全 文 ：［收稿日期］ 20150623(009)
［基金项目］ 四川省教育厅重点项目(2010A036)
［第一作者］ 陀扬凌，在读硕士，从事中药化学和中药质量控制研究，Tel:18384255763，E-mail:837920817@ qq． com
［通讯作者］ * 张旭，博士，副教授，从事中药化学和中药质量控制研究，Tel:028-61800231，E-mail:16429511@ qq． com
赶黄草的指纹药动学
陀扬凌，刘宇，娄涛涛，欧小洪，张旭*
(成都中医药大学 药学院，中药材标准化教育部重点实验室，四川省中药资源系统研究
与开发利用重点实验室———省部共建国家重点实验室培育基地，成都 611175)
［摘要］ 目的:通过研究赶黄草的指纹药动学，为揭示中药血清指纹成分群吸收、分布和代谢规律提供参考。方法:大鼠
灌胃给药，眼静脉丛采血，用甲醇沉淀蛋白，采用 HPLC 分析血清样品，流动相乙腈(A)-0. 1%甲酸水(B)梯度洗脱(0 ～ 70
min，10% ～50%A;70 ～ 75 min，50% ～10%A)，检测波长 280 nm，柱温 30 ℃，流速 0. 8 mL·min －1。建立赶黄草给药后血清样
品的指纹图谱，确定入血成分。结果:发现 6 个入血成分，连续灌胃给药 3 d后总入血成分浓度达到饱合，停药 36 h后，基本代
谢完全。结论:给药后血清中 6 个移行成分可能为赶黄草的药效物质基础;总入血成分药-时曲线变化规律与药物代谢动力学
的吸收、分布、代谢过程类似，血清指纹成分群达到饱和时间较长，与中药起效慢、作用时间久的特点吻合，为中药的指纹药动
学、药效物质基础及半衰期研究提供新思路。
［关键词］ 赶黄草;血清指纹图谱;指纹药动学;药-时曲线;灌胃给药
［中图分类号］ Ｒ969. 1;Ｒ945;Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2016)03-0085-04
［doi］ 10. 13422 / j． cnki． syfjx． 2016030085
［网络出版地址］ http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /11． 3495． Ｒ． 20151214． 1609． 002． html
［网络出版时间］ 2015-12-14 16:09
Fingerprint Pharmacokinetics of Aerial Part of Penthorum chinense
TUO Yang-ling，LIU Yu，LOU Tao-tao，OU Xiao-hong，ZHANG Xu*
(Pharmacy College，Chengdu University of Traditional Chinese Medicine，Key Laboratory of Standardization of
Chinese Herbal Medicine，Ministry of Education，Key Laboratory of Systematic Ｒesearch，Development
and Utilization of Chinese Medicine Ｒesources in Sichuan Province-Key Laboratory Breeding Base of Co-founded
by Sichuan Province and Ministry of Science and Technology，Chengdu 611175，China)
［Abstract］ Objective:To reveal absorption，distribution and metabolic rule of serum fingerprint
component group of traditional Chinese medicine by investigating fingerprint pharmacokinetic of Penthorum
chinense． Method:Ｒats were administered orally，blood sampling by ophthalmic venous plexus，serum was
separated by centrifugation． HPLC was employed to analyze serum samples with mobile phase of acetonitrile-0. 1%
formic acid for gradient elution， flow rate of 0. 8 mL·min －1 and detection wavelength at 280 nm． Based on
establishment of serum fingerprints of P． chinense， total constituents absorbed into blood were determind by
comparing fingerprints of ethanol extract，medicated serum sample and blank serum sample． Ｒesult: Six
components were found into the blood including three prototype components and three metabolic components．
Concentration-time curves revealed that total concentration had reached saturation after 3 days and removed all
