全 文 ：蒙药广枣总黄酮对培养大鼠心肌细胞的作用△
内蒙古包头医学院 ( 014010)　覃建民　杨玉梅　许翠英　徐继辉　吴秀英　李增唏
内蒙古中蒙医研究所 ( 010020)　周长凤　冯国庆　白音夫　宋一亭
提　要: 本文证实广枣总黄酮 ( TFC)可显著对抗培养大鼠心肌细胞团自发性搏动节律失常 ,并使 CaCl2、异丙
肾上腺素累积量 -效曲线右移 ,最大反应降低 ,抑制 CaCl2和异丙肾上腺素对培养大鼠心肌细胞的正性频率
效应 ,但与心得安的作用不同。结果表明 , TFC在整体或细胞水平的抗心律失常作用 ,主要是对心肌细胞的直
接作用 ,其抗心律失常的机制可能与 TFC拮抗 Ca2+ 内流和 β受体阻滞作用有关。
关键词: 广枣总黄酮 ;培养心肌细胞 ;心律失常 ;正性频率作用 ;钙拮抗药
中图分类号: R291. 1　文献标识码: B　文章编号: 1006— 6810( 2000) 04— 0041— 02
△国家自然科学基金资助项目 , 39770453
　　广枣总黄酮 ( to tal flav ones of Choero spondias
axilla ris fr uitu,简称 TFC)由漆树科南酸枣属植物南酸
枣 Choer ospondias ax illa ris( Roxb. ) Burtt et Hill的成
熟干燥果实广枣中分离出的活性成分。 广枣为蒙医传统
用药 ,《四部医典》对其功效已有记载〔1〕。 我室曾证实 ,
TFC对实验性急性心肌缺血导致的多种房性和室性心
律失常模型具有明显保护和对抗作用〔2. 3〕。 本文观察
TFC对培养大鼠心肌细胞自发性搏动节律失常 , CaCl2、
异丙肾上腺素所致培养大鼠心肌细胞正性频率作用的影
响 ,以探讨 TFC抗心律失常作用的可能机理。
1　实验药物
TFC由内蒙古中蒙医院国家蒙药制剂中心提供 ,批
号 981203。 Eag le培养 ( M EM) , Gibco公司产品。胰蛋
白酶 Difco 1∶ 250; 5% CaCl2 ,北京第三制药厂生产 ,批
号 810925。维拉帕米 ( Verapamil, Ve r)上海禾丰制药厂
生产 ,批号 970201。 盐酸异丙肾上腺素 ( Isoprenaline,
Iso )上海禾丰制药厂生产 ,批号 990101。 心得安
( Propr anolol, Pro ) ,大同云岗制药厂生产 ,批号
9910012。
2　实验方法
2. 1　心肌细胞培养:按文献〔4〕方法 ,取新生 1～ 4天的
大鼠乳鼠 ,在无菌条件下开胸 ,切取心室置盛有 Hanks
液平皿中 ,冲洗 3次。 将心室剪成约 1mm3碎块 ,加入
0. 1% 胰蛋白酶溶液 (用无钙镁磷酸缓冲液配制 ) ,在磁
力搅拌器上 37℃水浴中消化 5分钟 ,自然沉淀后弃上
清液 ,沉淀组织块中再加入胰蛋白酶溶液 ,按上法消化
10分钟 ,吹打 2分钟 ,自然沉淀后上清液移入离心管
中 ,加入等量冷 Hanks液终止消化 ,离心 ( 128× g ,
10min )后弃上清液 ,沉淀再用 Hanks液清洗 2次 ,加
入含 10%小牛血清的 Eag le培养基制成细胞悬液。 再
按上法将沉淀的组织块反复消化数次 ,直至完全分散
为止。 将各次消化制备的细胞悬液集中 ,制成浓度为 2
× 106 /ml的细胞悬液 ,按 3ml /瓶接种于玻璃培养瓶
中 , 37℃闭瓶培养备用。
2. 2　培养心肌细胞自发性搏动节律失常实验〔5〕:选
用培养 2～ 3天搏动节律不规则的细胞团 ,随机分为
对照组、单纯搏动节律不齐 (单纯型 )和搏动节律不
齐伴有纤颤或扑动 (纤扑型 )组。先将培养瓶置 37℃
恒温倒置显微镜下 ,稳定 15分后 ,记录细胞团搏动
作为对照值。给药组加入 TFC50ug /ml( pH6. 6,终浓
度 ) ,对照组加入等容量生理盐水 ( ( N S, pH6. 6) ,通
过光电换能装置连续观察 30分心肌细胞团搏动变
化 ,记录规则节律出现和持续时间。
2. 3　 CaCl2所致培养大鼠心肌细胞正性频率作用实
验: 选培养 3～ 4天 ,搏动节律规则 ,频率为 100～
130次 /min细胞团 ,随机分为对照组、 T FC组、 Ver
组。 于倒置显微镜下恒温静置 15分 ,记录搏动频率
作为对照值 ,加入 NS、 TFC50或 100μg /ml, Ver0.
