全 文 ：(食 品研究与开发》 2 0 0 2年 2月第 3 2卷第 1 期
分光光度法测定石决明口服液中的游离氨基酸氮
彭爱红 高 军 集美大学生物工程学 院 厦门 3 1 6 0 21
摘 要 应 用 分光光度法 测 定石 决明 口服液 中的游离氮基酸氮的含童 。 在 p H= 4 . 40的 Na A c一 HA C 缓冲溶液 中 ,
游 离氛基酸 氮与 乙跳 丙酮一 甲醛试剂产生显 色反应 , 于 波长 4 25 n m 处测 定显 色产物的吸光度值 。 方 法灵敏 、快速 、 准
确 , 所 .mJ 结果与国 家标 准检验 方法 ( 甲醛法 )相一致 。
关键词 分光光度法 石 决 明 口服液 游离氛基酸 氮
中药 中的石决明为软体动物门鲍科杂色鲍 (九
孔鲍 ) H a l i o t i S d i v e r s i e o l o r R e e v e 等的贝壳据有关
文献报道 , 其功能为平肝潜阳 、 清热明 目 , 主治头痛
眩晕 、 青光眼 、 高血压 、 眼底出血 、 白内障 、 角膜炎和
视神经炎等症 。 主要有效成分为精氨酸 、 甘氨酸 、丙
氨酸等二十几种氨基酸 。 集美大学 “ 海保明 ”课题组
根据石决明作 为保健品 的传统配方和人体营养消
化吸收的最新理论 , 对鲍鱼壳进行综合开发利用 ,
已开发生产出石决 明明 目保健 口服液 。 在对其营养
成分进行分析 的过程中 , 我们对游离氨基酸氮的测
定方法进行研究 。 游离氨基酸氮为蛋白质的分解产
物 , 是评价食品质量及营养价值的重要指标 。 其常
用的测定方法有 : 国标法 (甲醛电位滴定法 ) 和苟三
酮比色法等 。 甲醛电位滴定法作为国家推荐的标准
检验方法 , 虽有较高的准确度 , 但存在着 以下缺点 :
方法 的灵敏度低 ; 滴定终点不易掌握 , 对 甲醛浓度 、
滴定速度等要求苛刻 ; 且取样量大 、 分析速度慢 、 消
耗溶剂多 。 因而甲醛电位滴定法在应用上有一定的
局限性 。 苟三酮 比色法需在一定的 p H 条件下进行 ,
酸度过大时不显色 。 我们在文献 的基础上 , 利用乙
酞丙酮 一 甲醛作为显色剂 , 测定了石决明口 服液中
游离氨基酸氮的含量 , 该方法灵敏 、 快速 、 准确 , 所
测结果与国标法相一致 。
1 材料与方法
1
.
1 材料与仪器
本文所用石决明 口服液样品由 “ 海保明 ” 科研
组提供 ;
B ec k m a n 蛋 白核 酸分析仪 D U 6 4 0( 美 国贝克
曼 一库尔特公司 ) ;
10 0m g / L 氨基酸标准溶液分别为 : 准确称取
D L 一 酪氨酸 ( B R , 中国第二军医大学药学系合成药
物研究室 ,分析纯 ) 0 . 1 2 9 3 9 , 用水润湿溶解后 , 转人
10 0m L 容量瓶 中 , 用水稀释至刻度 ;
1
·
0 9 / L N H
3 一 N 标准溶液 : 准确称取硫酸钱
(分析纯 ) 0 . 4 7 2 0 9 于 10 0M L 容量瓶内 ,加水定容至
刻度 ,摇匀 : (用时稀释为 10 m g / L )
显色剂 : 巧 . 0 0m L 3 7 % 甲醛与 7 . S Om L 乙酞丙
酮 (化学纯 ) 混合 , 加水定容至 1 0 m L , 剧烈振荡使
其反映完全 ,放置 12 h 后使用 ;
p H = 4
.
4 0 缓冲溶液 : 1 0 0m L l m o l / L N a A C 和
1 0 0m L 2
.
Zm o l / L H A C 混合 :
其余试剂均为分析纯 , 水为蒸馏水 。
1
.
