全 文 ：广东石豆兰不同提取部位体外抗肿瘤实验研究
吴斌1 ,吴德康1 ,陈坚波2　(1 南京中医药大学药学院 , 江苏 南京　210029;2 金华医学院 ,浙江 金华　321000)
摘要:目的　考察了广东石豆兰各个提取部位的体外抗肿瘤活性 ,旨在寻找广东石豆兰的活性部位及作用机制。方法　
以体外培养的人宫颈癌细胞(Hela)为模型 ,利用 MTT快速比色法 , 5-FU为阳性对照。结果　广东石豆兰的乙酸乙酯和正
丁醇部位具有一定的杀伤肿瘤细胞的作用。结论　广东石豆兰的细胞毒活性物质主要存在于乙酸乙酯部位和正丁醇部
位。
关键词:广东石豆兰;MTT;抗肿瘤
中图号:R285.5　　　文献标识码:A　　　文章编号:1000-5005(2004)02-0114-02
　　广东石豆兰为兰科石豆兰属植物广东石豆兰
Bulbophyllum kwangtungense Schltr 的全草 , 产于广
东 、广西 、福建 、浙江等南方省份 ,是一味珍稀的民
间中草药 。民间用于阴虚肺痨 ,风湿病。近年来
发现该植物对某些肿瘤有效。本文以体外培养的
人宫颈癌细胞(Hela)为模型 ,考察了广东石豆兰
各个提取部位的体外抗肿瘤活性 ,旨在寻找广东
石豆兰的活性部位及作用机制 。
1　材料与方法
1.1　材料
人宫颈癌细胞(Hela)细胞株为贴壁细胞 ,由
浙江大学提供 ,培养于含 10%小牛血清的 RPMI
1640培养基中(内含青霉素 100 U mL ,链霉素 100
μg mL),在 37℃, 5%CO2 条件培养 ,每 2 ～ 3 d传
一代 。
1.2　药品与试剂
广东石豆兰不同提取部位的制备:广东石豆
兰全草粉碎 ,加乙醇 5倍量冷浸 2周 ,回收乙醇至
无醇味后加水混悬 ,水液分别用石油醚 、乙酸乙
酯 、正丁醇萃取 ,得石油醚提取物SSDL 、乙酸乙酯
提取物 YSDL 、正丁醇提取物 ZSDL 和水提取物
HSDL。提取物真空干燥至干 ,用前以生理盐水配
制并进行倍量稀释 。阳性对照药为 5-氟尿嘧啶
(5-FU),批号为020921 ,生产单位为南通精华制药
厂 ,用前以生理盐水配制并稀释 。小牛血清为
Hyclone公司产品 , RPMI1640为美国GIBCO公司
产品 ,MTT (四氮唑 3-[ 4 , 5-dimethylthiazol-2-yl] -2 ,
5-diphenyltetrazoliumbromide)、DMSO 为 Sigma 公司
产品 。MTT临用前以无血清的 RPMI 1640配制成
5 mg mL[ 1] 。
1.3　仪器
酶标仪:美国 Bio Rad3550。CO2 培养箱:For-
ma Sientific Inc。培养板:美国 Corning 。
1.4　MTT法测定药物的抗肿瘤作用
人宫颈癌细胞(Hela)以 1×104 孔的数量接
种于 96孔培养板中 ,在含 5%的 37℃培养箱中继
续培养48 h ,分别加入生理盐水 、不同浓度的 SS-
DL、YSDL 、ZSDL 、HSDL 和 5-FU溶液 ,每个浓度设
6个平行孔。药物及阳性药终浓度为 0.01 、0.1 、
1 、10 、100μg mL。继续温育培养 48 h后 ,各孔分别
加入 20μL MTT 温育 4 h后 ,弃去培养基 , 用MTT
染色 , 加入100 μL DMSO 。MTT 在活细胞线粒体
脱氢酶作用下发生还原反应 , 生成 Formazane 结
晶 ,溶于二甲基亚砜(DMSO)中 , 显蓝紫色[ 2] ,在
595 nm 处有较大光吸收 ,参考波长 655 nm ,震荡
器均匀震荡混匀 ,于 595 nm波长处读板。依据测
得的吸光度值计算细胞存活率 ,进而计算抑制
率[ 3] 。
　　细胞抑制率(%)=1-试验组吸光度值对照组吸光度值 ×100%
2　结果
将不同浓度的 SSDL 、YSDL 、ZSDL 和 HSDL 分
别与 Hela细胞作用 48 h后 ,用 MTT 法测得细胞
收稿日期:2003-11-12;修稿日期:2003-12-29
作者简介:吴斌(1976-),男 ,浙江湖州人 ,南京中医药大学 2001级硕士研究生。
—114— 南京中医药大学学报 2004 年 3月第 20 卷第 2 期JOURNAL OF NANJING TCMUNIVERSITY Vol.20 No.2 Mar .2004
DOI :10.14148/j.issn.1672-0482.2004.02.018
的存活率 ,进而计算抑制率(见表 1 ～ 4)。YSDL
