全 文 ：· 1012· China Pharm acy 2005 Vol.16 No .13 中国药房 2005年第 16卷第 13期
*国家自然科学基金项目(30271677;30371837)
#讲师 ,硕士。研究方向:中药活性成分及药理研究。电话:020-
31745563。E-mail:lixican@126.com
Δ通讯作者:教授 , 硕士。研究方向:中医药对干细胞的调控研
究。电话:020-36588581。E-mail:cdf 27212@21cn.com
ADR ,必须及时上报 。
据世界卫生组织在发展中国家的调查表明 , 住院患者中
ADR发生率在 10%～ 20%之间;有 5%的住院患者因 ADR而
入院;全世界有 1/3的死亡病例死因不是疾病本身 , 而是不合
理用药 [1 ] 。这些数字说明 ,药品在正常用法 、用量下也可能出现
很多与用药目的无关的有害反应 , 且表现出特有的严重性和危
害性 。因此 ,一种药品的上市恰是严密观察其安全性的开始 。通
过上市后的严密监测和报告 ,去获得大量的 ADR信息 ,并采用
科学的方法进行分析 、评价 ,尽可能地确定其因果关系 ,客观地
作出该药安全性评价 , 并采用特殊方式告知医师和患者 , 以达
到促进临床合理用药的目的 。
从上述 ADR报告分析可知 , 患者年龄与 ADR 发生无太
大关系 ,但严重 ADR的发生大多为高龄患者 ,这可能与高龄患
者机体各器官功能减退、基础疾病较多以及抵抗力减弱有关 。
从剂型分析可知 , 引起 ADR病例的剂型以注射剂为主 ,
占总例数的 81%, 且基本上都是以静脉滴注和静脉推注的途
径给药 ,这可能与静脉给药途径较直接 ,作用较迅速有关 。
调查病例中 , ADR 临床具体表现占前 4位的为皮肤粘膜
损害(大多为过敏性皮疹)、胃肠道损害 、神经系统损害、心血管
系统损害 。其中 ,以皮肤粘膜损害居首位 ,占总例数的 37%,这
可能与我国医药工业技术发展水平以及药品制备过程中提取
纯度有关 [2 ] 。因此 ,医药工业应加大科技投入 ,进一步提高产品
质量 ,以减少 ADR发生 ,提高人们的健康水平 。
由 ADR所涉及的药物种类可知 , 引起 ADR 发生的药物
大多为抗生素 、生物制剂以及中药注射剂 。其发生可能与药物
自身性质有关 ,因上述药物多为大分子物质 ,自身具有抗原性 ,
当进入机体后易引起抗原抗体反应;另一方面也可能与药品制
备过程中的生产工艺有关 [3 ] 。
4 结论
由于引起 ADR 的原因比较复杂 ,有的是药品的自身因素 ,
有的则与患者机体条件或疾病情况有关 。因此 , 临床医师如能
正确诊断疾病 , 制定合理的临床药物治疗方案 , 则可有效地避
免或减少 ADR 的发生 。
参考文献
[ 1] 国家药品监督管理局主编.药品不良反应监测管理法规
与专业知识培训[ M ] .第 1版.北京:中国医药科技出版
社 ,2000:103.
[ 2] 刘云房 , 黄永可.87例药品不良反应报表分析[ J] .药品
不良反应杂志 , 2004 ,6(3):193.
[ 3] 张丽娜 ,史惠卿 ,张 琴 , 等.穿琥宁注射液不良反应 45
例分析[ J].中国药房 , 2004 , 15(5):300.
