全 文 ：苯酚 -硫酸法测定灰树花中多糖含量的研究
樊懿娜 ,赵婷 ,周叶 ,韩亮 ,梁玲鸿 ,邹烨 ,仰榴青＊　(江苏大学药学院 ,江苏镇江 212013)
摘要　[目的 ]建立一种快速、稳定的适于测定灰树花多糖含量的方法。 [方法] 热水浸提法提取灰树花多糖 ,采用苯酚-硫酸法 ,以葡
萄糖为标准品 ,以蒸馏水为空白对照 ,于 490nm波长处分别测定对照品和供试品溶液的吸光度 , 按标准曲线计算葡萄糖含量。 [结果 ]
葡萄糖在 20 ～ 170μg/ml范围内线性关系良好 ,回归方程为Y=0.009 7X-0.096 4(Y为吸光度 , X为葡萄糖浓度 , μg/ml),相关系数r
=0.998 5,低、中 、高 3个不同浓度的加样回收率分别为 101.19%、100.01%和 100.23%(n=5), 其 RSD值分别为 1.20%、0.85%和
0.55%。 [结论] 苯酚硫酸法是一种快速、稳定、重现性好的灰树花多糖含量测定方法。
关键词　苯酚-硫酸法;灰树花;多糖;葡萄糖;含量测定
中图分类号　S567　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2011)25-15256-02
DeterminationofPolysaccharideContentinGrifolafrondosabyPhenol-SulfericAcidMethod
FANYi-naetal　(SchoolofPharmacy, JiangsuUniversity, Zhenjiang, Jiangsu212013)
Abstract　[ Objective] TodeveloparapidandstablemethodfordeterminingthepolysaccharidecontentinGrifolafrondosa.[ Method] Poly-
saccharidewasextractedfromGrifolafrondosabytheboiling-watermethod.ThecontentofpolysaccharideinGrifolafrondosawasdetermined
bythephenol-sulfericacidmethod, withtheglucosewasasreferencestandardandthedistiledwaterastheblankcontrol, theabsorbanceof
thecontrolandtestsolutionwasdeterminedat490 nmandthecontentofglucosewascalculatedbyusingthestandardcurve.[ Result] Glu-
coseshowedgoodlinearrelationintherangeof20-170μg/mlandtheregressionequationwasY=0.009 7X-0.096 4(YandXstoodfor
absorbanceandconcentrationofglucoserespectively), thecorelationcoeficientwas0.998 5.Theaveragerecoveriesforthreediferentcon-
centrationswere101.19%, 100.01%and100.23% (n=5), andtherelativestandarddeviationswere1.20%, 0.85% and0.55%, re-
spectively.[ Conclusion] Themethodwasrapidandstablewithgoodreproducibility.Itcouldbeusedtodeterminingthecontentofpolysac-
charideinGrifolafrondosa.
Keywords　Phenol-sulfericacidmethod;Grifolafrondosa;Polysaccharide;Glucose;Contentdetermination
作者简介　樊懿娜(1983-),女 ,山西阳泉人 ,硕士研究生 , 研究方向:
天然药物活性成分研究与开发。 ＊通讯作者 , 教授 , 博士 ,
博士生导师 , 从事天然产物提取及功能食品开发研究 , E-
mail:yangliuqing@ujs.edu.cn。
收稿日期　 2011-05-30
　　灰树花(Grifolafrondosa)是一种大型药食兼用珍稀菌 ,
主要分布于亚热带至温带 ,又名栗蘑 、贝叶多孔菌等 [ 1] 。其
外观灰白色 ,子实体中富含氨基酸 、多糖以及微量元素等在
内的多种营养成分 ,其中以多糖为主要的生物活性物质 [ 2] 。
研究表明 ,灰树花不仅具有重要的营养价值 ,其多糖也具有
显著的抗肿瘤 、抗氧化 、降血糖 、抗 HIV病毒以及免疫调节等
功效 [ 3-5] 。因此 ,对于灰树花多糖含量测定方法的研究具有
重要意义。目前测定多糖含量的方法主要有碱性酒石酸铜
滴定法和比色法 [ 6] (包括苯酚硫酸法和蒽酮硫酸法),其中比
色法的灵敏度较高 ,且样品用量少。鉴于此 ,笔者采用苯酚
硫酸法对灰树花多糖的含量进行了测定 ,旨在为灰树花多糖
的工艺研究提供依据。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　植物材料。灰树花子实体由浙江方格药业有限公司
提供 ,经茆广华博士鉴定。
1.1.2　主要试剂与仪器。浓硫酸 、苯酚 、95%乙醇 、石油醚 、
葡萄糖标准品均购自国药集团化学试剂有限公司;其他试剂
均为分析纯。 UV-7502PC可见分光光度计由上海茂欣仪器有
限公司生产;Sigma1-13高速台式离心机由 SIGMA公司生产;
FD-1-50冷冻干燥机由北京博医康实验仪器有限公司生产。
1.2　方法
1.2.1　灰树花多糖的制备。取适量灰树花子实体粉末置索
氏提取器中 ,石油醚(馏程 30 ～ 60 ℃)脱脂 15 h,过滤 ,滤渣
