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不同采收期赶黄草中总黄酮的含量测定



全 文 :泸州医学院学报 2010 年 第 33 卷 第 4 期
Journal of Luzhou Medical College Vol.33 No.4 2010
不同采收期赶黄草中总黄酮的含量测定 *
余 昕,朱 烨,向 芬,税丕先
(泸州医学院药学院中药实验室,四川泸州 646000)
摘 要 目的:比较不同产区不同采收期的赶黄草总黄酮的含量以及商品赶黄草叶和全草中总黄酮的含量。 方法:采用紫外
分光光度法,以芦丁作为对照,在 510nm 处测定总黄酮的含量。 结果:商品赶黄草叶的总黄酮含量明显高于全草中总黄酮的含
量,四个采收期的赶黄草总黄酮的含量从高到低为:果期>花前期>花期>花蕾期。 结论:建议赶黄草适宜采收期为果期,商品药
材中应重视叶的比例。
关键词 赶黄草;总黄酮;含量测定
中图分类号 R931.6 文献标识码 A 文章编号 1000-2669(2010)4-0370-03
DETERMINATION OF TOTAL FLAVONES OF PENTHORUM
AT DIFFERENT HARVSET TIME
Yu Xin, et al
Department of Pharmacy Traditional Chinese Medicine Laboratory, Luzhou Medical College
Abstract Objective:To compare the content of total flavones of Penthorum in different areas, at different
harvest time, and of the leaf and whole plant. Methods:By UV spectrophotometry, the content of total flavones
was determinated at 510nm. Results: The content of total flavones in the commodity Penthorum leaves was much
higher than the whole plant; the content of total flavones at four different harvest times was: fruit period>pre-
flower period>pflower period>bud period. Conclusion: The reasonable harvest time of Penthorum is at the fruit
period, and the proportion of leaves in commodity Penthorum should be high.
Key words Penthorum; Total flavones; Determination
*基金项目:四川省教育厅重点课题(编号: 07ZA041)
作者简介:余 昕(1983-),女,助理实验师
通讯作者:税丕先(1967-),男,副教授
赶黄草,在民间又名水泽兰、水杨柳等,学名扯
根菜, 是虎耳草科扯根菜属植物扯根菜 Penthorum
chinense Pursh. 的干燥地上部分。 赶黄草为四川泸
州古蔺县的民间药材,分布于海拔 1000 米左右的乌
蒙山麓原始森林。始载于明代《救荒本草》,现收载于
《中华人民共和国卫生部部颁标准中药成方制剂十
三册》附录[1]。 《中药大辞典》[2]和《四川中药志》[3]也均
有记载。赶黄草是苗族民间治疗肝病的经验方,称她
为“神仙草”,其性温、味甘、无毒,具清热解毒、利尿
消肿、活血、平肝、健脾、祛黄疸等功效,主治黄疸、水
肿、经闭、血崩、带下、跌打损伤,以及各型肝炎、胆囊
炎、脂肪肝等[4]。 现代研究表明赶黄草中总黄酮对肝
损伤具保护作用,能恢复肝脏功能,减低饮酒及药物
对肝脏的损害, 抑制肝纤维化、 肝硬化, 并对甲
肝、乙肝、慢性活动性肝炎具有显著的治疗作用 [5、6]。
本实验通过比较不同产区不同采收期的赶黄草总黄
酮的含量以及商品赶黄草叶和全草中总黄酮的含
量, 为选择商品药材的适宜采收期及药用部位提供
依据。
1 材料仪器
