全 文 ：长素为 NAA,其最佳浓度为 1.0 mg/L。
　表 4　　不同浓度 NAA或 IAA对试管苗生根的影响
生长素及浓度 /(mg/L) 接种数 /株 总根数 /条 平均生根数 /条 长势
NAA0 24 5 0.2 -
NAA0.5 24 29 1.2 -
NAA1.0 24 103 4.3 ++
NAA2.0 24 62 2.6 +
IAA0 24 5 0.2 -
IAA0.5 24 46 1.9 -
IAA1.0 24 92 3.8 +++
IAA2.0 24 55 2.3 +
3　小结
射干愈伤组织和胚性愈伤组织的诱导以 2, 4-D
浓度和 AgNO3浓度影响最大 ,适宜的 2, 4-D浓度可
以提高胚性愈伤组织的诱导率 ,其中 AgNO3可以大
大提高胚性愈伤组织的诱导率。射干愈伤组织分化
的最佳细胞分裂素是 BA。通过对射干叶片的诱导 ,
初步建立射干的快速繁殖体系。
参 考 文 献
[ 1] 谢凤勋 .中草药栽培实用技术等 [ M] .北京:中国农业
出版社 , 2001:250-253.
[ 2] 申志英 , 孟祥财 ,郑平 , 等.提高射干种子发芽率的简易
方法 [ J] .中药材 , 2004, 27(3):163.
广金钱草适宜采收期研究
陈丰连 1 , 张文进2 , 徐鸿华 1
(1.广州中医药大学中药分析教研室 ,广东 广州 510006;2.广东南台药业有限公司 ,广东 平远 514600)
　　摘要　目的:考察不同采收时间广金钱草中总黄酮 、异牡荆苷含量及产量变化趋势 ,以确定其最佳采收期。方
法:采用柱色谱-UV法测定总黄酮含量;采用 HPLC测定异牡荆苷含量 , 色谱条件:DiamonsilTMC18色谱柱(迪马公
司 , 250 mm×4.6 mm, 5μm);柱温 25℃;甲醇-0.2%磷酸水溶液进行梯度洗脱;检测波长 271 nm;流速 1 mL/min。
结果:总黄酮和异牡荆苷的含量在 7月份达到最大 , 产量在 8 ～ 9月份最高。结论:从产量和有效成分黄酮的含量变
化上综合考虑 , 建议广金钱草最佳采收期在 8月。
　　关键词　广金钱草;总黄酮;异牡荆苷;采收期
　　中图分类号:R282.4　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2010)02-0178-03
收稿日期:2009-06-09基金项目:广东省科技厅项目(2003C34423, 2008A030101009)作者简介:陈丰连(1973-),女,副教授 ,博士 ,研究方向:中药资源开发与质量控制;Tel:020-86578986, E-mail:chenfenglian@21cn.com。
　　广金钱草是豆科植物广金钱草 Desmodium
styracifolium(Osb.)Mer.的干燥地上部分 ,主产于
广东 、广西等地 ,原为两广一带民间常用草药 ,以其
能治结石症而闻名 ,据报道广金钱草含有异牡荆苷
等黄酮类物质 ,且为药效成分 〔1, 2〕。广金钱草的采
收以民间经验为主 ,笔者未见有研究其采收期的报
道 ,本实验采集广东南台药业有限公司广金钱草
GAP种植基地的样品 ,对不同生长期广金钱的产
量 、异牡荆苷含量 、总黄酮等指标进行测定 ,以期确
定广金钱草最佳采收期。
1 　仪器 、药材与试药
1.1 　仪器　DionexSummitP680 HPLCPump高效
液相色谱仪 , PDA-100 PhotodiodeArrayDetector,
Chromeleon数据处理系统;超声处理提取器(功率
250 W,频率 50 kHz);紫外分光光度计(spectronic
G2)。
1.2　药材与试药　广金钱草采自广金钱草 GAP
种植基地(广东南台药业有限公司),经广州中医药
大学鉴定教研室李薇教授鉴定为广金钱草(Desmo-
diumstyracifolium(Osb.)Mer.)。甲醇为色谱纯 ,