和ZSDL 的细胞毒作用较为明显 ,并有一定的量
效关系。用Sigma Plot 5.0分析其 IC50分别为 10.3
μg mL 和 11.6 μg mL。SSDL 和 HSDL 的 IC50都大
于20μg mL ,无明显细胞毒作用。说明广东石豆
兰的细胞毒活性物质主要存在于乙酸乙酯部位和
正丁醇部位。
表 1　石油醚提取物 SSDL对人宫颈癌细胞
Hela的抑制作用
浓度 μg·mL-1 抑制率(%)石油醚提取物 5-FU
0.01 4.85 10.20
0.1 9.46 20.12
1 14.68 40.58
10 23.49 81.01
100 36.47 91.23
表 2　乙酸乙酯提取物 YSDL对人宫颈癌细胞
Hela的抑制作用
浓度 μg·mL-1 抑制率(%)乙酸乙酯提取物 5-FU
0.01 5.68 10.20
0.1 15.26 20.12
1 39.45 40.58
10 80.62 81.01
100 88.31 91.23
表 3　正丁醇提取物ZSDL对人宫颈癌细胞
Hela的抑制作用
浓度 μg·mL-1 抑制率(%)正丁醇提取物 5-FU
0.01 5.42 10.20
0.1 13.62 20.12
1 40.35 40.58
10 70.18 81.01
100 86.53 91.23
表 4　水提取物HSDL对人宫颈癌细
胞Hela的抑制作用
浓度 μg·mL-1 抑制率(%)水提取物 5-FU
0.01 4.02 10.20
0.1 8.51 20.12
1 16.35 40.58
10 23.28 81.01
100 36.43 91.23
3　讨论
广东石豆兰主要成分为联苄类化合物 ,关于
此类化合物的抗肿瘤活性也有报道[ 4] 。一般认
为 ,经体外药物筛选 ,中药提取物的 IC50<20 μg
mL ,且呈现剂量依赖性 ,该药就具有杀伤肿瘤细
胞的作用[ 5] 。该研究中可以发现广东石豆兰的乙
酸乙酯和正丁醇部位具有一定的杀伤肿瘤细胞的
作用 ,而石油醚部位和水部位的细胞毒作用不明
显或以其他的作用机制发挥抗肿瘤作用 ,有待进
一步研究 。
参考文献:
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In Vitro Anti-tumor Experiment on Extraction of Different Parts of Bulbophyllum Kwangtungense
WU Bing1 , WU De-kang1 , CHEN Jian-bo2
(1Pharmacology College of Nanjing University of Traditional Chinese Medicine , Nanjing , Jiangsu Province , 210029 , China;2 Jinhua
Medical College , J inhua , Zhejiang Province , 321000 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To observe the anti-tumor activity of different parts of Bulbophyllum Kwangtungense so as to look for the
active part and the mechanism.METHOD　With the in vitro cultivated human cervical carcinoma cell(Hela)as the model , MTT col-
orimetric method was used with 5-FU as the positive control.RESULT　The acetic ether and butyl alcohol in Bulbophyllum Kwangtun-
gense have anti-tumor effect.CONCLUSION　The active anti-tumor components in Bulbophyllum Kwangtungense were acetic ether
and butyl alcohol.
KEY WORDS:Bulbophyllum Kwangtungense;MTT;anti-tumor
—115—吴斌 , 等:广东石豆兰不同提取部位体外抗肿瘤实验研究　第 2期