全 文 :木芙蓉叶中芦丁的含量测定方法研究
李 华 1 ,宋志娟2 ,马仁强 2
(1.广东省药品检验所 ,广东 广州 5101801;2.广州博济医药生物技术有限公司 ,广东 广州 510602)
摘要:目的 建立木芙蓉叶中芦丁的含量测定方法。方法 用高效液相色谱(HPLC)法 ,分析色谱柱为 DiamosilC18(250 mm×4.6mm, 5
μm), 柱温:35℃,流动相为甲醇 -四氢呋喃 -0.5%冰醋酸(3∶19∶78);检测波长 254nm。结果芦丁在 2.989 ~ 191.3μg/ml(r=0.9999)
范围内呈良好的线性关系;药材溶液在 12h内稳定;芦丁平均回收率(n=6)为 100.5%, 相对标准偏差值(RSD)为 1.7%。结论 本法简
便 、灵敏 、准确能够满足木芙蓉叶中芦丁含量测定要求。
关键词:木芙蓉叶;芦丁;高效液相色谱;含量测定
中图分类号:R284.2 文献标志码:A 文章编号:1673-4610(2010)01-0034-03
作者简介:李 华 ,主管中药师 , Tel:020-32086615, E-mail:gziloveyou@yahoo.com.cn
ContentDeterminationofRutininFoliumHibisciMutabilis
LIHua1 , SONGZhi-juan2 , MARen-qiang2
(1.GuangdongInstituteforDrugControl, Guangzhou, Guangdong5101801, China;
2.GuangzhouBojiMedicinalandBiologicalTechnologyCo.Ltd., Guangzhou, Guangdong510602, China)
Abstract:ObjectiveToestablishthecontentdeterminationmethodofRutininFoliumHibisciMutabilis.Methods
HPLCwasperformedtodetermineRutinonC18 column(250 mm×4.6 mm, 5 μm).Themobilephasewasconsistedof
CH3OH-Tetrahydrofuran-CH3COOH(3∶19∶78).TheUVdetectionwavelengthwas254 nm, andthetemperatureof
columnwas35℃.ResultsThecontentofRutinshowedagoodlinearrelationshipwithpeakareaintherangeof2.989
~ 191.3μg/ml(r=0.9999), theaveragerecoverywas100.5%, andRSD=1.7%(n=6).ConclusionThismethod
issimple, sensitiveandaccurate, andavailableforqualitycontroloftheRutininFoliumHibisciMutabilis.
Keywords:FoliumHibisciMutabilis;Rutin;HPLC;determinationofcontent
中药材木芙蓉叶来源于锦葵科植物木芙蓉(Hibis-
cusmutabilisL.)的干燥叶 ,收载于 《中华人民共和国卫
生部药品标准》中药材(第一册)[ 1] 。木芙蓉叶气微 ,味
微辛 ,性凉 ,归肺 、肝经 ,具有清肺凉血 ,散热解毒 ,消肿
排脓的功效 。临床用于肺热咳嗽 ,瘰疬 ,肠痈 ,外治痈
疖脓肿 ,脓耳 ,无名肿毒 ,烧 、烫伤等。木芙蓉叶主要含
芸香苷 、山奈酚 -3-O-β -芸香糖苷 、山奈酚 -3-O
-β -刺槐双糖苷等黄酮苷 ,还含有酚类 、氨基酸 、鞣
质 、还原糖等成分 [ 2] ,其中黄酮苷为主要活性成分 。已
有文献报道测定本品中的金丝桃苷或芸香苷(即芦
丁)[ 3, 4] ,重复文献中对芦宁的测定方法 ,发现存在分离
度差和色谱峰不纯的问题 ,因此采用 HPLC对木芙蓉
叶中的芦丁含量测定方法进行研究 ,试验结果表明 ,该
方法简便快捷 ,稳定可靠 。
1 实验材料
1.1 仪器
戴安高效液相色谱仪(P680A输液泵系列 、ASI-
100自动进样器 、UVD340紫外 /可见检测器 , Chrome-
leon色谱工作站);SartoriusCP225D十万分之一电子天
平(北京赛多利斯仪器系统有限公司);KQ-100DE型
