全 文 ：复叶耳蕨根中总酚含量的分析
李辉敏　刘频健
收稿日期:2010-08-13
通讯作者:李辉敏 , chengli1931@yahoo.com.cn
(九江学院基础医学院　江西九江　332000)
　　摘要:目的:对鳞毛蕨科复叶耳蕨属植物复叶耳蕨根中酚类物质进行了分析及含量测
定。方法:样品分别经乙醇—三氯乙酸的混合液 、 乙醇及水三种溶剂提取 , 以 Folin-酚
法于波长 500nm下测定 , 以没食子酸为标准计算样品中总酚物质的含量;结果:复叶耳
蕨根中的总酚含量较高 , 以 Folin-酚法测定其酚类物质的含量在 45 min内好女孩性好 ,
平均回归率为 97.56%。结论:该方法简便 , 可用于实际样品的测定。
　　关键词:复叶耳蕨;总酚;含量分析;Folin-酚法
　　中图分类号:R927.2　文献标识码:A　文章编号:1674 -9545 (2010)04-0069 -(03)
　　复叶耳蕨 (arachniodesexilisching, AEC)为
鳞毛蕨科复叶耳蕨属植物 , 广泛分布于世界热带
和亚热带湿润区域 , 以亚洲东部和东南部种类最
为丰富 , 我国主要分布于长江流域以南地区及山
东 、河南等省 , 具有清热利湿 , 抗菌消炎 , 镇静
作用 , 民间用于急性黄疸型肝炎 、 关节炎 、 腰腿
疼 、痢疾 、 烫火伤 、抗癌等[ 1] 。蕨类植物以全草
或根茎入药 , 含有多种化学成分 , 其中酚类化合
物是药用活性成分之一 。作者对九江地区产复叶
耳蕨根中酚类物质的含量进行分析 , 现报道如下。
1材料及方法 [ 2]
1.1试剂和材料
1.1.1试剂
(1)FolinⅠ 试剂:① 4%Na2CO3 溶液 , ②
0.2mol/L的 NaOH溶液 , ③1%的 CuSO4· 5H2O
溶液 , ④2%酒石酸钠 。①②等体积混合配成碳酸
钠 —氢氧化钠溶液 , ③④等体积混合配成硫酸铜
—酒石酸钠溶液 。碳酸钠—氢氧化钠溶液与硫酸
铜 —酒石酸钠溶液以 50 ∶1比例混合 , 制成的试
剂为 FolinⅠ试剂 。现配现用 。
(2)FolinⅡ试剂:将①50gNa2WO4 · 2H2O、
②12.5gNa2MO4 · 2H2O、 ③ 350mL蒸馏水 、 ④
85%H3PO425mL、 ⑤50mL浓 HCl均置于磨口回流
装置中 , 用文火洄流 10h(回流过程中不能使液
体沸腾 , 只能维持在缓慢冒气泡阶段)后 , 再往
装置中加入 ⑥87.4gLi2SO4 、 ⑦25mL蒸馏水 、 ⑧
数滴液溴 , 沸腾 15min, 以除去过量的溴 , 最后冷
却 , 即为 FolinⅡ试剂。用 0.1mol/LNaOH标定 ,
计算出 Folin-酚Ⅱ的浓度 , 并将 Folin-酚 Ⅱ试剂
稀释为 1mol/L。用棕色试剂瓶保存 , 贴上标签 ,
贮于冰箱内可长期保存 。 100μg/mL没食子酸 , 4
-氨基安替比林 —铁氰化钾试剂 (甲液:2%4 -
氨基安替比林乙醇液 , 乙液:8%铁氰化钾溶液),
2%4-氨基安替比林乙醇溶液 , 8%铁氰化钾溶
液 , 2%铁氰化钾 , 2%FeCl3乙醇溶液 。
1.1.2材料　材料采自九江市星子县 , 由九江学
院药学系吴家忠副教授鉴定 , 采集后将样品洗净 ,
切碎 , 80℃烘干 , 粉碎 , 过 80目筛 , 作为待测样
品备用。
1.2方法
1.2.1标准曲线的制备　精确称取一定量没食子
酸对照品 , 用乙醇溶解 , 定容配成没食子酸对照
品储备液 (99.20μg/mL)。分别取对照品溶液
0.1、 0.2、 0.4、 0.6、 0.8及 1.0mL于干燥试管
中 , 用蒸馏水补足 1mL。另取 1根干燥试管加
1mL蒸馏水作对照 , 分别加入 5mLFolin-酚试剂
Ⅰ , 于 25℃水浴中 10min, 后加入 0.5mLFolin-
酚试剂 Ⅱ , 立即混匀 , 再于 25℃水浴中放置