(收稿日期:2005-01-19 修回日期:2005-03-07)
Identify Polysaccharide in Holothuria atra Jeager by Spectroscopy
LI Xican ,DU Shaohui ,HUANG Ling ,CHEN Dongfeng(Guang zhou Universi ty of TCM ,Guangzhou 510405 ,
China)
ZENG Heping(Faculty of Chemist ry ,South China U nive rsi ty of Techno logy ,Guangzhou 510641 ,China)
ZHENG Yu(Shantou Municipal Central Hospi tal of Guangdong Province , Shantou 515000 ,China)
ABSTRACT OBJECT IVE:To establish the method to identify t he po lysaccharide elem ent in Holo thuria at ra Jeager by
spectroscopy.METHODS:The purity o f po lysaccharide in Holo thuria a tra Jeager w as determined by electrophore tic met hod;the
infrared absorption spectrum , ult rav io le t abso rption spec trum , carbon spectra and hydrogen spectra of NM R w ere identified in
structure by infrared spectrophotomet ry , ultraviolet spectrophotomet ry and NM R spectrometry respectively.RESULTS :The
gel band afte r electrophoresis took blue colo r and the results o f spectrum determina tion account able fo r each o th-
er.CONCLUSION :Unifo rm ly constituent o f po lysaccharose w as found in t he Holo thuria atra Jeager , w hich w as an acidic
polysaccharose w ith vitrio lic esterf unc tion , w ithout glucopeptide;α-configu ration , α-g lucopyranose w as found and the in-
t ram olecular hydrogen bond w as fo rmed by hydrox ide radical.
KEY WORDS Holo thuria a tra Jeager;S pec trosopy ;Identification;Polysaccharide
·药品检验 ·
光谱法鉴定黑海参中的多糖成分 *
李熙灿 1 #,曾和平 2 ,郑 雨 3 ,杜少辉 1 ,黄 玲 1 ,陈东风 1Δ(1.广州中医药大学 ,广州市 510405;2.华南理工
大学化学学院 ,广州市 510641;3.广东汕头市中心医院 ,汕头市 515000)
中图分类号 R927;R93 文献标识码 A 文章编号 1001-0408(2005)13-1012-03
摘 要 目的:建立以光谱法鉴定黑海参中多糖成分的方法 。方法:采用电泳法测定黑海参中多糖纯度 ,并用红外分光光度法 、紫外
分光光度法 、核磁共振波谱法对其红外吸收光谱 、紫外吸收光谱 、核磁共振碳谱 、核磁共振氢谱进行结构鉴定 。结果:电泳后凝胶带
呈蓝色 ,光谱检测结果可相互解释 。结论:黑海参中存在均一组分的多糖成分 ,且为一种含硫酸酯基的酸性多糖 ,但不含糖肽;α-构