其余试剂均为分析纯;异牡荆苷(isovitexin)对照品
由 Sigma公司生产。
2　方法与结果
2.1　异牡荆苷的 HPLC测定
2.1.1 　色谱条件与系统适用性试验:色谱柱:Dia-
monsilTMC18色谱柱(迪马公司 , 250 mm×4.6 mm, 5
μm);柱温 25 ℃;以甲醇为流动相 A,以 0.2%磷酸
水溶液为流动相 B。梯度洗脱 ,程序为:0 ～ 10 min,
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A∶B(30∶70), 10 ～ 30 min, A∶B(30※45∶70※55);
检测波长 271nm;流速 1.0mL/min。异牡荆苷的保
留时间为 24.30 min,分离度大于 1.5 ,理论塔板数
按异牡荆苷峰计应不低于 5 000。
2.1.2　对照品溶液的制备:精密称取异牡荆苷对
照品适量 ,加甲醇制成每 1 mL含 29.6 μg的溶液 ,
即得。
2.1.3　供试品溶液的制备:取本品粗粉约 0.5 g,
精密称定 ,置具塞锥形瓶中 ,精密加甲醇 35 mL,密
塞 ,称定重量 ,超声处理 20 min,放冷 ,再称定重量 ,
用甲醇补足减失的重量 , 摇匀 , 取上清液 0.45 μm
微孔滤膜滤过 ,作为供试品溶液 。
2.1.4　稳定性考察:精密吸取同一供试品溶液 10
μL,按 “ 2.1.1”项下色谱条件测定峰面积 ,每隔 1 h
测定一次峰面积 , RSD为 1.1%,结果显示供试品溶
液中异牡荆苷含量在 24 h内稳定 。
2.1.5　线性关系考察:精密量取 “ 2.1.2”项下对
照品溶液 0.5、1.5、2.5、3.5、4.5 mL于 5 mL量瓶
中 ,加甲醇至刻度 。分别精密吸取 10 μL, 进样测
定 ,以面积积分值为纵坐标 ,进样量为横坐标 ,得回
归方程:Y=36.16X-3.04 ×10-3 , r=0.9997,异牡
荆苷在 0.0296 ～ 0.2664 μg范围内有良好线性关
系 。
2.1.6　精密度试验:重复量取 “ 2.1.2”项下对照
品溶液 10 μL,注入液相色谱仪 ,测定 5次 ,其 RSD
为 0.36%,表明仪器精密度良好。
2.1.7　重复性试验:平行取同一样品 5份 ,约 0.5
g,分别精密称定 , “ 2.1.3”项下方法处理。进样测
定 ,计算平均含量 ,结果平均含量为 0.41 mg/g, RSD
为 1.2%,表明重复性良好 。
2.1.8　回收率试验:取 0.25 g已知含量的广金钱
草药材 5份 ,精密称定 ,分别加入 29.6 μg/mL对照
品 3.5mL,挥干溶剂后 ,按 “2.1.3”项下方法制备供
试品溶液 ,测定峰面积 ,并计算回收率 。结果平均回
收率为 99.53%, RSD为 1.4%。
2.1.9 　样品测定:分别精密称取各样品 , 按
“ 2.1.3”项下方法制备样品溶液后 ,按 “2.1.1”项下
色谱条件测定样品 ,进样量为 10μL,根据峰面积计
算样品中异牡荆苷的含量 ,结果见表 1。
2.2 　不同采收期总黄酮的测定　采用柱色谱 -紫
外分光光度法测定广金钱草中总黄酮含量的方
法 〔3〕 ,对收集的样品进行总黄酮的测定 ,结果见表
1。
2.3 　不同采收期对产量的影响　收集平远广金钱
草基地 7月 ～ 12月广金钱草样品 ,每次采集 10株
样品 ,随机取 3株称鲜重 ,晒干 ,称干重 ,结果见表
2。从表 2数据可以看出 ,从 7月到 12月不同时间
采收的相同株数广金钱草重量 , 8月 10 ～ 9月 10日
的鲜 、干重均最高。 7月 ～ 8月鲜干重逐渐升高 ,而
9月 ～ 12月鲜干重逐渐减少。
　表 1　不同采收期广金钱草总黄酮 、异牡荆苷含量(n=3)
采收时间 总黄酮的含量 /% 异牡荆苷含量 /‰
6月 20日 2.40±0.053 0.60±0.005
