全 文 ：2012 年 3 月第 3 期 中国民族医药杂志
△基金项目：国家自然科学基金项目 (编号 : 81060362 )；
内蒙古自然科学基金项目（编号 : 2009BS1204）
摘 要：目的：研究漆树科植物广枣中总黄酮的提取工艺，为蒙药广枣质量标准的完善提供依据；方法：广枣药材经50 %乙醇提
取、HPD100树脂柱富集浓缩，明胶沉淀通过紫外分光光度法测定总黄酮含量，利用高效液相色谱 (HPLC)和液相色谱-串联质谱
(LC-MS)分析方法，明确其化学组成；结果：试验证实了广枣中含有黄酮类化合物，广枣中总黄酮主要富集在大孔吸附树脂柱的
50 %乙醇洗脱部位，制备了以芦丁计，总黄酮含量为53.65 %的样品；结论：该实验方法简便快捷，重复性好，结果准确可靠，可做
为广枣有效部位的快速鉴别分析方法。
关键词：蒙药广枣；总黄酮；HPLC；LC-MS；含量测定
蒙药广枣总黄酮的提取及HPLC 和LC-MS定性分析△
舒 亮 1 王二云 2 高晓慧 3 包俊萍 3 王晓玲 3 邢慧慧 1 杨雨民 3
（1.内蒙古医学院研究生学院 ,内蒙古 呼和浩特 010050；
2.呼和浩特市食品药品检验所 ,内蒙古 呼和浩特 010020；
3.内蒙古自治区中蒙医医院 , 内蒙古 呼和浩特 010020）
中图分类号：R291.2 文献标识码：A 文章编号：1006-6810（2012）03-0041-03
广枣为漆树科植物南酸枣 Choerospondias axillaries (Roxb）.
Burtt et Hill的干燥成熟果实，现收载于 2010版《中国药典》一
部，为蒙医习用药材。广枣性味甘、酸，平，具有行气活血、养心安
神之功效，用于气滞血瘀、胸痹作痛、心悸气短、心神不安等疾病
的治疗[1]。近年来，从广枣分离出多种化学成分，其中广枣总黄酮
具有抗心律失常作用[2]、增强小鼠免疫功能[3]、对动物耐缺氧和心
肌缺血有保护作用[4]、抑制血小板聚集和改善血液流变学各项指
标[5]。本研究在总黄酮提取工艺筛选的基础上，对其进行分离制
备，并采用 HPLC及 LC-MS对其中的主成分进行研究分析。
1 仪器与试药
紫外可见分光光度计（T6新世纪），sartorius型电子天平（德
国赛多利斯），EYELA N-1100型旋转蒸发仪（上海爱郎仪器有限
公司），SHZ-D循环水式真空泵（河南巩义市英峪华中仪器厂），
KQ-100E型超声波清洗器（昆山超声仪器科技有限公司）。
岛津 LC-20高效液相色谱仪，配备四元泵，自动进样器，在
线脱气机和二极管阵列检测器。安捷伦 6320-1200离子肼高效
液相-质谱联用仪，配备电喷雾离子源，离子肼质谱检测器。
HPD100大孔吸附树脂 (河北沧州)，柱层析聚酰胺 (60~90
目)。
芦丁对照品购于中国食品药品检定研究院；广枣药材产于
广东顺德，由内蒙古中蒙医医院提供；除色谱甲醇外，其它试剂
均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 总黄酮的提取：广枣药材粗粉 2.7 kg，以 50 %乙醇为溶剂，
加热回流提取 2次，液料比分别为 10: 1和 8: 1，每次 1h，合并两
次提取液，滤过，滤液回收乙醇，静置，离心，上清液 12600 mL，从
中取出 100 mL回收至干（2g），作为留样，其余液体上 HPD100大
孔树脂柱进行富集浓缩。第一次树脂柱除去大量的水液，直接用
95 %乙醇洗脱，洗脱液减压回收乙醇至 4 L，二次上 HPD100大
孔吸附树脂柱，依次用水、30 %、50 %、70 %和 95 %乙醇洗脱，收
集 50 %乙醇洗脱液，回收溶剂，冷冻干燥，称重，测定其中总黄酮
的含量。
2.2 总黄酮部位含量测定
2.2.1 线性关系：精密称取芦丁对照品 19.77 mg，置于 100 mL容
瓶量中，加 50%乙醇使其溶解并稀释至刻度，得浓度为：0.1977
序
号
对照品
加量
(mg)
总量
(mg)
R
S
D
(%)
1
2
3
1
2
3
1