2 试验方 法
吸取适量样 品液或 N凡 一 N 标准溶液于 25 m L
容量瓶 中 , 加 8 . 75 m L 缓冲液和 7 . 0 m L 显色剂 , 加
水定容至刻度 ,混匀 ,于 1 0 0 C 水浴中加热 18 m in ,取
出用 冷水 冷却 至室 温 。 以试剂 空 白为参 比 , 用
B e e k m a n 蛋白核酸分析仪 D U 6 4 O在波长 4 2 5 n m 处
测定吸光度 。
2 结果与讨论
条件试验
吸收曲线
吸收曲线
卜一火一
泛公一炭刨来督
4 4 0
波长 / n m
1一N比一 N衍生物 /试剂空白
3一试剂空白 /水
2一A N衍生物 /试剂空自
图中示出了 p H 二 4 . 4 0 乙酸盐介质 中 , N H 3 一 N
和 D L 一 酷氨酸与 乙酞丙酮 一 甲醛显色剂反应产物
的吸收光谱 。 根据 H an t z s c h 反应原理和文献 ! 4 ’ , 认
5 8《食品研究与开发》 2 0 0 2年 2月第 2 3卷第 1 期
为 A N显色产物为 3, 5 一 二乙酞 一 2 , 6 一 二甲基 一
1
,
4 一 二氢化毗陡竣衍生物 。
由于石决明 口服液 中含有多种氨基酸 , 考虑用
某一种氨基酸作标准不如用 N H 3 一 N 作标准更 为
合适 , 因此 , 本文采用 N H 3 一 N 作标准液 。 由于在
4 O 0 n m 以下测定时试剂空白的吸光度较大 , 故选用
42 5 n m 作为测量波长 。
2
.
1
.
2 p H 对吸光度的影响
试验表明 ,溶液 p H 对吸光度影响显著 。 当 p H
< 3
.
20 时 , 显色不稳定 ; 当 p H > 4 . 80 时 , 溶液有浑
浊现象产生 ; 当 p H = 3 . 60 一 4 . 60 之间时 , 显色稳
定 , p H 二 4 . 4 0 时 , 吸光度值达到最大 , 因而选缓冲
溶液的 p H 二 4 . 4 0 。
2
.
1
.
3 显色剂量对吸光度的影响
试 验 表 明 , 当 显 色 剂 V < 6 . 50 m L 或 V >
8
.
0 0 m L 时 , 显色均不稳定 ; 当 V = 7 . 0 0一 7 . 5 0m L
之间时 , 稳定 , V 二 7 . 0 0m L 时 , 吸光度值达到最大 ,
本试验选择显色剂量 V = 7 O o m L 作为测定条件 。
2
.
1
.
4 加热温度对吸光度的影响
试验表 明 , 本反应随着加热温度的升高 , 显色
速度加快 。 当加热温度达到 70 ℃时 ,溶液开始显色 ;
溶液的颜色随着加热温度的升高而逐渐加深 , 并且
显色越来越稳定 ; 当加热温度达到 10 0℃时 , 吸光度
值达到最大恒定值 。 因而 , 选择 10 ℃ 的沸水浴加
热 。
2
.
1
.
5 加热时间对吸光度的影响
吸 光 度 A 随 着 时 间 的延 长 而增 大 , 当 T
< 10m i n
, 溶液显色浅且不稳定 ; 当 T = 18m i n 时 ,
吸光度值 A 达到最高值 , 即显色完全 , 颜色可稳定
Zh ; 当 T 二 2 0m in 时 , 溶液有浑浊现象产生 。 因而 ,
选择 18 m in 为本试验的最佳加热时间 。
2
.
2 工作 曲线
在选定 的试验条件下 , N践 一 N 的浓度在 O一
10 m g / L 范围内 , 吸光度 A 与 N H。 一 N 的浓度呈 良
好的线形关系 , 其 回归方程 A 二 0 . 0 8 4 8 2蛛 H 3 一 N 一
0
.
0 10 3
,
(瓜 H 3 一 、 的单位为 m g / L ) , 相关系数 ( r ) =
0
.