60℃烘干备用。子实体干粉按料液比 1∶10、pH7.0左右 、温
度 90 ～ 100 ℃下提取 3 h,提取 3次 ,提取液减压浓缩 ,加
95%乙醇 ,使其终浓度为 80%进行沉淀后 ,所得沉淀经离心 、
冷冻干燥后即得灰树花粗多糖样品 。所得 3批灰树花粗多
糖样品编号分别为 100324、100518和 100627。
1.2.2　溶液的配制 。葡萄糖标准溶液:准确称取 0.030 0 g
经 105 ℃干燥至恒重的葡萄糖标准品于 100 ml容量瓶中 ,蒸
馏水溶解定容。供试品溶液:准确称取灰树花粗多糖样品
0.020 0g于 100ml容量瓶中 ,蒸馏水溶解定容 ,待测。苯酚
溶液:苯酚 100.00 g加铝粉 0.10 g和氢氧化钠 0.05g,蒸馏
收集 180 ～ 182℃馏分 ,得到 100%苯酚 ,再配制成 5%苯酚溶
液 ,放入棕色瓶 ,置于冰箱中保存备用。
1.2.3　标准曲线的绘制。将葡萄糖标准溶液稀释成浓度为
20、50、80、110、140、170 μg/ml的溶液 ,分别吸取稀释液 0.6
ml,加入 5%苯酚溶液 1.2 ml,混合后迅速加入 6.0 ml浓硫
酸 ,混匀 , 30℃水浴中显色 30min,另以双蒸水代替糖溶液同
上操作为空白对照 ,在 490 nm波长处测定吸光度。以糖浓
度为横坐标 ,吸光度为纵坐标 ,制作标准曲线。
1.2.4　精密度试验。分别精密量取标准溶液 1.0、3.0和
5.0ml于 10 ml容量瓶中 ,用蒸馏水定容 ,配制成浓度为 50、
80和 100 μg/ml的标准液。精密量取 0.6 ml标准溶液按照
“1.2.3”方法测定吸光度 ,各组平行测定 5份。
1.2.5　稳定性试验。取经显色后的灰树花粗多糖样品溶液 ,
在室温下放置 2 h,分别于 20、40、60、80、100、120 min测定吸
光度值 ,观察显色后溶液是否稳定 。
1.2.6　重现性试验 。取同一批粗多糖样品(批号 100324)5
份 ,配制成供试品溶液后按照 “1.2.3”方法测定样品的吸光
度值。
1.2.7　加样回收率试验。采用加样回收率法 ,精密量取供试
品溶液 0.5 ml,分别准确加入标准品溶液(50、80和 100
责任编辑　乔利利　责任校对　况玲玲安徽农业科学 , JournalofAnhuiAgri.Sci.2011, 39(25):15256-15257
μg/ml)0.5 ml,各组平行 5份 ,按 “1.2.3”方法测定各样品的
吸光度值 ,计算回收率。
1.2.8　样品含量测定 。精密称取不同批号(批号 100324、
100518和 100627)的粗多糖样品配制成供试品溶液 ,按
“1.2.3”方法测定各样品的吸光度值 ,计算粗多糖样品中葡
萄糖的含量 ,通过换算得到灰树花多糖的含量。
2　结果与分析
2.1　标准曲线　由图 1可知 ,葡萄糖浓度(X, μg/ml)和相应
吸光度(Y)在 20 ～ 170μg/ml范围内成良好的线性关系 ,其标
准曲线的回归方程为 Y=0.009 7X-0.096 4(R=0.998 5)。
2.2　精密度试验　采用低 、中 、高 3个不同浓度的标准溶液
进行精密度试验(n=5),结果表明其 RSD分别为 0.69%、
0.85%和 0.75%,说明该方法的精密度良好。
2.3　稳定性试验　取经显色后的样品溶液在室温下放置 ,
分别于 20、40、60、80、100、120 min测定吸光度值(n=3),其
RSD为 0.62%。可见 ,吸光度值变化很小 ,溶液在显色 120
min内吸光度基本保持不变 ,表明溶液显色后稳定性良好。
图 1　葡萄糖的标准曲线
Fig.1　Calibrationcurveofglucose
2.4　重现性试验　试验结果表明 , RSD为 1.67%,说明该方
法具有良好的重现性。
2.5　加样回收率试验　由表 1可知 ,低 、中 、高 3个不同浓
度的加样回收率分别为 101.19%、100.01%和 100.23%, RSD
分别为 1.20%、0.85%和 0.55%,表明该方法具有较高的回
收率。
表 1　加样回收率试验结果(n=5)
Table1　Resultsofrecoverytest
浓度
Concentration
样品量 Sample
amount∥mg
加标量
Addition
amount∥mg
实测量 Measuredamount∥mg
平行 1
Paralel1
平行 2
Paralel2
平行 3
Parallel3
平行 4
Paralel4
平行 5
Paralel5
平均回收率
Average
recoveries∥%
RSD∥%
低 Low 0.020 1 0.005 0.025 5 0.024 9 0.025 2 0.025 8 0.025 6 101.19 1.20
中 Medium 0.020 1 0.010 0.029 8 0.030 1 0.030 4 0.030 3 0.029 9 100.01 0.85
高 High 0.020 1 0.015 0.035 1 0.034 9 0.035 3 0.035 4 0.035 2 100.23 0.55
2.6　样品含量测定结果　结果表明 ,批号 100324、100518和
100627的葡萄糖含量分别为 21.7%、21.3%和 20.9%。
3　结论
建立了苯酚 -硫酸法测定灰树花多糖含量的方法 。葡
萄糖含量在 20 ～ 170μg/ml范围内与吸光度成良好的线性关
系 ,回归方程为 Y=0.009 7X-0.096 4(r=0.998 5),低 、中 、
高 3个不同浓度的加样回收率分别为 101.19%、100.01%和
100.23%(n=5),其 RSD值分别为 1.20%、 0.85%和
0.55%,溶液 2 h内稳定性较好。该方法不仅操作简单 、回收
率高 ,而且稳定性和重现性好 、精密度高 ,可为灰树花中多糖
含量的工艺研究提供简单 、快速的测定方法 。
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