components after 36 h． Conclusion:Six components may be basis for efficacy substances in P． chinense，change
law of total concentration-time curves is similar with absorption， distribution and metabolism process in
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pharmacokinetics． Components group of serum fingerprint reaches saturation with long time，which is the same as
traditional Chinese medicine (TCM)takes a slower effect and keep a long time． It can provide new ideas for
fingerprint pharmacokinetics，pharmacodynamics material base and half-life study of TCM．
［Key words］ Penthorum chinense;serum fingerprint;fingerprint pharmacokinetics;concentration-time
curve;intragastrical adiministration
赶黄草功能清热、利尿、健脾、祛黄疸等，具有抗
氧化［1］、保肝［2］抑菌［3］、抗突变［4］、降血糖［5］和降血
脂［6］等作用。临床用于治疗病毒性肝炎［7-11］、肝纤
维化［12-13］、脂肪肝［14］等疾病，疗效显著。现民间流
行日常饮用赶黄草茶以预防酒精肝、脂肪肝等肝病。
关于赶黄草的化学成分、含量测定及药理作用等研
究已有文献报道［1-6，15-16］，但尚无其指纹药动学的研
究报道。
中药指纹药动学即指纹药物动力学，是借助于
动力学原理和现代分析手段，通过定性、定量解析药
物指纹图谱，将可知化学成分的指纹和体内代谢过
程从数量上联系起来，研究药物活性成分和有效部
位在体内吸收、分布、代谢、排泄的动态变化规
律［17-18］。中药指纹药动学适合于研究中药或中药
复方整体有效物质在体内的变化过程，追踪中药药
效物质群。由于中药指纹药动学技术尚处于起步阶
段，各方面有待探索与充实，本实验以赶黄草为例，
对其指纹药动学进行研究，为寻找和追踪中药药效
物质群提供新思路和方法。
1 材料
AnkeTDL-60C型台式离心机(上海安亭科学仪
器厂)，H2020Ｒ 型台式高速离心机(湘仪离心机仪
器有限公司)，MTN-2800W 型氮气吹干仪(上海巴
玖实业有限公司)，1500 系列高效液相色谱仪(美国
SSI公司)，DV215CD型电子天平(赛多利斯科学仪
器北京有限公司)。
赶黄草购买于荷花池药材市场，经成都中医药
大学马俞英教授鉴定系赶黄草 Penthorum chinense
的地上部位，样本保存于成都中医药大学科技楼
606 实验室。试验用水为乐百氏纯净水，乙腈、甲酸
为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
SFP级 SD大鼠，体重(250 ± 20)g，雄性，由成
都达硕实验动物中心提供，合格证号 SCXK(川)
2009-124 空调控制室温约 22 ℃，相对湿度 40% ～
50%，通风条件良好，环境相对安静。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Diamaonsil C18色谱柱(4. 6 mm ×
250 mm，5 μm)，流动相乙腈(A)-0. 1%甲酸水(B)
梯度洗脱(0 ～ 70 min，10% ～ 50% A;70 ～ 75 min，
50% ～10%A)，检测波长 280 nm，柱温 30 ℃，流速
0. 8 mL·min －1，进样量 10 μL。
2. 2 供试品溶液的制备
2. 2. 1 灌胃液的制备［19］ 精密称定赶黄草粉末
(过 60 目筛)适量，分别加 10，8，8 倍量 70%乙醇回
流提取 3 次，提取时间分别为 2，1，1 h，过滤，减压浓
缩得浸膏。配成 1 g·mL －1赶黄草醇提物混悬液，供
灌胃用。
2. 2. 2 供试液的制备 取赶黄草醇提物浸膏，用甲
醇配成 0. 1 g·mL －1溶液，经 0. 45 μm 微孔滤膜滤
过，即得。
2. 2. 3 采血方法及血清供试液的制备 从大鼠眼
静脉丛取血约 0. 5 mL 置于 1. 5 mL 离心管中，置
37 ℃水浴加热 10 min，离心(3 500 r·min －1，10 min，
下同)，分离血清。取血清 0. 2 mL 置于 1. 5 mL 离
心管中，加入甲醇 0. 3 mL，涡旋震荡 60 s，离心，分
离上清液;沉淀物加甲醇 0. 3 mL重复处理 1 次。合
并上清液，氮气吹干。加甲醇 40 μL，涡旋震荡60 s，
12 000 r·min －1离心 10 min，上清液供 HPLC 分
析用。
2. 3 灌胃给药方案考察 取同批大鼠 6 只，随机分
为低、中剂量组，大鼠给药量按动物与人体表比换算
法，大鼠日服量 =人日服量 ×大鼠与人的体表比 =
30 × 0. 018≈0. 5 g［20］。低、中剂量组分别相当于成