1.1 材 料
采自四川省泸州市古蔺县三个产区(万寿村、罗
江村、回龙村)、四个采收期(花前期、花蕾期、花期、
果期)的赶黄草药材,以及三个产区的商品药材的叶
论著
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和全草,共 18 个样品,经泸州医学院生药学教研室
税丕先副教授鉴定, 均为虎耳草科扯根菜属植物赶
黄草(Penthorum chinense Pursh.);芦丁标准品(中国
药品生物制品鉴定所,批号 080-9303)。 乙醇、亚硝
酸钠(重庆北碚精细化工厂)、硝酸铝(重庆北碚精细
化工厂)、氢氧化钠(天津市化学试剂三厂),均为分
析纯。
1.2 仪 器
AS3120A 型超声提取器 (天津 Automatic Sci-
ence);QE-200g 粉碎机 (武县屹立工具有限公司);
SHZ-95A 型循环水式多用真空泵(巩义莫峪予华仪
器厂);FA/JA1104N 型分析天平(上海民桥精密科学
仪器有限公司);UV-2100 型双光束紫外可见分光光
度计及配套比色皿(北京瑞利);DHG-9077A 电热恒
温干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)。
2 方法与结果
2.1 对照品溶液的配制
精密称取 4.8mg 芦丁标准品到容量瓶中, 加少
量 70%乙醇, 超声使之完全溶解, 冷却后, 定容至
25ml,摇匀,即得 0.192mg/ml的芦丁标准液。
2.2 最大吸收波长的确定
用移液管精密吸取芦丁标准品溶液 1.0ml 置于
25ml 容量瓶中, 先加入 5%的亚硝酸钠溶液 1.0ml,
摇匀后放置 5min,加入 10%的硝酸铝溶液 1.0ml,摇
匀后放置 5min,再加入 4%的氢氧化钠溶液 10.0ml,
加 70%的乙醇至刻度,混匀,静置 15min,以上述不
加芦丁标准液的混合液为空白参照 , 在 200nm~
900nm波长范围内扫描, 选择吸收度值最大时的波
长 510nm为芦丁标准品的最大特征吸收波长。 结果
见附图。
2.3 标准曲线的制备
用移液管精密吸取芦丁标准液 0.0ml、1.0ml、
2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml、6.0ml 分别置于 25ml 容量
瓶中,照“2.2最大吸收波长的确定”项下显色,混匀,
静置 15min, 在 510nm 处测定各个标准品溶液的吸
光度,以吸光度 A 为纵坐标,浓度 c 为横坐标,绘制
标准曲线。测得芦丁标准溶液浓度及对应的吸光度,
浓度 (mg/ml)为 0.00768、0.01536、0.02304、0.03072、
0.0384、0.04608 对 应 的 吸 光 度 分 别 为 0.07573、
0.16063、0.2509、0.3299、0.42073、0.49373。 其标准曲
线的回归方程为:A=10.972c-0.0063, 相关系数 r=
0.9993, 表明在 0.00768 mg/ml~0.04608 mg/ml 浓度
范围内线性关系良好。
2.4 样品溶液的配制
将 18种赶黄草药材样品分别经粉碎机粉碎,过
三号筛,备用。将药材粉末置于 60℃电热恒温干燥箱
中干燥,再精密称取赶黄草药材粉末 1g 于 100ml 锥
形瓶中,加入 70%乙醇溶液 20ml,用保鲜膜封好,摇
匀,静置 0.5h,用超声提取器提取 1h,共提取 2 次,
待冷却至室温后减压抽滤 2 次, 合并滤液, 移入
50ml 容量瓶中, 用 70%的乙醇溶液定容至刻度,得
到样品溶液。
2.5 精密度试验
精密移取 2.5ml 芦丁标准液于 25ml 容量瓶中,
照“2.2 最大吸收波长的确定”项下显色,混匀,静置
15min,在 510nm 处测定吸光度,重复测定 5 次,结果
测得的 5 次吸光度分别为 0.2172、0.2176、0.2175、
0.2172、0.2164。 RSD=0.22%,说明仪器精密度良好。
2.6 重复性试验
按供试品溶液的制备方法,对同一批药材,同时
制备 6份样品供试品溶液, 分别精密吸取 0.4ml,置
于 25ml 容量瓶中,照“2.2 最大吸收波长的确定”项
下显色,混匀,静置 15min,在 510nm 处测定各样品
溶液的吸光度, 结果分别是 0.3005,0.3008,0.2971,