2010年第 4期No.4, 2010　　　　　　　　　　　　 九江学院学报 (自然科学版)JournalofjiujiangUniversity(naturalsciences) (总第 91期)(SumNo.91)
30min, 于 500nm处测样品的吸光度。测得结果用
最小二乘法作线性回归 , 得方程:Y=1.6×10-3
X+2.53 ×10-3 , 其线 性 范围 为 0.0159 -
0.1389μg/mL, 线性关系 γ=0.9991。以没食子酸
的含量表示样品中总酚物质的含量。
1.2.2样品处理　①乙醇 —三氯乙酸提取法:称
取样品 0.25g, 加入 10mL95%乙醇和 1mL10%三
氯乙酸液体于研钵中匀浆 , 再用 10%三氯乙酸定
容至 25mL, 静置 0.5h后 , 过滤 , 待测。 ②乙醇
提取法:称取 5g样品 , 置于洄流装置中 , 加 85%
乙醇 110mL, 80℃水浴中洄流 3h, 冷却后过滤 ,
滤液定容至 100mL待测 。③水提取法:称取 5g样
品 , 置于具塞锥形瓶中 , 加蒸馏水 100mL, 置于
80℃水浴中 3h, 冷却后过滤 , 滤液定容至 100mL
待测。
1.2.3样液测定　精确吸取滤液 0.2mL, 用溶液
(乙醇 ∶三氯乙酸 =2 ∶3配制)定容至 10mL。取
1mL样液加入 5mLFolin-酚 Ⅰ试剂 , 在 25℃水浴
中放置 10min, 再加入 0.5mLFolin-酚 Ⅱ试剂 ,
在 25℃水浴 30min, 每一样液做两管 , 以确保实
验的准确 , 另取一管加 1mL定容液做对照管;依
同样步骤加入 FolinⅠ 、 FolinⅡ试剂 , 用对照管调
零 , 测样液的吸光度 , 从回归方程中求得样液中
酚类的含量 (μg)。 (样液含量较高时 , 应适当稀
释倍数 , 使 A值在 0.15-0.8范围内)。再进一步
计算出 1g样品中酚类物质的含量 (%)。
2结果
2.1精密度实验　精密吸取没食子酸对照品溶液
0.2mL, 同 “1.2.3” 项下进行显色和测定 , 记录
吸光度 A, 吸光度 A的 RSD为 0.85 (n=6)。
2.2重现性实验　精密称取样品 , 按 “1.2.2” 及
“1.2.3” 项下进行样品处理 、 显色和测定 , 记录
吸光度 , 3种样品处理吸光度 A的 RSD分别为
1.6、 1.5、 1.8 (n=6)。
2.3稳定性实验　精密吸取没食子酸对照品溶液
0.2mL, 同 “1.2.3” 项下进行显色 , 分别在 15、
20、 25、 30、 35、 40、 45、 50、 55、 60min内测
定 , 结果表明样品在 15 ～ 45min内稳定。
2.4回收率实验　以复叶耳蕨根部乙醇 -三氯乙
酸提取溶液为材料 , 在样液中加适量标准液 , 按
前述操作进行 , 测吸光度 , 计算回收率 , 所得平
均回收率为 97.56 , RSD为 1.8 (n=6)。
2.5总酚含量测定结果　乙醇 -三氯乙酸提取法
所得样品总酚含量为 20.45mg/g, 乙醇提取法所
得样品总酚含量为 4.52mg/g, 水提取法所得样品
总酚含量为 12.45mg/g。
3讨论
本实验结果表明刺头复叶耳蕨根中酚类成分
的含量较高。分别用 3种溶剂提取复叶耳蕨根部
的酚类物质 , 其总酚含量高低依次为乙醇 -三氯
乙酸液 、 水提液 、 乙醇液 , 其中以乙醇 -三氯乙
酸液提取液中的含量明显高于其他两种溶剂提取
液。由此可见 , 用乙醇 -三氯乙酸液提取蕨类植
物中总酚较为合适 , 而其他两种提取溶剂仅提取
其中部分的酚类物质。从稳定性实验及重现性实
验可看出 Folin-酚测定蕨类中酚类的含量具有明
显的稳定性 , 重现性好 , 可作为刺头复叶耳蕨质
量控制中总酚含量测定的方法。此方法仪器要求
不高 , 操作简便快速。
参考文献:
[ 1] 李辉敏 , 石向群 , 刘频健.石墨炉原子吸收分光光度法测定复叶耳蕨根中铅 、 镉的含量
[ J] .中国药房.2010 , 21 (27):2554.
