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蛋黄果水溶性多糖含量测定



全 文 :蛋黄果(Lucuma nervosa A. DC), 属山榄科蛋
黄果属多年生常绿果树, 果肉含水量较少、 松干、
粉质状、 味甜似鸡蛋黄, 故名蛋黄果。 蛋黄果含丰
富的糖、 淀粉、 蛋白质等营养物质[1]。 植物多糖具
有突出的保健功能, 有研究表明植物多糖可以促进
人体正常排泄[2], 降低某些癌症[3]、 心血管[4]和糖
尿病[5]的发病率。 许多常见病, 如动脉粥样硬化、
高血压、 冠心病、 便秘、 肥胖以及严重威胁人类生
命的结肠癌等都与植物多糖的摄入量不足有关。 近
年来, 植物多糖已成为营养学家、 流行病学家及食
品科学家等关注的热点。 国内相关专家对蛋黄果的
种质资源进行了收集, 对果实品质也有初步的研
究, 但对蛋黄果中水溶性多糖含量的测定未见报
道。 本研究采用苯酚-硫酸法测定蛋黄果中水溶性
多糖的含量, 以期为建立蛋黄果的质量标准及其开
发利用提供参考。
1 材料与方法
1. 1 材料
蛋黄果鲜果, 采自海南省万宁市兴隆热带植物
园蛋黄果种植圃, 去种皮、 种核后稍加破碎, 备
用; 葡萄糖、 乙醇、 浓硫酸、 苯酚、 石油醚、 氯仿、
正丁醇等均为分析纯试剂。
仪器设备包括, RV-10高效旋转蒸发仪(德国
IKA)、 UV-1700紫外分光光度计(日本岛津)、 GM-0.33
Ⅱ隔膜真空泵、 SB-5200DT超声波清洗器、 202-1
型鼓风恒温干燥箱等。
1. 2 方法
1. 2. 1 水溶性多糖提取
取干燥至恒重的蛋黄果粉末(在60℃条件下干燥8h)
蛋黄果水溶性多糖含量测定①
朱红英② 初 众③ 魏 来 宗 迎 卢少芳
(中国热带农业科学院香料饮料研究所 海南万宁 571533)
摘 要 采用苯酚-硫酸法, 测定蛋黄果中水溶性多糖的含量。 结果表明: 蛋黄果水溶性多糖含量较高, 且在
5~95μg/mL的范围内, 样品的浓度与吸光度有良好的线性关系, 线性回归方程 Y=0.009X-0.0078(r=0.9993),
加标回收率 101.8%(n=5, 相对标准偏差=1.59%), 蛋黄果水溶性多糖的平均含量为 8.66%。
关键词 蛋黄果 ; 水溶性多糖 ; 苯酚-硫酸法
分类号 O629.12
Determination of Water-soluble Polysaccharides in Lucuma nervosa
ZHU Hongying CHU Zhong WEI Lai ZONG Ying LU Shaofang
(Tropical Spice and Beverage Crops Research Institute, CATAS, Wanning, Hainan 571533)
Abstract Phen ol-hydrate-sulfuric method was used to determine the content of water-soluble
polysaccharides in Lucuma nervosa. The results showed that the content of water-soluble polysaccharides
in Lucuma nervosa was high, which was 5~95 μg/mL. The concentration and light absorbency of the
samples were in good linear relationship. The linear regression equation was Y=0.009X-0.0078(r=0.9993).
The prevented recovery rate was 101.8% (n=5, relative standard deviation = 1.59%). The average content
of water-soluble polysaccharides in Lucuma nervosa was 8.66%.
Keywords Lucuma ; water-solubility polysaccharide ; phenol-sulfuric acid method
① 基金项目: 中国热带农业科学院香料饮料研究所基金项目(Xys0711)。
收稿日期: 2011-01-14; 责任编辑/古小玲; 编辑部 E-mail: rdnk@163.com。
② 朱红英(1973~), 女, 助理研究员; 主要从事热带特色作物加工技术研究。
③ 通讯作者。
Vol.31, No.2
2011年2月 热 带 农 业 科 学
CHINESE JOURNAL OF TROPICAL AGRICULTURE
第31卷第2期
Feb. 2011
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朱红英 等 蛋黄果水溶性多糖含量测定
55g, 用500mL石油醚(60~90℃)浸泡2h, 回流提取
1h, 趁热抽滤, 将滤渣挥干, 加80%乙醇500mL回
流提取2次, 每次1h, 趁热抽滤, 用80%热乙醇洗涤
滤渣, 滤渣用600mL蒸馏水浸泡1h, 回流提取1h,
抽滤, 滤渣再用450mL蒸馏水回流提取1h, 抽滤,
用热水洗涤滤渣, 最后 2次滤液合并、 用高效旋
转蒸发仪, 在 50℃下浓缩至约 210mL, 用Sevage
法除蛋白[6,7](氯仿∶正丁醇=5∶1), 以 3000r/min、
10min的速度离心, 取上清液加95%乙醇, 使醇含