9 9 6 9
。
2
.
3 干扰 实验
以 5 0 u g N 玩 一 N 作实验来测定共存 离子的影
响 , 在 士 5 % 误差允 许范围 内 , 2 0 u g P b , + 、 z 才 + 、
H g
Z + 、 S b
, 十 ; 1 0 0 u g F e3
十
: m g 量的 K 十 、 N a 十 、 C扩十 、
M才十 、 C u Z 十 、 CI 一 、 s以 、 N q 、 蔗糖 、 葡萄糖 、 苯甲酸
盐 、 山梨酸盐 、柠檬酸 、 V C 均不干扰测定 。
2
.
4 样品分析及回 收试验
2
.
4
.
1 测定结果 及方法对照
表中分别列出了用本法和国标法所测得 四种不
同工艺 生产得 到的石决 明 口 服液 的游离氨基酸氮
值 。 通过 t 检验法统计分析 ,发现两种方法所的测定
结果无显著差异 , 即乙酞丙酮 一 甲醛显色法与甲醛
电位滴定法基本相一致本法重复 5 次测定 , 结果的
相对标准偏差 ( R S D )为 1 . 4 9% 一 4 . 3 0% 。
表 1 游离氮基酸氮含 t ( x 士 S D , n = 5)
样 品 本法 (m g / L ) 甲醛 电位滴定法 ( m g / L ) t * 检验
1 # 1 6
.
0 8士 0 . 2 4 1 5 . 8 6 士 0 . 2 7 1 . 9 6
2林 4 4 . 8 3士 0 . 8 1 、 4 4 . 7 8士 0 . 5 2 0 . 1 3 8
3 # 1 8
.
19 士 0 . 3 8 17 . 9 8土 0 . 3 5 1 . 2 4
4 # 1 7
.
6 2土 0 . 7 7 1 7 . 8 4土 0 . 2 4 0 , 6 4
* t 。 * 值 二 2
.
7 8 ( n = 5
、 p = 0
.
9 5 )
2
.
4
.
2 回收率试验
在一定量试样中 , 加人适量 gu N H 3 一 N 标准溶
液 , 按样品分析方法平行测定 , 得 回收率试验结果
(见表 2 ) 。
表 2 回收率试验结果表
原始量 加人量 测得重 回收率 平均回收率 R S D
样 品 u g / 2 5 m L u g / 2 5 m L u g / 2 5m L % % %
1 # 6 4
.
2 8
2 井 8 9 . 6 6
3 # 7 2
.
7 6
4 # 7 0
.
4 8
1 6 2
.
9 1
1 6 5
.
1 8
1 8 9
.
0 3
19 0
.
4 0
1 75
.
4 7
1 76
.
4 4
16 9
.
3 4
17 3
.
4 1
9 8
.
6 3
1 0 0
.
9 0
9 9
.
3 7
1 0 0 7 4
1 0 2
.
7 1
1 0 3
.
6 8
9 8
.
8 6
1 0 2
.
9 3
7 7 1
.
6 1
1 00
.
0 6 0
.
9 7
10 3
10 0
2 0 0
.
6 6
9 0 2
.
8 6
0
ǎU0C0 O八曰on甘né1刁.1`1,1,胜万且
由此可见 , 分光光度法测定石决 明口服液中游
离氨基酸氮 , 方法操作简便 , 快速 , 灵敏 , 选择性好 ,
特别适用于大批样品的测定 。
参 考 文 献
1 许正生 . 石决明炮制方法初探 . 基层中药杂志 . 2 0 0 0 , 14 ( 2) : 83
2 杨惠芬等主编 . 食品卫生理化检验标准手 册 . 北 京 : 中国标 准
出版社 , 19 9 7
3 大连轻工业学院等合编 . 食品分析 . 北京 : 中国轻工业 出版社 ,
19 9 4
4 张文德 一种选择性快速测定果蔬汁饮料 中氨基酸氮的分析方
法 . 食 品科学 , 19 9 7 , 18 ( 9 ) : 5 8
收稿 日期 : 2 0 0 1 一 1 1一 0 8