2
3
0.4779
0.4779
0.4779
0.9558
0.9558
0.9558
1.4763
1.4763
1.4763
1.4871
1.4836
1.4864
1.9729
1.9626
1.9914
2.4912
2.4889
2.4930
1.01
1.00
1.00
1.00
1.00
1.00
1.00
1.00
1.00
1.00
1.010
1.010
1.010
1.010
1.010
1.010
1.010
1.010
1.010
样
品
量
(mL)
供试品
含量
(mg)
回
收
率
(%)
平均回
收率
(%)
99.83
99.10
99.68
100.74
99.66
102.67
100.33
100.17
100.45
100.29
2011年 12月 25日收稿
表 1 CE加样回收试验结果
峰型较好，并具较适合的保留时间。该方法准确、灵敏、简便，可
作为麻黄-4汤散剂的含量控制标准。
根据样品中 CE的性质，参照文献[2]方法，直接将样品置中性
氧化铝柱上，用 50%甲醇 45mL洗脱，加少量磷酸，用 50%甲醇定
容，制备供试品溶液。为保证被测成分洗脱完全，考察了同一批
号供试品，用 50%甲醇洗脱，收集洗脱液 45ml后，再继续收集洗
脱液 10mL进行测定，结果在与对照品相同的保留时间处基本无
吸收，表明 45mL洗脱液可以将麻黄碱洗脱干净。
参考文献
[1]辽宁省阜新卫生局.蒙医药方剂汇编[M].辽宁人民出版社,1976.
[2]国家药典委员会.中国药典一部·2005版[S].化学工业出版社,
224.
41
DOI:10.16041/j.cnki.cn15-1175.2012.03.015
2012 年 3 月第 3 期中国民族医药杂志
样品
Rt
/min
MW
UVλmax
/nm
+MS: m/z 化合物
50%
EtOH
20.7 464 253、367
487[M+Na]+, 303
[M+H-162]+
槲皮素葡萄
糖
50%
EtOH
23.2 464 253、367
487[M+Na]+, 303
[M+H-162]+
苷和金丝桃
苷
mg/mL的对照品贮备液。分别移取上述贮备液 0.0 mL、2.0 mL、
4.0 mL、6.0 mL、8.0 mL、10.0 mL、12.0 mL，于 25 mL 容量瓶中，
2.2.4项下“加入 5 %亚硝酸…..”操作起，进行分析测定，记录吸
光度。以吸光度对质量浓度进行线性回归，得回归方程为 A=
10.86013C+0.01536，r=0.9996，表明在 0.016~0.095 mg·mL-1范围
内线性关系良好。
2.2.2 对照品溶液的制备：精密称取芦丁 5.40mg(纯度 92.5%)于
25 mL容量瓶中，加 50 %乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得浓度
为 0.216 mg·mL-1的芦丁对照品溶液。
2.2.3 供试品溶液的制备：精密称取 50 %乙醇洗脱物适量，置于
25 mL的量瓶中，加入 50 %乙醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得
供试品溶液。
2.2.4 总黄酮测定：精密量取上述对照品溶液 5 mL和 50 %乙
醇洗脱物供试品溶液 5 mL，分别置于 25 mL量瓶中，加入 5 %亚
硝酸钠溶液 1.0 mL，放置 6 min；加入 10 % 硝酸铝试液 1.0 mL，
放置 6 min；加入 4 % 氢氧化钠试液 10 mL，最后用 50 %乙醇稀
释至刻度，摇匀，放置 15 min，于 508 nm处测定吸光度。以芦丁
计，计算样品中总黄酮的含量为 53.65 %。
2.3 总黄酮部位 HPLC定性分析：在总黄酮含量测定的基础上，
对总黄酮部位进行 HPLC和 LC-MS定性分析，以进一步确认其
化学组成。
2.3.1 色谱条件：Phenomenex Luna C18色谱柱（4.6mm×250mm，5