型 ,存在α-吡喃葡萄糖 ,分子中的羟基形成分子内氢键 。
关键词 黑海参;光谱;鉴定;多糖成分
中国药房 2005年第 16卷第 13期 China Pharmacy 2005 Vol.16 No.13 · 1013·
表 1 黑海参多糖的红外吸收峰
Tab 1 Infrared absorpt ion peak of Holothuria atra Jeager
polysaccharides
编号 波数(cm-1)
透光率
(%)编号
波数
(cm- 1)
透光率
(%)编号
波数
(cm -1)
透光率
(%)编号
波数
(cm-1)
透光率
(%)
1 3 920 67.9 8 3 737 59.3 15 1 412 36.0 22 963 30.1
2 3 905 67.4 9 3 713 57.1 16 1 384 37.5 23 930 40.8
3 3 894 67.5 10 3 457 16.0 17 1 240 8.7 24 853 37.3
4 3 865 66.5 11 2 944 70.2 18 1 164 39.8 25 770 49.8
5 3 855 65.1 12 2 361 85.6 19 1 131 30.5 26 683 40.5
6 3 804 64.4 13 1 631 20.4 20 1 050 12.5 27 582 25.8
7 3 753 61.3 14 1 571 39.8 21 1 001 19.9 28 483 39.2
表 2 黑海参多糖部分红外吸收峰的归属 [5 ～ 9]
Tab 2 Assignment of infrared absorption peak of
polysaccharides in Holothuria atra Jeager
编号 波数(cm-1) 透光率(%) 归属的诠释
10 3 457 16.0 -OH的特征吸收峰
13 1 631 20.4 C=O伸缩振动
14 1 571 39.8 -COO-中C=O的非对称伸缩振动
15 1 412 36.0 -COO-
16 1 384 37.5 -COO-中C=O的对称伸缩振动
17 1 240 8.7(最强吸收峰)硫酸酯基的特征吸收峰
20 1 050 12.5 S=O的伸缩振动
22 963 30.1 疑为末端-CH 3的摇摆振动
23 930 40.8 吡喃环的对称摇摆振动
24 853 37.3 α-糖苷键(C1 -H的横变角振动)
25 770 49.8 吡喃环的逆对称振动
/ 885 ～ 900 无吸收 无β -糖苷键
/ 817±7 无吸收 不含酮糖
/ 891±7 无吸收 无β -糖苷键(C1 -H的横变角振动)
海参(Sea Cucumber)系棘皮动物门(Echinodermat a)海
参纲(Holo thuriodea) 手目(Aspidochirota)动物 。全世界共有
1 100种 , 我国海域内有 100多种 , 10种品质较好 ,其中我国北
方以刺参(Apostichopus japonicus Se lenka)最为常见 。
在我国 ,海参不仅是佳肴 ,亦为一种滋补品 ,且作为药用也
已有悠久的历史 。早在明代 ,海参就收入本草 ,被列为补益药[ 1 ]。
清代赵学敏《本草纲目拾遗》称“海参性温补 ,足敌人参 ,故名海
参” [2 ] 。近年来人们发现 ,海参对许多疾病如肺结核咯血 、再生
障碍性贫血 、疴痢 、胃及十二指肠溃疡 、糖尿病 、小儿麻疹 、小儿
消化不良 、疮疖 、中耳炎、休息痢等均有疗效 。现代研究表明 ,海
参除含丰富的营养成分外 , 还含海参皂苷和海参多糖 2种有效
成分 [3 ] 。
黑(怪)海参(Holo thuria atra Jeager)是海参的一种 ,主产
于南海 。同其它海参一样 ,也含有多糖 。笔者采用紫外分光光度
(UV)法 、红外分光光度(IR)法 、核磁共振碳谱(13C-NM R)法 、
核磁共振氢谱法(1H-NM R)对黑海参中多糖成分进行鉴定 。
1 仪器与试药
1.1 仪器
高压电泳仪(美国 Bio -Rad公司);紫外光谱仪(日本 Shi-
madzu公司);1700红外光谱仪(德国 Perkin-Elemer公司);