数控超声仪(昆山市超声仪器有限公司);HHS-21-4
恒温水浴锅(江苏金坛宏凯仪器厂);Model1690型柱
温箱(天津科贝尔电技术有限公司)。
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PharmacyToday· 2010 01 Vol.20No.01·
1.2 试剂
乙腈 、甲醇 、四氢呋喃为色谱纯 ,水为纯化水 ,其它
试剂均为分析纯 。
1.3 试药
芦丁对照品由中国药品生物制品检定所提供(批
号:100080 -200306, 含量 91.7%);批号为 051221、
060703的木芙蓉叶药材购于广西玉林药材市场(产地
广西)、批号为 071112的木芙蓉叶药材购于安徽毫州
药材市场(产地陕西)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统使用性试验
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇 -四氢
呋喃 -0.5%冰醋酸(3∶19∶78)为流动相;检测波长为
254nm;柱温:35℃;流速:1.0 ml/min;在此条件下芦丁
保留时间为 16.0min,其理论板数为 5000,木芙蓉叶供
试品溶液中芦丁峰与相邻峰分离度 >1.5。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取芦丁对照品 6.0 mg置 25 ml量瓶中 ,用
50%甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,精密吸取 1ml溶液
至 10 ml量瓶中 ,再用 50%甲醇稀释至刻度 ,即得浓度
为 24g/ml的溶液 。
2.3 供试品溶液的制备
取木芙蓉叶药材粉末(过四号筛)约 0.5 g,精密称
定 ,置 50ml具塞锥形瓶中 。精密加入 50%甲醇 25 ml,
称定重量 ,加热回流 45 min,取出 ,放冷 ,再称定重量 ,用
50%甲醇补足减失重量 ,摇匀 ,滤过 ,取续滤液 ,即得。
2.4 测定法
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 20 μl,
注入液相色谱仪 ,测定 ,即得。
2.5 方法学考察
2.5.1 专属性试验 分别精密吸取芦丁对照品溶液 、
供试品溶液与提取药材用溶剂 (即 50%甲醇)各 20
μl,注入液相色谱仪 ,照含量测定方法进行测定 。结
果空白溶剂无干扰 ,供试品主峰峰形较对称 ,分离度
>1.5,理论板数符合要求 ,因此认为该方法专属性较
好(见图 1 ~ 3)。
2.5.2 线性关系的考察 取芦丁对照品储备液(浓度
为 382.6g/ml),用 50%甲醇分别稀释制备成不同浓度
的对照品溶液 ,进样浓度分别为 2.989、5.978、11.96、
23.91、 47.82、95.64、191.3 g/ml,测定峰面积分别为
1.443、3.129、6.000、12.437、25.970、49.744、98.247,
以进样浓度对峰面积进行线性回归 ,得回归方程:y=
0.5143x+0.2493, r=0.9999。结果表明 ,芦丁对照品
浓度在 2.989 ~ 191.3 μg/ml之间与其峰面积呈良好的
线性关系 。
2.5.3 仪器精密度试验 精密吸取 2.5.2项下浓度
为 23.91 μg/ml芦丁对照品溶液注入液相色谱仪 ,重复
进样 6次 ,按上述色谱条件测定芦丁的峰面积 ,其 RSD
值为 1.4%。结果表明 ,仪器精密度良好。
2.5.4 稳定性试验 取同一批(批号 060703)木芙蓉
叶药材 ,按供试品溶液制备方法制备 ,室温放置 ,分别
在 0、1、2、4、8、12 h依次进样测定 ,其 RSD值为 1.6%。
结果表明 ,供试品溶液自制备后 12 h内稳定性良好 。
2.5.5 重复性试验 取同一批木芙蓉叶药材(批号
060703)6份 ,按供试品溶液制备方法制备 ,再按上述含
量测定方法测定 ,计算含量为 1.381mg/g,其 RSD值为
1.9%。结果表明 ,本方法重复性良好。
2.5.6 加样回收率试验 取重复性项下的已知含量
(1.381mg/g)的药材 6份 ,每份称样量 0.25 g,精密称
定 ,以当前取样量的 1∶1,分别精密加入对照品储备溶
液(0.3202 mg/ml)1.0 ml,按药材溶液制备方法制备 ,
再按上述含量测定方法测定 ,计算其回收率为 100.5%,