μm），流动相 A：0.2 %甲酸水溶液，流动相 B：甲醇，线性梯度洗
脱程序：0~60 min，2 % B→30 %B；流速 1.0 mL·min-1，柱温为 35
℃，二极管阵列检测器，检测波长 254 nm，进样量 10 μL。
2.3.2 供试品溶液的制备：精密称取适量 HPD100大孔吸附树脂
50%乙醇洗脱部位，色谱甲醇溶解，定容，溶液过 0.45 μm的微孔
滤膜，制成一定浓度的供试品溶液。
2.3.3 HPLC定性分析：在选定的色谱条件下，样品的 HPLC图
如图 1所示，图中 1-A、1-B、1-C、1-D分别表示了在波长 230
nm、254 nm、280 nm、330 nm处的色谱图；图 8B中嵌入了主要色
谱峰的在线全波长紫外光谱图。由保留时间 tR=37.6 min的色谱
峰在线全波长紫外光谱图判断，该色谱峰紫外特征具有黄酮类
成分的两个吸收带，初步判断该样品中主要色谱峰为黄酮类成
分。
2.4 总黄酮部位 LC-MS定性分析
2.4.1 色谱条件：Phenomenex Luna C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，
5 μm），流动相 A：0.2 %甲酸，流动相 B：甲醇，线性梯度洗脱：0~
60 min，10%→90%B；流速为 1.0 mL·min-1，柱温为 35 ℃，二极管
阵列检测器，监测波长：254 nm。进样量为 10 μL。
质谱条件：正、负离子同时检测，离子喷雾电压分别为+ 3.5 KV
(+)，-3.5KV(-)；毛细管温度：350 ℃；N2气作为鞘气，鞘气流速为
10 L·min-1。全扫描范围 m/z 100~1000。
2.4.2 LC-MS分析：在选定的色谱和质谱条件下，将 2.3.2项下
的供试品溶液进行 LC-MS分析，正离子模式比负离子模式响应
较好。根据主要色谱峰的在线全波长紫外吸收光谱和 LC-MS信
息，结合文献分析，总黄酮部位中主要色谱峰（tR=20.7和 23.2
min，表 1）为分子量 464的两个同分异构体，推测为槲皮素的六
碳糖苷；经鉴定该色谱峰为槲皮素葡萄糖苷和金丝桃苷。
3 讨 论
3.1 实验前期对广枣中总黄酮提取富集工艺进行了预实验优
选，HPD100大孔吸附树脂和聚酰胺树脂对黄酮的富集效果优于
乙酸乙酯溶剂萃取法，HPD100大孔吸附树脂柱 50 %乙醇洗脱
部位对总黄酮的富集作用较好，聚酰胺树脂柱富集效果 50 %乙
醇>30 %乙醇>70 %乙醇≈90 %乙醇部位，总黄酮在不同部位均
有分布，富集效果略逊于 HPD100大孔吸附树脂。综合考虑样品
得率与其中总黄酮的含量，确定用 HPD100大孔树脂富集广枣总
黄酮。本实验对广枣药材进行 50 %乙醇提取、HPD100大孔吸附
树脂柱富集浓缩，制备了 50 %乙醇洗脱的总黄酮部位；通过紫外
分光光度法对其中总黄酮含量进行了测定，以芦丁计，总黄酮含
量为 53.65 %。
表 1 50 %EtOH样品中主要色谱峰信息
图 1 总黄酮部位 HPLC图
3.2 通过 HPLC和 LC-MS定性分析，综合样品中主要色谱峰的
在线紫外全波长吸收图和准分子离子峰数据，以及文献提供的
信息，指认 50 %乙醇洗脱物中的主要色谱峰为槲皮素的葡萄糖
苷和金丝桃苷。本方法可做为广枣有效部位的快速鉴别分析法。
参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京：中国医药科技
出版社,2010版,一部.41.
[2]杨玉梅,应康,王风华,等.蒙药广枣总黄酮对大鼠离体心脏的抗
心律失常作用[J].中国民族医药杂志,2001,7(2): 25-26.
[3]王玉珍,任建梅,王若愚,等.广枣总黄酮对小鼠免疫功能的影响
[J].中国药理学通报,1991, 21(7): 21~24.
[4]张昕原,孙丽燕,巴根那等. 广枣总黄酮抗氧化作用的研究[J].中
国民族医药杂志,1999, 5(增刊):112-113.