人临床最大剂量的 10，20 倍，灌胃剂量分别为 5，
10 mL·kg －1。未灌胃给药前取空白血。连续灌胃给
药 5 d，每天 1 次，每天在灌胃后 0. 5 h 从大鼠眼静
脉丛处取血并检测，见图 1。低剂量组在第 3 天检
测出移行成分，第 5 天成分最多;中剂量组在第 1 天
检测出移行成分，第 3 天成分最多，至第 5 天成分数
量不变，说明给药 3 d，赶黄草入血成分到达饱和状
态。故灌胃给药方案为按 10 mL·kg －1连续灌胃大
鼠 3 d，每天 1 次。
2. 4 血清指纹图谱研究 取同批大鼠 6 只，未灌胃
给药前取空白血。按 2. 3 项下方法灌胃，于最后 1
次灌胃给药 1 h后按 2. 2. 3 项下方法取血及制备血
清样品，照 2. 1 项下色谱条件测定，建立血清指纹图
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S1. 空白血清;S2 ～ S6 分别为第 1，2，3，4，5 天的含药血清
图 1 赶黄草低剂量组(A)和中剂量组(B)血清样品的 HPLC
Fig． 1 HPLC chromatograms of serum sample with low (A)and
middle (B)dose group of Penthorum chinense
谱，见图 2，3。结果血清指纹图谱有 13 个共有峰，7
个内源性成分(峰号分别为 1，2，5，8，10，12，13)，6
个移行成分(峰号分别为 3，4，6，7，9，11)，其中 6，9，
11 号峰为药材原型成分。
图 2 6 批赶黄草血清样品指纹谱
Fig． 2 Fingerprint chromatograms of rat serum samples after being
administrated 6 batches of Penthorum chinense
图 3 空白血清(S1)，赶黄草血清样品(S2)及药材(S3)的 HPLC
Fig． 3 HPLC fingerprint of rat serum after being administrated
Penthorum chinense (S2)and blank serum (S1)and Penthorum
chinense (S3)
2. 5 赶黄草指纹药动学的研究
2. 5. 1 给药过程中入血成分群总峰面积相对平稳
的时间 取同批大鼠 6 只，未灌胃给药前取空白血。
按 10 mL·kg －1连续灌胃 7 d，每天灌胃后 0. 5 h于大
鼠眼静脉丛按 2. 2. 3 项下方法取血及制备血清样
品，按 2. 1 项下色谱条件测定，采集数据，绘制 6 个
入血成分色谱峰总面积的药-时曲线，结果显示在第
1 ～ 3 天逐渐增长，第 3 ～ 7 天曲线相对平稳，说明第
3 天时赶黄草入血成分被吸收达饱和状态。
2. 5. 2 停药后入血成分群代谢变化研究 取同批
大鼠 6 只，未灌胃给药前取空白血。按 10 mL·kg －1
连续灌胃 3 d，每天 1 次。于最后 1 次灌胃给药后按
不同时间点(0. 5，1，2，4，8，12，24，36 h)从大鼠眼静
脉丛取血并测定，观察入血成分峰面积变化情况。
结果停药后 24 h内检测到 6 个入血成分(峰号分别
为 3，4，6，7，9，11)，六者在不同时间点的总峰面积
分别为 240 304，276 897，288 212，369 655，257 135，
240 616，187 569，57 276。见图 4。说明停药后 4 h
达最大血药浓度，36 h仅检测出 4 个移行成分，且总
峰面积较小。赶黄草指纹药动学研究显示其规律与
药物代谢动力学的吸收、代谢相似。
S1. 空白血清;S2 ～ S9 分别为停药后 0. 5，1，2，4，8，12，24，36 h 的含
药血清
图 4 赶黄草停药后不同时间点的含药血清 HPLC指纹谱
Fig． 4 HPLC fingerprints of drug-containing serum at different
time after stopping administration of Penthorum chinense
3 讨论
实验动物未曾禁食，采用多次灌胃给药方式，以
便与人体用药方式相同。预试验设计了高、中、低 3
个剂量组，但由于高剂量组在实验第 2 天便出现了
动物死亡现象，故撤销高剂量组。采用 HPLC 对比
含药血清、空白血清和药材的指纹图谱，确定了入血
成分，由于采用 UV检测器，有遗漏入血成分检出之
虑，后续将采用 UPLC-MS研究中药指纹药动学。
通过建立赶黄草在大鼠血清中移行成分的指纹
图谱，考察血清化学成分色谱峰的总面积与时间的
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关系，从而揭示中药入血成分群的吸收代谢规律，为
中药半衰期研究提供新思路。中药成分复杂，其疗
效的发挥是多种成分协同作用的结果，中药口服给
药形式注定入血成分才能产生作用，而通过指纹药
动学揭示中药整体入血成分在体内的吸收分布代谢
规律，可更客观和全面地反映了中药有效成分群在
体内的药动学过程，可对入血化学成分进行分离与
鉴定，明确入血成分化学结构后，再作相应的药理学
筛选，为追踪和研究中药药效物质群提供新方法，并
大大提高寻找中药药效物质的效率，为指导中药临
床用药提供参考。
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［责任编辑 刘德文］
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