RSD值为 1.7%。结果表明 ,本方法准确度高(见表 1)。
2.6 药材含量测定
取 3个批次药材 (批号分别为:051221、060703、
071112)按供试品制备方法制备 ,测定峰面积 ,计算 3
批药材中芦丁含量分别为 0.801、1.381、0.841mg/g。
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· 2010年 01月第 20卷第 01期 · 今日药学
3 讨论
3.1 本法建立过程中流动相的选择曾参考文献 [ 3]采
用甲醇 -水 -冰醋酸(30∶70∶0.25)为流动相 ,结果芦
丁峰与其他峰重叠在一起 ,后选取甲醇与磷酸水溶液
为流动相系统达不到分离效果 ,改用乙腈与磷酸水溶
液流动相系统也达不到分离效果 ,后采用甲醇与水进
行梯度洗脱 ,分离效果仍不理想 ,再改用四氢呋喃进行
洗脱 ,结果分离度达到要求 ,并将其进行了改善最终确
定本试验的流动相为甲醇 -四氢呋喃 -0.5%冰醋酸
(3∶19∶78)。
3.2 供试品溶液的制备按照文献 [ 3]的方法直接用甲
醇超声提取制备 ,结果所提含量较低 ,我们将提取方法
采用超声法与回流法进行比较 ,结果用回流法所测含
量明显高于用超声法 ,并将提取方法进一步进行考察 ,
对所用不同提取溶剂 、提取时间 ,以及提取率分别进行
了考察 ,最终确定本试验中所用的供试品制备方法 ,本
制备方法样品提取完全 、方便 、快捷。
3.3 本实验测定 3批木芙蓉叶药材含量低于文献 [ 3]
所测含量 (文献资料 [ 3] 报道木芙蓉叶中含芦丁
0.335%,即 3.35 mg/g),可能是不同产地 、不同季节采
集而造成芦丁含量的不同。
参考文献
1中华人民共和国卫生部药典委员会.《中华人民共和国卫生
部药品标准》中药材(第一册), 1992.16.
2姚莉韵 , 陆阳 , 陈泽乃.木芙蓉叶化学成分研究.中草药 ,
2003, 34(3):201-203.
3孟会宁 , 罗国平.HPLC法测定木芙蓉叶中芦丁的含量.安
徽医药杂志 , 2007, 11(8):705-706.
4王治平 ,樊化 , 杨珂 ,等.HPLC测定木芙蓉叶药材及其制剂
芙蓉抗流感片中金丝桃苷的含量.中成药 , 2007, 29(8):
1230-1232.
(收稿日期:2009-07-07)
英国采取措施降低可待因类药物的滥用和成瘾风险
2009年 9月 3日 , 英国药品和健康产品管理局(MHRA)为
了配合英国卫生部对易成瘾处方药和非处方药(OTC)的核查 ,
对含有可待因和双氢可待因(DHC)的 OTC药品采取新措施 ,以
降低此类药物的滥用和成瘾风险。这些措施包括修改药品适应
症 、患者信息(PIL)和标签 、包装规格以及广告和促销信息:
○适应症
删除所有用于治疗感冒 、咳嗽和咽喉疼痛以及减轻疼痛的
字样。适应症应标明用于急性中度疼痛的短期治疗 , 并且这些
疼痛使用扑热息痛 、布洛芬或阿司匹林无法得到缓解。
○患者信息和标签
患者信息和标签上应注明 , 该药品仅限用于中度急性疼痛
的短期治疗 , 不得在使用其他止痛药后的 4 h内使用 ,疗程不得
超过 3 d。如果持续使用超过 3 d, 该药品会导致成瘾或过度使
用性头痛。尤其是在药品的外包装上应清晰明显地标注以下警
告:“易成瘾 , 仅限使用 3d”。
患者信息也应包含成瘾警告标示。例如:如果需要长期使
用或使用剂量大于推荐剂量 ,则易成瘾;如果停止使用后感觉不
舒服 , 但恢复使用后又感觉良好 , 则说明已经成瘾。
○包装规格
超过 32片包装的含可待因或 DHC的 OTC药品(含泡腾剂
在内)将禁止在药店销售。
○广告
生产商和零售商的广告和促销规定将要进行更新 ,以反映
新的适应症和警告信息 , 并删除关于止痛效果和强度的字样。
同时 , 所有广告都应加入 “易成瘾 ,仅限使用 3 d”的说明。
MHRA药物警戒和风险管理部门主任 JuneRaine博士表
示 , 如果以正确的方式并且用于适当的目的 , 那么可待因和 DHC
对治疗疼痛还是非常有效的 , 而且是可以接受的治疗药物。但
是 , 这类产品会导致患者成瘾 , 因此我们必须采取措施来应对这
种风险 。目前 MHRA正在采取措施 , 以确保人们对含可待因和
DHC药品有清楚的认识 ,了解此类药品的用途以及如何将成瘾
风险降到最低。如果任何人对此有所担忧 , 应该向药剂师或医
生咨询 。 (资料来源:英国 MHRA网站)
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