DRX -400核磁共振仪(瑞士 Bruker公司)。
1.2 试药
黑海参采自南海;琼脂糖(电泳级 ,上海生化试剂厂);巴比
妥(分析纯 ,北京化学试剂公司 ,批号:69004224);溴酚蓝(分析
纯 ,北京化学试剂公司 ,批号:SCR71008053);十六烷基三甲基
溴化铵(Cet avlon ,超纯级 ,厦门星达隆化学试剂公司);甲苯胺
蓝(分析纯 ,厦门星达隆化学试剂公司)。
2 实验方法
2.1 黑海参中多糖成分的提取与纯度鉴定
将黑海参体壁研碎 ,再经酶降解 、酒精沉淀 、柱层析 、脱色 ,
得到白色粉末的黑海参多糖 [4 ] 。通过凝胶电泳法测定该多糖的
纯度 ,即取 0.6g 琼脂糖 ,置于三角瓶中 , 加入 0.06mol/L 巴比
妥缓冲液(pH=8.6)1 000ml ,置于水浴中加热融化 , 摇匀 ,即
得 0.6%的琼脂糖胶液 。将该琼脂糖胶液灌入高压电泳仪的夹
层内 ,冷却 。冷却的凝胶板上方有数个凹槽 ,在每个凹槽内先滴
入溴酚蓝示踪 ,再滴入已经配制好的 4%(浓度不能太高 ,否则
易引起拖尾)海参多糖溶液各 3滴 。然后 ,在高压电泳仪的容器
内加巴比妥缓冲液至完全淹没凝胶(约 3 000m l)。通冷凝水 ,并
接通电源(150V), 4h后 ,溴酚蓝已接近凝胶底部 ,停止通电 。将
凝胶板浸入 0.1%Cetavlon 溶液中 , 3h 后取出 ,将已被 Cetav l_
on溶液浸泡过的滤纸覆盖其上 , 在红外灯下 , 用电风扇吹干
(干燥的琼脂板便于操作且着色均匀)。然后 , 再放入 0.1%甲
苯胺蓝溶液(溶剂为醋酸-乙醇-水=0.1∶5∶5)中染色 ,此
时 , 整个凝胶均呈蓝色。将其放入不含甲苯胺蓝的空白溶液中
脱色 ,在阳极附近可看见一系列位移相同的均匀蓝色斑点 。
2.2 光谱鉴定
光谱法是检测多糖结构必不可少的方法 , 常见的光谱检测
方法主要有 UV 法 、IR法 、13C-NM R法 、1H-NM R法 4种 。
2.2.1 紫外吸收光谱的鉴定:将 “2.1” 项下黑海参多糖于
200nm ～ 400nm 波长范围内进行扫描 , 得黑海参多糖的紫外吸
收光谱 ,详见图 1。
2.2.2 红外吸收光谱的鉴定:将“2.1”项下黑海参多糖采用溴
化钾(KBr)压片法进行红外吸收光谱鉴定 ,光谱详见图 2。
由红外光谱仪检测出 28个峰 , 详见表 1;其部分峰的归属
详见表 2。
· 1014· China Pharm acy 2005 Vol.16 No .13 中国药房 2005年第 16卷第 13期
本刊讯 2005年 6月 8日 ～ 17日 , 卫生部副部长黄洁夫
率中国卫生代表团一行 6人访问了罗马尼亚和德国 。此次出访
的目的 , 是为进一步推动双边卫生合作协议的落实 , 学习和借
鉴两国在卫生体制改革等方面的经验;同时 , 出席在德国举行
的柏林首都健康大会 。
代表团拜会了两国卫生部 , 与罗马尼亚卫生部部长和德国
卫生部国务秘书分别进行了会谈 , 听取了两部关于医疗服务体
系 、医疗保障制度、公共卫生建设等方面的情况介绍 ,并参观了
两国的公立医院和医疗科研机构等 。代表团与两国卫生部还就
今后卫生合作的领域进行了探讨 。
卫生部副部长黄洁夫率团访问罗马尼亚和德国
2.2.3 13C-NM R的鉴定:以重水(D 2O)作溶剂 , 对多糖的
13C -NM R 进行检测 , 仪器给出的化学位移 δ值有 16.0 、
22.7 、23.3 、38.9 、49.6 、51.5 、61.4 、66.4 、67.4 、68.4 、71.1 、
71.8 、73.9 、75.2 、77.0 、79.3 、81.0 、97.7 、98.5 、99.7 、102.9 、
103.7 、175.1 、175.4 、181.5ppm , 13C-NM R 详见图 3。
2.2.4 1H -NM R的鉴定:以 D2O 作溶剂 , 对多糖的 1H-
NM R进行检测 ,光谱详见图 4。
3 结果与讨论
黑海参多糖中含有-COO -离子 , 故可向阳极移动 , 且一
系列位移相同的均匀蓝色斑点表明其为均一组分 。
由图 1可知 , 在 198nm 波长处有吸收 , 而在 280nm 波长