0.2992,0.2983,0.2992。 RSD=0.51%, 说明重复性良
好。
2.7 稳定性试验
精密移取芦丁标准品溶液 3ml 至 25ml 容量瓶
中,照“2.2最大吸收波长的确定”项下显色,混匀,每
隔 5min 测定一次吸光度, 其吸光度分别为 0.2910、
0.2904、 0.2905、 0.2913、 0.2912、 0.2920、 0.2919、
0.2870、0.2904、0.2887。 RSD=0.53%, 表明在 50min
内稳定性良好。
2.8 加样回收率试验
第 4 期 余 昕等:不同采收期赶黄草中总黄酮的含量测定 371
泸州医学院学报 2010 年 第 33 卷 第 4 期
Journal of Luzhou Medical College Vol.33 No.4 2010
取已知含量的样品 9 份,分别精密添加 1:0.87、
1∶1.1、1∶1.3 的芦丁标准品溶液, 制备加样回收率供
试品溶液。 分别精密吸取 1 ml,置 25 ml 容量瓶中,
照“2.2 最大吸收波长的确定”项下显色,混匀,静置
15min, 分别测定各种供试品溶液的吸光度。 RSD=
3.14% ,结果见表 1。
表 1 回收率结果(n=9)
序号 药材含量 加入量 测定总量 回收率 平均回收率 RSD
(mg) (mg) (mg) (%) (%) (%)
1 0.4280 0.3717 0.7812 95.02
2 0.4280 0.3717 0.7838 95.72
3 0.4280 0.3717 0.7822 95.29
4 0.4280 0.4647 0.9037 102.36
5 0.4280 0.4647 0.8991 101.38 97.76 3.14
6 0.4280 0.4647 0.9000 101.57
7 0.4280 0.5576 0.9611 95.61
8 0.4280 0.5576 0.9622 95.80
9 0.4280 0.5576 0.9695 97.11
2.9 各样品总黄酮的含量测查结果(见表 2)
表 2 各样品总黄酮的含量测定结果(n=5)
药材 含量 药材 含量 药材 含量
(回龙村) % (万寿村) % (罗江村) %
花前期 5.98 花前期 5.99 花前期 5.84
花蕾期 5.24 花蕾期 5.74 花蕾期 5.09
花期 5.81 花期 5.87 花期 5.66
果期 6.99 果期 6.28 果期 6.38
商品全草 6.96 商品全草 6.29 商品全草 6.32
商品叶 11.51 商品叶 11.28 商品叶 11.31
3 讨 论
确定中药的适宜采收期, 必须把有效成分的积
累动态与药用部分的产量变化结合起来考虑。 当有
效成分的含量有一显著的高峰期, 而药用部分的产
量变化不大时,此含量高峰期,即为适宜采收期。 当
有效成分含量高峰期与药用部分的产量高峰期不一
致时, 要考虑有效成分的总含量, 总含量达最大值
时,即为适宜采收期[7]。根据上述样品含量测定结果,
果期的含量最大,且果期的产量也大,故应选择果期
作为适宜采收期。
本实验所测的三个产区由于距离较近,海拔、气
候、土壤等环境因子差异不大,故所测含量结果比较
接近。 各产区的四个采收期总黄酮有明显规律:果
期>花前期>花期>花蕾期。
三个产区中叶的含量均较高, 说明总黄酮主要
含在叶中, 故在赶黄草质量标准中应重视叶的比
例。
参 考 文 献
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术出版社,1977;534
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四川人民出版社,1979;116
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版.北京:人民卫生出版社,2000;480
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大学学报,2002;25(4):46
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(2009-07-27 收稿)
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