7月 10日 2.59±0.063 0.65±0.008
7月 30日 2.49±0.025 0.48±0.006
8月 10日 1.98±0.012 0.45±0.004
9月 10日 1.89±0.032 0.40±0.009
10月 10日 1.64±0.018 0.11±0.003
10月 30日 1.39±0.023 未测出
　表 2　　不同采收期广金钱草的干 、鲜重比较(3株)
日期 鲜重 /g 干重 /g
7月 15日 1 000 300
7月 30日 1 600 480
8月 10日 2 000 750
9月 10日 1 900 750
10月 10日 1 650 650
10月 30日 1 500 600
12月 1日 1 250 550
2.4　不同采收部位异牡荆苷及总黄酮的含量　广
金钱草是以全草入药 ,但是此药材叶极易脱落 ,为了
比较其不同入药部位 ,对广金钱草的全草 、叶和茎中
的总黄酮 、异牡荆苷含量进行了测定 ,结果见表 3、
表 4。
　表 3　 广金钱草不同部位总黄酮的含量( x±s, n=3)
样品 全草中总黄酮含量 /% 叶中总黄酮的含量 /% 茎中总黄酮的含量 /%
样品 1 1.64±0.032 2.40±0.042 1.32±0.023
样品 2 1.85±0.023 3.92±0.023 1.15±0.014
样品 3 2.49±0.035 3.45±0.039 1.15±0.026
　表 4　 广金钱草不同部位异牡荆苷的含量( x±s, n=3)
样品 全草中异牡荆苷含量 /‰ 叶中异牡荆苷的含量 /‰ 茎中异牡荆苷的含量 /‰
样品 1 0.11±0.003 0.95±0.008 未测出
样品 2 0.32±0.006 1.08±0.006 未测出
样品 3 0.48±0.009 1.38±0.012 未测出
　　由测定的数据可知 ,广金钱草中叶和茎的总黄
酮 、异牡荆苷含量相差较大 ,叶中的总黄酮和异牡荆
苷含量明显高于茎中的含量 ,因此 ,以黄酮类成分为
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指示 ,则广金钱草的主要药用部位是叶。
2.5 　最佳采收期的确定　综合考虑不同采收期广
金钱草的产量 、总黄酮含量及异牡荆苷含量 、不同部
位黄酮类成分的含量及其变化趋势 ,笔者认为广金
钱草应在其叶茂盛 、茎粗壮时采收 ,最佳采收期 8月
份(始花期)为宜 。
3 　讨论
　　异牡荆苷为广金钱草黄酮类主要成分之一 ,本
实验选其与总黄酮共同作为衡量指标 。在供试品制
备中 ,分别考察超声处理时间(20、30、40 min)和加
入甲醇量(25、35、50 mL)对结果的影响 ,结果广金
钱草异牡荆苷最佳提取条件为加入 35 mL甲醇 ,超
声频率(50 kHz)处理提取时间为 20min。
　　广金钱草一般在清明节前后移栽 , 6月份后生
长速度加快 ,从种植直至 7月 ,广金钱草均为生长之
势 ,植株不断的长大 , 8 ～ 9月达到生长最高峰 , 9
月以后 ,植株生长停滞 ,并逐渐失水枯萎 ,叶片变黄
脱落 ,植株重量变轻 ,产量在 8 ～ 9月份达最高 。由
于叶中黄酮含量要远大于茎 ,广金钱草在生长初期
其叶在植株中所占比重大 ,因此黄酮的含量在 7月
份达到最大 , 8 ～ 9月其黄酮含量为相对稳定状态 ,
从产量和有效成份黄酮的含量变化上综合考虑 ,在
8月采收较好 ,而此时正是广金钱草开始开花的时
期 ,枝叶茂盛 ,因此 ,应在始花期采收较好。
　　本研究是以广东平远广金钱草 GAP种植基地
的广金钱草为样品 ,由于不同地区气候差异较大 ,因
此 ,该结论是否适用于其它地区 ,还有待进一步的研
究。
参 考 文 献
[ 1] 王植柔 , 白先忠 ,覃光熙 .广金钱草主要成分防治尿石
症的实验研究 [ J] .中华泌尿外科杂志 , 1991, 12(1):
13-16.