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2012 年 3 月第 3 期 中国民族医药杂志
吸收度
浓度
mg·mL-1
含量
mg·g-1 平均值
RSD
%
1.3354
1.3356
1.3344
1.3328
1.3312
1.3216
0.1036
0.1036
0.1036
0.1034
0.1033
0.1026
12.9533
12.9552
12.9438
12.9285
12.9133
12.8219
12.9193 0.39
试验
次数
时间
min
1
2
3
4
5
6
10
20
30
40
50
60
2011年 12月 25日收稿
摘 要：目的：建立巴迪然吉卜亚中总黄酮含量测定的紫外分光光度法，为该药材以后的种植及生产中提供质量控制标准。方
法：用紫外分光光度法测定总黄酮的含量。结果:芦丁量0.0714mg/ml~0.4286 mg/ml范围内，线性关系良好。芦丁吸光度值与浓度
有良好的线性关系。平均加样回收率为99％。结论：方法快速简便，结果准确，可用于巴迪然吉卜亚药材及制剂的质量控制。
关键词：巴迪然吉卜亚；芦丁；紫外分光光度法；含量测定
紫外分光光度法测定维吾尔医常用药材巴迪然吉卜亚中总黄酮含量
阿达来提 1 吐鲁洪·卡地尔 2 胡尔西旦·玉素甫 1
（1.新疆自治区维吾尔医医院药剂科，新疆 乌鲁木齐 830049；
2.新疆自治区维吾尔医药研究所，新疆 乌鲁木齐 830049）
中图分类号：R291.5 文献标识码：A 文章编号：1006-6810（2012）03-0043-02
巴迪然吉卜亚 Herba Dracocephali Moldavicae 是维吾尔医常
用药材、临床上有益心护脑，保肝健胃，增强感觉力，补充保护
力，增益智慧力，开通脑中闭塞。用于心悸心痛，头晕脑胀，反应
迟钝，感觉底下，思维不敏，胃虚肝弱，机体自然力下降。该药材
维吾尔医处方中使用率比较广泛，但是巴迪然吉卜亚在新疆地
区的栽培技术不是很发达、这中情况引起巴迪然吉卜亚药材的
短缺，因此大部分药材依靠从国外进口，有时候不能保证药材的
质量、影响了药品的治疗作用。本研究使用紫外分光光度法测定
巴迪然吉卜亚中有效成分总黄酮的含量为该药材以后的种植及
生产中提供质量控制标准。
1 实验部分
1.1 实验仪器与试药：紫外分光光度计（Cintra30 澳大利亚 GBC
公司生产），FAD1120 精密电子天平，芦丁对照品（批号为
201005-7548，中国药品生物制品检定所），亚硝酸钠，硝酸铝，氢
氧化钠，超纯水等。
1.2 方法与结果
1.2.1 芦丁对照品溶液的制备：精密称取在 120℃干燥至恒重的
芦丁对照品 89.3mg，置于 50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻
度、摇匀，即得（1.786mg·mL-1）。
1.2.2 标准曲线的制备：精密量取对照品溶液 1.0mL，2.0mL，
3.0mL，4.0mL，5.0mL 和 6.0mL 分别置于 50mL 量瓶中，各加水
7.0mL，加 5%亚硝酸钠溶液 1mL，混匀，放置 6min，加 10%硝酸铝
溶液 1mL，摇匀，放置 6min，加氢氧化钠试液 10mL，再加水至刻
度，摇匀，放置 15min，以相应试剂为空白，照《中国药典》2005年
版一部紫外-分光光度法（附录 V A），在 500nm波长处测定吸光
度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
标准曲线方程：y = 13.126x - 0.0248，r = 0.9995。结果见下
表 1，在浓度 0.0714~0.4286 mg·mL-1范围内，线性关系良好。结
果见图 1。
表 1 标准曲线结果
1.2.3 供试品溶液的制备：精密称取样品 1.0g，置于 50mL溶量
瓶中，加甲醇 50mL，称重，回流 2h，冷却，补足减失的重量，滤过，
精密量取 20.0mL置于 50mL溶量瓶中，加水 7.0mL，加 5％亚硝
酸钠溶液 1mL，混匀，放置 6min，加 10％硝酸铝溶液 1mL，摇匀，
放置 6min，加氢氧化钠溶液 10mL，再加水至刻度，摇匀，放置
15min，即得。
图 1 芦丁标准曲线
1.2.4 精密度试验：精密称取样品（批号 20100711）1.0g，按上述
供试品制备方法制备，进行测定。结果见表 2。
表 2 精密度试验结果
试验表明，该方法的精密度良好。
表 3 稳定性试验结果
1.2.5 稳定性试验：精密称取样品（20100711）1.0g，按上述供试品
对照品浓
度(mg·mL-1)
0.0357 0.0714 0.1072 0.1428 0.1786 0.2142
吸收值 0.4574 0.9235 1.3754 1.8012 2.3251 2.8121
试验次数 吸收度
浓度
mg·mL-1
含量
mg·g-1 平均值
RSD
%
1
2
3
4
5
6
1.3325
1.3365
1.3345
1.3352
1.3325
1.3345
0.1034
0.1037
0.1036
0.1036
0.1034
0.1036
12.9257
12.9638
12.9447
12.9514
12.9257
12.9447
12.9427 0.12
[5]石山,田凤居,李坤晞,等.广枣总黄酮对血小板凝聚功能及血液
流变学的影响[J].内蒙古药学,1985, 8(2):11~13.
43