[ 2] 陈炳华 , 李淑慧 , 林菊霞 , 等.4种鳞毛蕨科植物中总酚含量的分析 [ J] .福建师范大学学
报 (自然科学版).2003, 19 (1):86.
AnAnalysisofTotalPhenolicsContentinthe
RootsofArachniodesExilisChing
LiHuimin, LiuPinjian
(BasicMedicalSchoolofJiujiangUniversity, Jiujiang, Jiangxi332005)　 (下转第 79页)
·70· 九江学院学报 (自然科学版)　　　　　　　　　　　 　　2010年第 4期
3讨论
从 ERIC-PCR指纹图谱条带的亮度和丰度可
以看出健康人肠道细菌菌群多样性较丰富 , 而慢
乙肝非活动期患者的肠道细菌菌群数目较少 , 同
时聚类分析树状 。不同个体间的肠道细菌菌群
DNA的组成相似性低 , 各有其特性;健康人之间
的肠道细菌指纹图谱的条带聚在一起 , 慢乙肝非
活动期患者之间的肠道细菌指纹图谱的条带聚在
一起。慢乙肝非活动期患者和健康人之间的肠道
细菌指纹图谱的条带聚相互参差在一起 , 没有明
显的归类聚集。这提示健康人细菌基因组 DNA的
组成与慢乙肝非活动期患者的肠道细菌基因组
DNA的组成不同的 , 慢乙肝非活动期患者肠道细
菌菌群多样性低于健康人 。
肠道细菌群落的 ERIC-PCR电泳指纹图谱可
以反映群落的结构特征 , 两个微生物群落的 ERIC
-PCR电泳指纹图谱的异同可以反映它们结构的
异同 , 但 ERIC-PCR电泳指纹图谱也有其局限
性 , 由于应用 ERIC-PCR技术分析混合细菌菌群
样品得到的图谱是一个细菌总 DNA指纹图谱 , 每
一条条带都可能含有多种序列 , 来源于多个细菌 ,
所以具有相同迁移速度的 DNA片断 , 只能断定它
们的相对分子质量相近 , 却不能肯定它们的碱基
序列相同 。如果利用核酸杂交就可以解决这个问
题 , 去掉一些序列不同的条带 , 从而更精确地分
析研究不同群落间结构的异同 , 笔者将在下一步
的实验中进行这部分的研究 。
参考文献:
[ 1] BartoschS, FiteA, MacfarlaneGT, etal.Characterizationofbacterialcommunitiesinfeces
fromhealthyelderlyvolunteersandhospitalizedelderlypatientsbyusingreal-timePCRandefects
ofantibiotictreatmentonthefecalmicrobiota[ J] .ApplEnvironMicrobiol, 2004, 70 (6):
3575.
[ 2] MKaliomaki, SSalminen, HArvilommi, etal.Probioticsinprimarypreventionofatopicdis-
ease:arandomisedplacebo-controledtrial[ J] .Lancet, 2001, 357:1076.
(责任编辑　胡安娜)
(上接第 70页)
ABSTRACT　OBJECTIVE:AnalysisoftotalphenolicscontentintherootsofArachniodesexilisChingwas
conducted.METHOD:ExtractedbyEtOH-TCA、 EtOH、 watersolvent, phenolicsquantitatedbyFolin-phenolrea-
gentat500nm.Thegallicacidwasusedasastandardcompound.RESULTS:Theresultsshowedthecontentoftotal
phenolicsintherootsofArachniodesexilisChingwashigh.Thestabilityofproducedcolorwasgoodin45minutes, there-
coverywas97.56%.CONCLUSION:Folin-phenolmethodwassuitableforcontentanalysisoftotalphenolicsin
ArachniodesexilisChing.
KEYWORDS　ArachniodesexilisChing;totalphenolics;contentanalysis;Folin-phenolmethod
(责任编辑　胡安娜)
·79·吴　浩 , ERIC-PCR技术分析慢乙肝非活动期患者肠道细菌菌群多样性