[ 2] 苏亚伦 , 王玉蓝 ,杨峻山 .广金钱草黄酮类化学成分的
研究 [ J] .中草药 , 1993, 24(7):343-344.
[ 3] 杨美华 , 卢兖伟 , 匡岩巍 ,等 .柱色谱-紫外分光光度法
测定广金钱草中总黄酮的含量 [ J] .中草药 , 2004, 35
(6):688-690.
收稿日期:2009-06-02作者简介:刘莎(1985-),女 ,硕士研究生 ,研究方向:现代生物技术与天然药物活性成分研究。＊通讯作者:于荣敏 , Tel:020-85220386, E-mail:tyrm@jnu.edu.cn。
·动物药研究·
不同动物来源中硫酸软骨素的提取及降压活性初探
刘　莎 ,沈建如 ,于荣敏＊
(暨南大学药学院 ,广东 广州 510632)
　　摘要　目的:从不同动物软骨中提纯硫酸软骨素(CS)并比较其降血压活性。方法:牛 、鸡软骨经稀碱-酶解法
提取 , Sevag法除蛋白 、季铵盐络合法分离纯化。以 SPF级小鼠建立高血压动物模型进行降血压活性测试。 结果:
提纯的硫酸软骨素经电泳 、色谱检查不含肽类 、氨基酸及其他酸性粘多糖 , 经红外光谱检查与 Sigma公司硫酸软骨
素 A一致。低剂量研究中牛肩胛骨硫酸软骨素(BCCS)及鸡肋骨硫酸软骨素(CCCS)均能显示出降血压的作用 ,并
且 BCCS起效快 , 但持续时间短;CCCS起效慢但持续时间长。结论:提取的 BCCS、CCCS纯度均较高 ,动物实验结果
显示 CCCS与 BCCS均具有一定的降压效果 ,其活性 CCCS优于 BCCS。
关键词　软骨;硫酸软骨素;纯化;降血压
中图分类号:R284.2/R977.6　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2010)02-0180-04
ExtractionandAntihypertensiveActivityAnalysisofChondroitin
SulfatefromDifferentAnimals
LIUSha, SHENJian-ru, YURong-min
(CollegeofPharmacy, JinanUniversity, Guangzhou510632, China)
Abstract　Objective:ChondroitinSulfate(CS)fromdiferentanimalswereextracted, whichantihypertensiveactivitieswerecom-
pared.Methods:CSfromthebovineandchickencartilageswereextractedbydilutedalkali-enzymehydrolysismethod, withremoved
freeproteinbySevagmethod, separatedandpurifiedbyquaternaryammoniumcomplex.Theirantihypertensiveactivitiesweretestedby
themodalofSPFrat.Results:TheextractedCSdidn′thavepeptide, aminoacidorotheracidmucopolysaccharidesdeterminedbye-
·180· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 33卷第 2期 2010年 2月