处没有吸收 , 表明不含糖肽 , 这与红外吸收光谱中无-NH 2组
峰(3 450 ～ 3 380 、1 650 ～ 1 500 、3 350 ～ 3 150 、1 613 、1 581 、
1 538cm -1)是一致的 。
由图 2可知 , 3 457cm -1是黑海参多糖中-OH 的特征吸
收峰 ,而在更高的波数处 ,尚有 9个吸收峰 ,由此可知 ,其-OH
可能形成了分子内氢键 , 而不是分子间氢键 ;黑海参多糖内
含-COO -和硫酸酯基 , 是一种典型的酸性多糖 , 这与化学方
法的检测结果一致 [ 4 ] ;在 853cm -1处有吸收 ,而在 885cm -1 ～
900cm -1处没有吸收 , 表明多糖的连接方式为α-苷键而不是
β-苷键;在(817±7)cm -1处无吸收 ,表明不含酮糖 ,这与高效
液相色谱(HPLC)法的检测结果一致 [4 ] ;黑海参多糖中的单糖
以吡喃环存在 ,从 HPLC 检测结构来看 ,至少存在α-D-吡喃
葡萄糖 ;C=O 的伸缩振动在 1 631cm -1处 , 比一般值 1
660cm ～ 1 800cm -1偏低 。原因可能是样品吸水或分子内部
C=O 与-OH成氢键 。另外 , 环的张力对 C=O 的伸缩振动
波数也有影响 ,环的张力大 ,波数也大 。此外 , 1 631cm -1也可反
证明黑海参多糖中存在吡喃环 。
由图 3可知 , δ值在 97ppm ～ 104 ppm内的 5个峰(97.7 、
98.5 、99.7 、102.9 、103.7ppm),表明黑海参多糖存在 5种不同
的糖残基 。其中 ,大部分位于 97ppm ～ 101ppm 范围内 ,表明大
部分为α-型连接 ,且极可能是α-D-吡喃葡萄糖的残基 。这
些与红外分光光度法及 HPLC法检测结果基本一致 [4 ] ;71.1 、
71.8 、73.9 、75.2ppm为 C 2 、C3 、C 4及 C 5的峰 [ 5 ];175.1 、175.4 、
181.5ppm 为-COOH上的碳原子 [7 ] 。
由图 4可知 , 其最有用的信息集中δ值为 4.5ppm ～
5.5ppm范围内 , 但由于黑海参多糖只溶于水 , 所以 , 只能用
D 2O 作为溶剂进行检测 。但溶剂中含有的 H峰 ,掩盖了大量有
用的结构信息 。其它区域的吸收由于化学位移较集中 , 无法获
得满意结果;尽管如此 , 在 5.6ppm 处尚有一积分为 0.35的
峰 ,如此高的δ值只可能由α-型端基 C1产生 [10 ] 。这与上述分
析结果一致。
总之 ,黑海参中存在多糖成分 ,且为均一组分 。通过紫外吸
收光谱 、红外吸收光谱 、13C-NM R和 1H-NM R鉴定 ,确定该
多糖是一种酸性多糖 ,内含硫酸酯基 ,不含糖肽;α-构型 ,存在
α-吡喃葡萄糖 ,分子中的-OH 形成了分子内氢键 。
参考文献
[ 1] 姚可成(明).食物本草(点校本)[ M ] .北京:人民卫生出
版社 , 1994:695.
[ 2] 赵学敏(清).本草纲目拾遗(卷十)[ M ] .上海:商务印书
馆 , 1955:495.
[ 3] 李熙灿.海参及海参中的化学成分综述[ J] .辽宁中医学
院学报 , 2004 ,6(4):341.
[ 4] 李熙灿 , 曾和平 , 杨世柱 , 等.黑海参多糖化学组成的研
究[ J].广州化学 ,1998 , 1:18.
[ 5] 吴寿金 ,赵 泰 ,秦永琪 ,等.现代中草药成分化学[M ] .
北京:中国中医药出版社 , 2002:26.
[ 6] 吴东儒.糖类的生物化学 [ M ] .北京:高等教育出版社 ,
1987:814.
[ 7] 徐任生主编.天然产物化学[ M ] .第 2版.北京:科学出
版社 , 2004:28.
[ 8] 董庆年.红外光谱法[ M ] .北京:石油化学工业出版社 ,
1977:99.
[ 9] 张惟杰.复合多糖的生化研究技术[M ].上海:上海科技
出版社 , 1987:151.
[10] 霍光华 ,李来生 ,高荫榆.波谱在多糖结构分析上的应用
[ J].生命的化学 ,2002 , 22(2):491.
(收稿日期:2005-03-21 修回日期:2005-04-10)