25μg /ml,于 5分末记录搏动频率 1次 ,之后每隔 5
分累加 CaCl2 1次。记录加 CaCl2后 1分末的搏动频
率 ,直至出现最大反应 ,绘制 CaCl2累积量 -效曲线
(剂量 -搏动频率关系曲线 )。
2. 4　 Iso所致培养大鼠心肌细胞正性频率作用实
验: 选培养 3～ 4天搏动节律规则的细胞团 ,倒置显
微镜下恒温静置 15分 ,在无菌条件下加入 Iso10- 5
g /ml(终浓度 ) ,选择对 Iso反应性良好的细胞团 ,清
洗、换液后静置培养 10小时以上 ,再置镜下稳定 15
分 ,记录搏动频率作为对照值。加无菌 N S再记录搏
动频率 ,以后每隔 3分累加 Iso1次 ,直至出现最大
反应。选择量效反应良好的细胞团 ,清洗后加入新鲜
培养基 ,静置培养 3～ 6小时后 ,选择搏动频率恢复
接近对照值的细胞团 ,置镜下稳定 15分 ,记录搏动
频率作为给药前对照值 ,加入 TFC50μg /ml或
Pro0. 5μg /ml,记录 5分末的搏动频率 ,同法累加 Iso
至最大反应。 以 NS组最大反应的搏动频率与其对
照值之差作为 100% ,计算各浓度 Iso反应的搏动频
率与对照值差的% ,绘制 N S组、 TFC组、 Pro组的
Iso累积量 -效曲线 (剂量与最大反应%关系曲线 )。
3　实验结果
3. 1　 TFC对培养大鼠心肌细胞自发性搏动节律失常
的影响:对照组给 NS后 30分内 , 8瓶培养心肌细胞团
的自发性搏动节律失常未见明显变化。 TFC50μg /ml
可明显对抗心肌细胞自发性搏动节律失常 ,单纯型 11
412000年 10月 (第 6卷 )第 4期　　　　　　　中国民族医药杂志DOI : 10. 16041 /j . cnki . cn15 -1175. 2000. 04. 034
瓶中有 9瓶于药后 1. 4± 1. 3分转变为规则节律 ,持续
时间从 2. 6分至 30分以上 ,平均 18. 5± 11. 4分 ,转规
率为 82%。 纤扑型 8瓶中有 5瓶于药后 1. 7± 1. 6分
转变为规则节律 ,持续时间从 1. 9分至 20分 ,平均
12. 1± 9. 4分 ,转规率为 62%。
3. 2　 TFC对 CaCl2所致培养大鼠心肌细胞正性频
率作用的影响: 培养 2～ 3天的心肌细胞团 ,给 N S
后 CaCl2正性频率作用的累积剂量为 100～ 600μg /
ml时 ,呈良好的量- 效反应关系。搏动频率从 122±
15增至 179± 23次 /min,平均增加 46. 7%。 TFC具
有明显钙拮抗作用 ,与 NS组相比 , TFC50μg /ml,使
CaCl2累积量 - 效曲线明显右移 ,最大反应率降低
27. 2% ( P < 0. 01) ; T FC100μg /ml使曲线右移更明
显 , 最大反应率降低 37. 9% ( P < 0. 001); Ver0.
025μg /ml,也可使曲线明显右移 ,最大反应率降低
18. 4% P < 0. 01)。 见图 1、表 1。
表 1　 T FC对 CaCl2所致培养心肌细胞正性频率作用的影响 ( X± S, n= 8)
组别 剂　量
(μg /m l)
给 CaCl2前正性频率
心肌细胞团对 CaCl2g /ml)的反应 (次 /min)
100 200 400 600 700 800 1000 1100
NS 30μl 122± 15 132± 18 139± 17 151± 21 179± 23 160± 19 156± 23 148± 24 —
TFC 50 116± 14 131± 12 134± 14 138± 18* * 138± 16* * 141± 15* * 136± 20* 131± 14 —
100 120± 15 — — — 91± 20* * * 108± 16* * * 106± 19* * * 102± 20 —
Ver 0. 025 118± 16 — — 92± 11* * 119± 15* * * 127± 17* * * 134± 16* * 146± 18* * 128± 20
与 NS组相比* P < 0. 05, * * P < 0. 01,* * * P < 0. 001。
3. 3　 TFC对 Iso所致培养大鼠心肌细胞正性频率
作用的影响: 培养 2～ 3天的心肌细胞团 ,对照组给
NS　 20μ1 /ml后 ,随 Iso剂量增加 ,搏动频率从 101
± 16增至 165± 20次 /min,平均增加 63. 4% ,对 Iso
呈现良好的反应性。 Pro0. 5μg /ml可使 I SO量 -效
曲线明显右移 ,最大反应不降低 ,给药后最大反应百
分率为 99. 4± 1. 6% ,最大反应频率为 160± 21次 /
min,呈明显的竞争性拮抗作用 ,见图 2。 TFC　
50μg /ml则使曲线非平行右移 ,最大反应显著降低 ,
给药后的最大反应百分率为 68. 7± 12. 6% ,最大反
应频率由 163± 12降至 141± 18%。 见图 2。
4　讨　论
本文发现 T FC对培养大鼠心肌细胞团自发性
搏动节律失常具有明显的对抗作用 ,与苦参总黄酮
和沙棘总黄酮的结果相一致〔5、 6〕 ,从而证实 TFC不
论在整体水平或细胞水平均具有抗心律失常作用。
TFC能使 CaCl2累积量 - 效曲线明显右移 ,最大反
应降低 ,表明 TFC可能具有钙拮抗作用 ,而钙拮抗
作用又是目前许多抗心律失常药的作用机理之一 ,
表明 TFC的抗心律失常作用可能与此有关。儿茶酚
胺能使培养心肌细胞的搏动频率明显增加 ,认为是
通过 β受体兴奋所致〔7〕。 本文亦证实 TFC能使 Iso
累积量 -效曲线明显右移 ,最大反应显著降低 ,但与
Pro的作用不同。上述结果提示 , TFC的抗心律失常
作用 ,主要是对心肌细胞的直接作用 ,钙拮抗作用可
能是其抗心律失常作用的主要机制之一。此外 , T FC
的抗心律失常作用是否也与 β受体阻滞作用有关 ,
还有待进一步研究。
参考文献
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2000年 6月 30日收稿
42 中国民族医药杂志　　　　　　　 2000年 10月 (第 6卷 )第 4期