量达80%, 静置12h抽滤, 并用无水乙醇、 丙酮依
次洗涤 8次, 得精制水溶性多糖, 在 60℃条件下
烘干备用。
1. 2. 2 苯酚试液配制
取苯酚100g, 加铝片0.1g和碳酸氢钠0.05g,
一并蒸馏, 收集 182℃的馏分。 称取 5g, 加蒸馏
水溶解, 定容于 100mL容量瓶中, 得 50g/L苯酚
试剂, 转入棕色试剂瓶中备用(用前新配)。
1. 2. 3 测定波长选择
准确吸取 0.105 mg/mL葡萄糖溶液 1.00 mL,
置于 15 mL的具塞试管中, 加 50.0g/L苯酚试剂
1.0mL, 混匀, 快速沿管壁加入浓硫酸 5.0mL, 混
匀, 室温下放置15min, 置40℃水浴中放置10min,
室温下静置10min, 以蒸馏水同法操作为空白, 在
420~550nm测定吸光度 , 确定最大吸收波长为
490nm。
1. 2. 4 标准溶液制备
精确称取105℃干燥至恒重的葡萄糖0.5057g,
加水溶解, 定容于 50.00mL容量瓶中, 摇匀, 得
标准贮藏液 。 分别精确移取标准贮藏液 0.00、
0.03、 0.05、 0.10、 .20、 .25、 0.30、 .35和
0.45mL, 稀释定容于50mL容量瓶中, 摇匀, 得系
列标准液。
1. 2. 5 标准曲线绘制
精确移取已配制好的系列标准液各 1.00mL置
15mL具塞试管中, 加 50.0g/L苯酚试剂 1.0mL,
混匀, 快速沿管壁加入浓硫酸5.0mL, 混匀, 室温
下放置 15min, 置 40℃水浴中放置 10min, 室温
下静置10min, 以蒸馏水同法操作为空白, 在490nm
处测定吸光度(A)。
1. 2. 6 换算因子测定
准确称取蛋黄果水溶性多糖(60℃干燥至恒重)
10.5mg, 用蒸馏水溶解, 稀释定容于50mL容量瓶
中, 摇匀, 准确移取该溶液 1.00mL, 按 1. 2. 5 测
定吸光度, 代入回归方程, 得换算因子 f。
1. 2. 7 测定含量
精确称取5份质量约0.18g蛋黄果粉末, 分别
加石油醚100mL超声提取20min[5-6], 抽滤, 挥干,
滤渣各加入 80%乙醇 100mL, 超声提取 20min, 趁
热抽滤, 滤渣用80%的热乙醇洗涤3次, 每次5mL,
滤渣挥干乙醇, 加95mL蒸馏水, 超声提取20min,
趁热抽滤, 滤渣用热水洗涤3次, 加70mL蒸馏水
超声提取 20min, 趁热抽滤, 滤渣用热水洗涤 3
次, 合并2次滤液, 在250mL容量瓶中稀释定容,
得样品溶液。 精确移取样品溶液 1.00mL于 15mL
具塞试管中, 按 1. 3. 5测定吸光度。
1. 2. 8 回收率试验
精确称取蛋黄果粉末约 0.1g, 5份, 分别加
入 15mg精制的蛋黄果水溶性多糖(多糖纯度 100%),
制备样品溶液, 测定吸光度, 计算平均回收率。
2 结果与分析
2. 1 标准曲线
以吸光度(Y)对浓度(X)进行线性回归, 得回
归方程: Y=0.009X-0.0078, r=0.9993。 结果
表明, 在5~95μg/mL范围内, 浓度与吸光度有良
好的线性关系。 f=Xs/X(Xs为蛋黄果水溶性多糖溶液的
浓度, X 为回归方程计算出的浓度), 代入回归方程, 得
换算因子 f=2.41。 标准曲线如图1所示。
2. 2 回收率试验
经吸光度测定并计算平均回收率为 101.8%,
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2011年2月 第31卷第2期热带农业科学
RSD=1.59%(n=5), 见表1。
2. 3 蛋黄果水溶性多糖含量
测定不同样品溶液的吸光度值, 代入回归方
程, 利用换算因子计算多糖含量。 测定蛋黄果多糖
的平均含量为 8.66%, RSD=0.697%(n=5)。 不同
样品溶液的吸光度值及多糖含量见表2。
3 小结
多糖类化合物是许多功能性植物的有效成分之
一, 但多糖多无法直接测定。 苯酚-硫酸法测定多
糖含量是由Dubois等[8]提出的, 在浓硫酸作用下,
多糖或寡糖水解生成单糖, 并迅速脱水生成糠醛衍
生物, 然后与苯酚缩合成橙黄色化合物, 在490nm
处有最大吸收值, 且颜色深浅在一定范围内与糖含
量呈线性关系。 目前苯酚-硫酸法多用于测定水果、
植物或药材中的多糖含量。 此方法具有简便、 快
速、 准确、 灵敏的特点。 本试验采用苯酚-硫酸法,
以葡萄糖(105℃干燥至恒重)为对照, 测定蛋黄果水溶
性多糖含量高达8.66%, 因此将会有很好的药用价
值和开发前景。
参考文献
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related substances[J]. Anal Chem, 1996(28): 350
表 1 回收率试验结果
样品量/g 含量/mg加入量/mg测定量/mg回收率/%
0.1021 8.82 15.0 24.29 103.1
0.1013 8.76 14.5 23.36 100.7
0.1033 8.91 14.6 23.76 101.7
0.1060 9.12 15.9 25.63 103.8
0.1002 8.68 15.5 24.16 99.9
表 2 蛋黄果水溶性多糖含量的测定结果
样品量/mg 吸光度/A 水溶性多糖含量/%
198.5 0.217 8.62
198.8 0.219 8.68
222.1 0.246 8.69
203.3 0.221 8.60
206.2 0.229 8.73
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