６．８４０　０　 １．６１
Ｈ５　 １．４３８　０　 １１．１０５　６　 １１．０４３　１　 ０．５７　 ６．８７１　３　 ６．８８０　８　 ０．１４
Ｈ６　 １．３１５　３　 １１．３５６　６　 １１．３９５　０　 ０．３４　 ６．８１４　８　 ６．９５４　２　 ２．０１
Ｈ７　 １．４２７　５　 ９．４１５　５　 ９．４６７　３　 ０．５５　 ６．２７７　９　 ６．３４６　６　 １．０８
Ｈ８　 １．８４９　５　 １０．８４５　６　 １０．９８２　３　 １．２４　 ８．０１２　７　 ８．０５３　９　 ０．５１
Ｈ９　 １．３７５　７　 ９．１７７　９　 ９．４０８　９　 ２．４６　 ６．２４３　１　 ６．２２１　８　 ０．３４
Ｈ１０　 １．５７４　６　 １０．２１３　５　 １０．２４８　１　 ０．３４　 ７．０５３　１　 ７．０５２　９　 ０．００
Ｈ１１　 １．４１８　１　 １１．５６８　０　 １２．０１７　１　 ３．７４　 ７．２９７　５　 ７．３１７　６　 ０．２８
Ｈ１２　 １．３０９　２　 １１．２３５　５　 １１．２９３　４　 ０．５１　 ６．０９１　７　 ６．１５０　２　 ０．９５
Ｈ１３　 １．４９７　７　 １２．９０８　９　 １２．８５２　５　 ０．４４　 ６．４７３　１　 ６．４４２　１　 ０．４８
Ｙ１　 ０．４９４　８　 ２７．５２７　３　 ２７．２３５　８　 １．０７　 ８．２４７　６　 ８．４１２　２　 １．９６
Ｙ２　 ０．５２３　６　 ２６．７０７　１　 ２６．４５４　１　 ０．９６　 ８．６１７　０　 ８．３８４　５　 ２．７７
Ｙ３　 ０．５２７　７　 ２９．１９５　１　 ２７．８２５　４　 ４．９２　 ９．０６８　６　 ９．１５６　０　 ０．９５
Ｙ４　 ０．５７４　６　 ２８．０１７　７　 ２７．７０３　２　 １．１４　 ８．７０４　８　 ８．９０３　０　 ２．２３
Ｙ５　 ０．５４５　２　 ２７．７９９　０　 ２６．７８４　８　 ３．７９　 ９．０１１　１　 ９．２５１　７　 ２．６０
Ｙ６　 ０．５１２　５　 ２９．５７０　５　 ２９．１８３　２　 １．３３　 ８．９６４　７　 ９．１３４　９　 １．８６
Ｙ７　 ０．５２１　７　 ２９．３１６　３　 ２８．６２０　９　 ２．４３　 ９．０４８　２　 ９．３１９　１　 ２．９１
Ｙ８　 ０．５２１　６　 ２８．１１０　６　 ２６．８９９　２ －４．５０　 ９．１９８　５　 ９．２７０　５ －０．７８
表７　儿茶素相关系数输出结果外标法
外标法（Ｘ） 　　　　　一测多评法（ｙ）
外标法（Ｘ） Ｐｅａｒｓｏｎ　Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　１　 ０．９９９＊＊
Ｓｉｇ．（２－ｔａｉｌｅｄ） ０．０００
Ｎ　 ２１　 ２１
一测多评法（ｙ）Ｐｅａｒｓｏｎ　Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　０．９９９＊＊ １
Ｓｉｇ．（２－ｔａｉｌｅｄ） ０．０００
Ｎ　 ２１　 ２１
＊＊．Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｉｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ａｔ　ｔｈｅ　０．０１ｌｅｖｅｌ（２－ｔａｉｌｅｄ）．
２．６．２　槲皮苷含量测定外标法与一测多评法的相关系
数分析　以外标法和一测多评法为变量名，建立数据文件
槲皮苷ＳＰＳＳ．ｓａｖ。槲皮苷含量测定外标法和一测多评的
Ｐｅａｒｓｏｎ相关系数ｒ＝０．９９５，Ｐ值＝０．０００，按α＝０．０５水准
拒绝 Ｈ０，接受 Ｈ１，可以认为槲皮苷含量测定外标法和一测
多评法呈正向直线相关，结果见表８。
表８　槲皮苷相关系数输出结果外标法
外标法（Ｘ） 　　　　　一测多评法（ｙ）
外标法（Ｘ） Ｐｅａｒｓｏｎ　Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　１　 ０．９９５＊＊
Ｓｉｇ．（２－ｔａｉｌｅｄ） ０．０００
Ｎ　 ２１　 ２１
一测多评法（ｙ）Ｐｅａｒｓｏｎ　Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　０．９９５＊＊ １
Ｓｉｇ．（２－ｔａｉｌｅｄ） ０．０００
Ｎ　 ２１　 ２１
＊＊．Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｉｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ａｔ　ｔｈｅ　０．０１ｌｅｖｅｌ（２－ｔａｉｌｅｄ）．
３　讨论
从紫外吸收光谱图来看，没食子酸的最大吸收波长为
２７０ｎｍ，儿茶素的最大吸收波长为２８０ｎｍ，槲皮苷的最大吸
收波长为２６０ｎｍ和３６０ｎｍ，在２８０ｎｍ处为波谷。在２７０ｎｍ
处，三种指标性成分都有较好的吸收，故本试验的检测波长
定为２７０ｎｍ。
校正因子的计算方法包括多点校正法和斜率校正法，
而斜率校正法是在回归方程Ｙ＝ａＸ＋ｂ中，Ｘ＝（Ｙ－ｂ）／ａ＝
Ｙ／ａ－ｂ／ａ，由于 ｂ值通常为误差引起，在ａ／ｂ值大于１００
时，ｂ／ａ值可以忽略不计，此时可以按照 Ｘ＝Ｙ／ａ直接计
算［９］。从标准曲线方程的斜率计算，没食子酸的回归方程
式中的ａ／ｂ值都小于１００，ｂ／ａ值不可以忽略不计，此时不可
以按Ｘ＝Ｙ／ａ直接计算，故本试验没有采用斜率校正法计算
校正因子。
校正因子计算的结果和不同色谱柱、不同仪器的考察
结果ＲＳＤ％＜５％，一测多评法与外标法含量结果比较，相
对误差小于５％。采用统计学方法验证一测多评法和外标
法，结果两种方法呈正向直线相关，为进一步建立赶黄草药
材及相关制剂科学完善的质量评价方法奠定了基础。
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（责任编辑：尹晨茹）
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